编制说明-实验动物 细菌核酸检测试剂国家参考品研制的标准规程.docx

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1、中国实验动物学会团体标准实验动物细菌核酸检测试剂国家参考品研制的标准规程编制说明中国实验动物学会团体标准实验动物细菌核酸检测试剂国家参考品研制的标准规程编制说明（一）工作简况，包括任务来源、协作单位本标准由中国实验动物学会提出，中国实验动物学会实验动物标准化技术委员会归口,根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会（以下简称专委会）有关文件及GB“16733国家标准制定程序的阶段划分及代码和采用快速程序制定国家标准的管理规定的要求，结合实验动物专业具体情况，特制定本标准。由吉林大学、南方医科大学、中国医学科学院医学实验动物研究所、中国食品药品检定研究院按照中国实验动物学会团体标准编写规范编制

2、起草。（二）主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工作等；2022年3月，召开了本课题启动会和第一次研讨会。课题负责人就课题目标、研究内容、工作进度、课题管理、经费使用、知识产权等几个方面提出了工作设想，并对课题的研究任务做了具体分工。2022年3月，完成了对收集到的国内外相关标准及相关资料数据的整理、分析，对已经建立的实验动物细菌核酸检测试剂国家参考品研制的标准规程进行整理。起草小组制定了标准初稿，发送国内实验动物学专家、有关重要企事业单位，公开征求意见。2022年4月，起草小组针对专家提出的关于格式、关键内容、技术指标、附录问题意见和建议对标准草案进行了修订。并向全国实验动物标准化技术委员

3、会提交了实验动物标准制订计划项目提案表和团标草案。2022年10月，收到全国实验动物标准化技术委员立项通知，按照标委会团标撰写要求，对团标草案进行了进一步修订，并面向省内外实验动物相关企事业单位公开征求意见。2022年12月，起草小组整理汇总专家对本标准征求意见稿提出的问题，同时对标准格式进行了规范，最终形成标准送审稿、编制说明等材料，送交中国实验动物学会实验动物标准化委员会秘书处。本标准由吉林大学、南方医科大学、中国医学科学院医学实验动物研究所、中国食品药品检定研究院共同起草，起草人为袁宝、朱玉峰、高飞、张西臣、张楠、向志光、苏磊、付瑞。袁宝负责组织协调，统筹分工；朱玉峰、高飞负责检测方法建

4、立和标准撰写；张楠负责方法验证；张西臣负责编制说明撰写；向志光责查阅文献、征求意见；苏磊，付瑞负责修订。（三）标准编写背景；近几年对实验动物质量监测结果显示，某些致病菌感染呈阳性事件时有发生，对实验动物产业已造成重大的经济损失。目前我国实验动物微生物等级及检测标准GB/T14926.114926.49-2001,针对这些致病菌采用的是传统分离培养及生化鉴定方法进行检测。虽然国标方法为实验动物质量检测的金标准，但此方法耗时较长，且对实验人员的专业素质要求较高，不能满足大规模实验动物质量的维护监测。核酸检测方法对于致病菌的检测已广泛应用在实验动物质量监测中，该方法具有准确、灵敏、易操作等优势，以此

5、为基础研发的核酸检测试剂已成为各相关企业研发的主流产品。但是，尚无实验动物相关的国家参考品供企业对其研发的试剂进行质量控制和评价，为解决这一问题，亟需对实验动物国家参考品的研制标准进行统一规范。该标准的建立对企业研发相关检测产品的质量控制和评价至关重要，是相关产品注册检验以及上市审批的重要物质基础。（四）标准编制原则；本标准在制定中应遵循以下基本原则：a）本标准编写格式应符合GBTl.l2000的规定；b）本标准规定的技术内容及要求应科学、合理，具有适用性和可操作性；c）本标准的水平应达到国内领先水平。（五）确定标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）的论据（包括

6、试验、统计数据），修订标准时，应增列新旧标准水平的对比；1 .主要内容对实验动物细菌核酸检测试剂国家参考品的均匀性、稳定性、准确性、特异性、重复性、最低检出限、协作标定内容进行规范，对评测结果进行评价。2 .材料以国内或国际菌种保藏机构的菌株作为参考品制备所用菌株；三个不同厂家的核酸检测试剂；细菌DNA提取试剂；中国细菌浊度标准国家标准品；细菌培养基；无菌生理盐水。3 .方法3.1 均匀性分析：随机抽取阳性参考品（PlPn）、重复性参考品各n管，以及最低检出限参考品，使用阳性参考品菌株的核酸检测试剂进行检测，重复23次。3.2 加速稳定性:将阳性参考品（PlPn）和最低检出限参考品，分别于28

