鸡雌激素E酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docx

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1、鸡雌激素（E）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T2.Ong/L-60ng/L使用目的；本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中雌激素（E）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡雌激素（E）.用纯化的鸡雌激素（E）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌激素（E）,再与HRP标记的雌激素（E）抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌激素（E）呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算

2、样品中鸡雌激素（E）浓度。试剂盒组成130倍浓20mlXl瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(120ng/L)0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中

3、进行稀释。60ng/L5号标准品150NI的原倍标准品加入150间标准品稀释液30ng/L4号标准品150用的5号标准品加入150用标准品稀释液15ng/L3号标准品150间的4号标准品加入150用标准品稀释液7.5ng/L2号标准品150用的3号标准品加入150用标准品稀释液3.75ng/L1号标准品150l的2号标准品加入150UI标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品IOgl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触

4、及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后37fC温育30分钟。4.配液：将30倍浓30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掠封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀，37C避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50l,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，45Onm波长依序测量各孔的吸光度（0D值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总：，根据样品的OD值计算出标再乘以稀释倍

5、数,计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时靖最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉。6.底物清避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不I司批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存：2-80。2.有效期：6个月