妇产科资料贡献.ppt

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1、1MMP-7及及uPA在卵巢浆液性在卵巢浆液性囊 腺 癌 中 的 表 达 及 意 义囊 腺 癌 中 的 表 达 及 意 义2研究背景研究背景卵巢癌是女性三大生殖道恶性肿瘤之一，发病率为卵巢癌是女性三大生殖道恶性肿瘤之一，发病率为2.4%-5.6%2.4%-5.6%，仅次于宫颈癌和宫体癌，仅次于宫颈癌和宫体癌卵巢深居盆腔，早期临床症状不明显卵巢深居盆腔，早期临床症状不明显发展迅速，极易出现盆腹腔播散和淋巴结转移，手发展迅速，极易出现盆腹腔播散和淋巴结转移，手术或化疗后的高复发率也是造成死亡率高居不下的术或化疗后的高复发率也是造成死亡率高居不下的原因之一原因之一寻找卵巢癌特异性标志物，早期诊断及防

2、止卵巢癌寻找卵巢癌特异性标志物，早期诊断及防止卵巢癌的扩散、转移及复发成为当今防治卵巢癌的关键的扩散、转移及复发成为当今防治卵巢癌的关键3研究背景研究背景基底膜和胞外基质的降解是当今肿瘤学研究的重基底膜和胞外基质的降解是当今肿瘤学研究的重点和难点点和难点。（图1）多种蛋白酶在分解细胞外基质和基底膜中起着极多种蛋白酶在分解细胞外基质和基底膜中起着极其重要的作用，尤其是基质金属蛋白酶类和丝氨其重要的作用，尤其是基质金属蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类酸蛋白酶类 MMP-7MMP-7和和uPAuPA分别属于基质金属蛋白酶类和丝氨酸分别属于基质金属蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类蛋白酶类4nLamininRMMP7P

3、MMP7MMP75MMP-7概述概述MMP-7是基质金属蛋白酶家族中唯一的由上皮性是基质金属蛋白酶家族中唯一的由上皮性肿瘤细胞特异表达的酶肿瘤细胞特异表达的酶MMP-7是一种锌离子依赖性的蛋白水解酶是一种锌离子依赖性的蛋白水解酶MMPs是一多基因家族，目前已经分离并鉴定出这是一多基因家族，目前已经分离并鉴定出这一家族约有一家族约有13个成员，作用底物不尽相同个成员，作用底物不尽相同6 分型分型 MMP MMP序号序号 底物底物间质胶原酶间质胶原酶MMP-1MMP-1、-8-8、-13-13、-18-18型胶原及型胶原及和和型胶原型胶原型胶原酶型胶原酶（明胶酶）（明胶酶）MMP-2 MMP-2、

4、-9-9、型胶原，切割天然型胶原，切割天然、型胶原型胶原基质溶解素基质溶解素MMP-3MMP-3、-7-7、-10-10纤粘蛋白、层粘蛋白、弹性蛋纤粘蛋白、层粘蛋白、弹性蛋白和多糖核心蛋白白和多糖核心蛋白膜型膜型MMPsMMPsMMP-14MMP-14、-15-15、-16-16、MT5-MMPMT5-MMP直接降解基质，激活直接降解基质，激活MMP-2MMP-2和和MMP-13MMP-13其它类其它类MMP-4MMP-4、-5-5、-6-6、-20-20未知未知StetlerStevenson将MMPs分类及底物特性总结如下表分类及底物特性总结如下表7MMP-7的独特性的独特性MMP-7不含

5、有类血红素结合区，血管内皮细胞不分不含有类血红素结合区，血管内皮细胞不分泌泌MMP-7MMP-7主要由纤维母细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞所主要由纤维母细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞所分泌分泌 MMP-7活化活化8MMP-7Pro-MMP-7TC巨噬细胞TC TC纤维母细胞巨噬细胞纤维母细胞ECM、BM降解降解PLGPLMMMPs9uPA概述概述uPA是是PA的一种，与肿瘤浸润转移相关的一种，与肿瘤浸润转移相关uPA由两条二硫键相连，由两条二硫键相连，N端包括表皮生长因端包括表皮生长因子（子（EGF）功能区，它介导）功能区，它介导uPA与肿瘤细胞与肿瘤细胞上上uPAR结合，降解结合，降解ECM、BM10u

6、PA的独特性的独特性uPA自身直接降解自身直接降解BM、ECMuPA通过激活纤溶酶降解纤维蛋白、纤维连接蛋白、通过激活纤溶酶降解纤维蛋白、纤维连接蛋白、蛋白多糖、板层素等蛋白多糖、板层素等uPA通过激活的纤溶酶激活基质金属蛋白酶参与通过激活的纤溶酶激活基质金属蛋白酶参与ECM、BM降解降解11TCuPA内皮细胞内皮细胞纤维母细胞巨噬细胞巨噬细胞Pro-upa纤溶酶纤溶酶纤溶酶原纤溶酶原uPA-RTCTCECM、BM降解降解TC12本实验研究的内容和意义本实验研究的内容和意义 采用免疫组化法检测正常卵巢组织、卵巢浆液性肿采用免疫组化法检测正常卵巢组织、卵巢浆液性肿瘤中瘤中MMP-7和和uPA 的