7、、室温（25）、37的环境下放置3d、7d0用阳性参考品菌株的核酸检测试剂进行检测，重复23次。同时以-20C保存的参考品作为检测对照。3.3 冻融稳定性：将阳性参考品（PlPn）和最低检出限参考品，分别从.20及以下冷冻环境中取出，在室温（25）环境中放置4h后，再重新放入-20C及以下冷冻环境中，重复冻融35次。用阳性参考品菌株的核酸检测试剂进行检测，同时以-20保存的参考品作为检测对照。3.4 准确性：阳性参考品符合率，将阳性参考品（PlPn）分别用不同来源的核酸检测试剂进行检测，每份样本重复检测23次，每个试剂分别进行23次独立实验，检测阳性参考品符合率。阴性参考品符合率，将阴性参考品

8、（Nl-Nn）分别用不同的核酸检测试剂进行检测，每份样本重复检测23次，每个试剂分别进行23次独立实验，检测阴性参考品符合率。3.5 重复性：将5管以上的重复性参考品，分别不同的核酸检测试剂进行检测，每份样品重复检测10次及以上，每个试剂分别进行23次独立实验。3.6 最低检出限：取LOXIO5个/mL、1.0xl（）4个/mJLOXlo3个/mL、LoXlo2个/mL、LOXlOl个mL五个浓度的最低检出限参考品，分别用不同的核酸检测试剂进行检测，每份样本重复检测23次，每个试剂分别进行23次独立实验，评价检测试剂的最低检出限。3.7 参考品协作标定：对阳性参考品、阴性参考品、重复性参考品和

9、最低检出限参考品进行编盲，分别发给三家及以上核酸诊断试剂生产企业实验室进行协作标定，分别使用各自的检测试剂进行准确性、特异性、重复性和最低检出限检测分析，并进行23次独立实验，最后将所有原始结果返还协作标定组织单位汇总分析。4 .实验结果4.1 均匀性分析：计算批内不同样品Ct值的变异系数，变异系数小于5.0%,表明参考品的分装均匀度良好。4.2 加速稳定性：计算批内样品Ct值的变异系数，变异系数小于10%且P值大于0.05,则表明加速稳定性良好。4.3 冻融稳定性：计算批内样品Ct值的变异系数，变异系数小于10%且P值大于0.05,则表明冻融稳定性良好。4.4 准确性：试剂能够准确的检出阳性

10、参考品和阴性参考品，符合率达到100%,则表明准确性良好。4.5 重复性：计算批内变异系数（CV）,变异系数小于5%,表明重复性良好。4.6 最低检出限：检测试剂能够检测出LOXl（P个mL浓度的菌液为良好；检测出LOXlO2个L浓度的菌液为优。4.7 参考品协作标定：协作标定组织单位汇总所有核酸生产厂家检测的结果，综合判断细菌核酸试剂参考品的评测效果。（六）主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果；本标准的提出，将对实验动物细菌核酸检测试剂国家标准品的研制方法及评价指标做出统一规范，对参考品的均匀性、稳定性、准确性、特异性、重复性、最低检出限、协作标定等方面评价指标做

11、出统一技术要求。以提高实验动物细菌核酸检测试剂的质量，为我国实验动物微生物学等级监测提供有力保障。（七）采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况；目前没有相应的国际标准。（八）与有关的现行法律、法规和强制性标准的关系；本标准的编制依据为现行的法律、法规和国家标准，与这些文件中的规定相一致。目前实验动物国标中没有细菌核酸检测试剂国家参考品研制的标准规程。（九）重大分歧意见的处理经过和依据；从标准结构框架和制定原则的确定、标准的引用、有关技术指标和参数的试验验证、主要条款的确定直到标准草稿征求专家意见（通过函寄和会议形式多次咨询和研讨），均未出现重大意见分歧的情况。（十）标准作为强制性标准或推荐性标准的建议；作为推荐性标准（十一）贯彻标准的要求和措施建议（包括组织措施、技术措施、过渡办法等内容）；建议由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会组织本标准的宣传、推广和实施监督。（十二）废止现行有关标准的建议;无（十三）其他应予说明的事项。无