7、表达的表达探讨探讨MMP-7、uPA与卵巢浆液性囊腺癌浸润转移与卵巢浆液性囊腺癌浸润转移的关系及其相关性的关系及其相关性为卵巢浆液性囊腺癌术后的腹腔化疗及残存癌灶的为卵巢浆液性囊腺癌术后的腹腔化疗及残存癌灶的复发提供可靠的理论依据复发提供可靠的理论依据13 材料和方法材料和方法取取2000年至年至2006年兰大二院妇科手术切除并病理证年兰大二院妇科手术切除并病理证实为卵巢浆液性肿瘤库存标本实为卵巢浆液性肿瘤库存标本68例，年龄例，年龄20-70岁岁.其中其中46例卵巢浆液性囊腺癌（恶性组），例卵巢浆液性囊腺癌（恶性组），12例卵巢例卵巢浆液性囊腺瘤（良性组），浆液性囊腺瘤（良性组），10例正常

8、卵巢（正常组例正常卵巢（正常组）临床分期：临床分期：期期-期期14例；例；期期-期期32例例病理分级：高分化病理分级：高分化10例，中分化例，中分化16例、低分化例、低分化20例例经查阅患者病例将卵巢浆液性囊腺癌组分为：有盆经查阅患者病例将卵巢浆液性囊腺癌组分为：有盆腔浸润，腹膜淋巴转移组腔浸润，腹膜淋巴转移组42例，无盆腔浸润，无腹例，无盆腔浸润，无腹膜淋巴转移组膜淋巴转移组4例例14 主要仪器主要仪器 低温冰箱、烘箱、微波炉、光学显微镜、低温冰箱、烘箱、微波炉、光学显微镜、显微照相系统、水浴振荡器、电热炉带盖显微照相系统、水浴振荡器、电热炉带盖的保湿器、耐高温塑料染色架、切片架、的保湿器、

9、耐高温塑料染色架、切片架、染色缸、吸水纸等染色缸、吸水纸等15实验方法实验方法本实验依照免疫组化的步骤进行本实验依照免疫组化的步骤进行16 结果判定结果判定采用三个参数（即染色强度、阳性细胞数、和两者采用三个参数（即染色强度、阳性细胞数、和两者积分的乘积）的半定量的计数方法，着色强度记分积分的乘积）的半定量的计数方法，着色强度记分标准：基本未着色标准：基本未着色,染色与背景相似者为染色与背景相似者为0分分;着色浅着色浅,略高于背景者为略高于背景者为1分分;中度着色中度着色,明显高于背景者为明显高于背景者为2分分;强染强染,着色深棕色者为着色深棕色者为3分。阳性细胞数分。阳性细胞数0%为为0分，

10、分，1%-10%为为1分，分，11%-50%为为2分，分，51%-80%为为3分分，80%为为4分。染色强度记分与阳性细胞数记分之分。染色强度记分与阳性细胞数记分之积为最后得分：积为最后得分：0分为（分为（-），），1-2分为（分为（+），），3-4分分为（为（+），），4分为（分为（+）。）。17 统计学方法统计学方法应用应用SPSS10.0统计软件包进行统计分析统计软件包进行统计分析组间采用卡方检验，双向有序列联分析组间采用卡方检验，双向有序列联分析例数不足例数不足40例采用费歇尔精确检测例采用费歇尔精确检测两指标间采用两指标间采用Spearsman等级相关分析等级相关分析取取P0.05为

11、差异有统计学意义为差异有统计学意义18MMP-7和和uPA在正常卵巢组织和卵在正常卵巢组织和卵巢浆液性肿瘤组织中的表达巢浆液性肿瘤组织中的表达MMP-7在卵巢浆液性囊腺癌细胞的胞膜、胞浆和在卵巢浆液性囊腺癌细胞的胞膜、胞浆和间质细胞的胞浆中均有阳性表达；主要表达于深间质细胞的胞浆中均有阳性表达；主要表达于深部浸润的癌巢，尤其在浸润的前沿；在卵巢浆液部浸润的癌巢，尤其在浸润的前沿；在卵巢浆液性囊腺瘤细胞的胞浆和间质中也有阳性表达性囊腺瘤细胞的胞浆和间质中也有阳性表达uPA蛋白在卵巢浆液性囊腺癌细胞的胞膜和胞浆蛋白在卵巢浆液性囊腺癌细胞的胞膜和胞浆中有阳性表达，分布不均中有阳性表达，分布不均,主要

12、在肿瘤与周围正常主要在肿瘤与周围正常组织交界处、肿瘤细胞与间质交界处组织交界处、肿瘤细胞与间质交界处19MMP-7MMP-7和和uPAuPA在正常卵巢组织和卵巢浆液性在正常卵巢组织和卵巢浆液性肿瘤组织中的表达肿瘤组织中的表达 分组分组 例数例数 MMP-7 uPA +%P +%P 正常组正常组 10 1 10.0 1 10.0 0.594 0.323 良性组良性组 12 2 16.7 4 33.3 0.001 0.001 恶性组恶性组 46 40 87.0 40 87.020MMP-7MMP-7和和uPAuPA在卵巢浆液性囊腺癌不同临在卵巢浆液性囊腺癌不同临床分期中的表达床分期中的表达 MMP

13、-7 uPA 分期分期 例数例数 +-期期 14 2 2 10 1 6 6 -期期 32 8 7 11 7 2 1821MMP-7MMP-7和和uPAuPA在卵巢浆液性囊腺癌不在卵巢浆液性囊腺癌不同病理分级中的表达同病理分级中的表达 MMP-7 uPA 分级分级 例数例数+高分化高分化10 6 1 1 5 2 1 中分化中分化16 2 6 6 2 4 8 低分化低分化 20 2 2 14 1 2 1522MMP-7MMP-7及及uPAuPA与卵巢浆液性囊腺癌浸润转与卵巢浆液性囊腺癌浸润转移的关系移的关系浸润浸润 MMP-7 uPA转移转移 例数例数 +%P +%P 有有 42 38 90.5

14、39 92.9 0.022 0.001 无无 4 2 50.0 1 25.023MMP-7MMP-7和和uPAuPA表达的相关性表达的相关性 n经经Spearman等级相关分析得等级相关分析得r=0.573，P0.05,说明说明MMP-7与与uPA的表达存在正相关，的表达存在正相关，MMP-7的表达的表达随随uPA表达的增高而增高。表达的增高而增高。24MMP-7MMP-7和和uPAuPA表达的相关性表达的相关性 MMP-7 uPA -+合计合计-18 2 2 1 23+2 8 1 2 13+1 2 2 3 8+1 2 5 16 24合计合计 24 13 9 21 6825 结结 论论MMP-

15、7MMP-7和和uPAuPA在正常卵巢组织和卵巢浆液性肿瘤中均有在正常卵巢组织和卵巢浆液性肿瘤中均有表达表达MMP-7MMP-7和和uPAuPA在卵巢浆液性囊腺癌表达明显高于卵巢浆在卵巢浆液性囊腺癌表达明显高于卵巢浆液性囊腺瘤，液性囊腺瘤，MMP-7MMP-7和和uPAuPA有助于卵巢浆液性肿瘤良恶有助于卵巢浆液性肿瘤良恶性的判断性的判断MMP-7MMP-7和和uPAuPA的表达随卵巢浆液性囊腺癌病理分级的降的表达随卵巢浆液性囊腺癌病理分级的降低、癌肿及淋巴转移而增高。低、癌肿及淋巴转移而增高。uPAuPA随临床分期的增高随临床分期的增高而增高而增高MMP-7MMP-7的表达强度与的表达强度与

16、uPAuPA的表达强度存在正相关的表达强度存在正相关26MMP-7MMP-7在正常卵巢生发上皮弱阳在正常卵巢生发上皮弱阳性表达性表达S-Px200S-Px20027 MMP-7在良性卵巢浆液性囊腺在良性卵巢浆液性囊腺瘤中弱阳性表达瘤中弱阳性表达SP x40028MMP-7在卵巢高分化浆液性腺癌在卵巢高分化浆液性腺癌中弱阳性表达中弱阳性表达SP x200 29MMP-7在卵巢高分化浆液性腺癌在卵巢高分化浆液性腺癌中弱阳性表达中弱阳性表达SP x400 30MMP-7在卵巢中分化浆液性腺癌在卵巢中分化浆液性腺癌中强阳性表达中强阳性表达SP x400 31MMP-7在卵巢低分化浆液性腺癌在卵巢低分化浆液性腺癌中强阳性表达中强阳性表达SP x20032MMP-7单个肿瘤细胞浸润单个肿瘤细胞浸润 SP x40033 MMP-7肿瘤细胞在间质浸润时肿瘤细胞在间质浸润时呈强阳性表达呈强阳性表达 SP x40034图1.MMP-7在卵巢浆液性囊腺癌的强阳性表达SP400 35图2.uPA在卵巢浆液性囊腺癌中强阳性表达SP400Fig2 Strong positive expression of uPA