食品质量检测.ppt

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1、第一节第一节 培养基培养基一、培养基中的主要成分及其作用一、培养基中的主要成分及其作用（一）、营养物质（一）、营养物质 N源、源、C源、无机盐、生长因子、水源、无机盐、生长因子、水蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏肉浸汁肉浸汁酵母膏酵母膏1、常用的、常用的N源物质源物质（1）蛋白胨）蛋白胨有：有：普通蛋白胨普通蛋白胨示胨示胨胰蛋白胨胰蛋白胨（2）牛肉浸液）牛肉浸液成份：含氮物：含氮物：肌酸、嘌吟、核苷酸尿酸肌肽等肌酸、嘌吟、核苷酸尿酸肌肽等 糖类物质：葡萄酒糖类物质：葡萄酒3肝糖、肝糖、P-已糖已糖 生长因子：硫胺、核黄素、泛酸、叶酸等生长因子：硫胺、核黄素、泛酸、叶酸等8种种B族维生素族维生素（3）组

2、织浸液）组织浸液 组织浸液，主要为微生物生长繁殖提供可溶性含氮物质、核酸降解物、维生素及无机盐等，补充蛋白胨营养成分的不足部分。包括动物组织浸液、植物组织浸液、微生物细胞浸液。2、糖、醇类物质、糖、醇类物质单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖多糖：淀粉、纤维素、菊糖多糖：淀粉、纤维素、菊糖 醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油（二）、水（二）、水用蒸馏水，不能用自来水用蒸馏水，不能用自来水（三）、凝固剂（三）、凝固剂琼脂、明胶、血清等琼脂、明胶、血清等 要求：清一色、杂质少要求：清一色、杂质少（四）

3、、抑制剂（四）、抑制剂1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率的检出率2、种类：、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素（五）、指

4、示剂（五）、指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。2、常用的指示剂：、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等二、培养基的类型二、培养基的类型 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。（一

5、）、根据培养基的物理状态来区分（一）、根据培养基的物理状态来区分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基主要用于增菌培养、鉴别性培养。主要用于增菌培养、鉴别性培养。1、液体培养基、液体培养基2、固体培养基、固体培养基用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等3 3、半固体培养基、半固体培养基 观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。增殖培养基增殖培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基 （二）、根据培养基的用途来区分（二）、根据培养基的用途来区分1 1、增殖培养基

6、、增殖培养基 在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。B2胆盐乳糖培养基（BL）大肠杆菌增菌B3亚硒酸盐增菌培养基沙门氏菌增菌B4亚硒酸盐半胱氨酸增菌培养基食品中沙门氏菌增菌B5四硫磺酸钠亮绿基础培养基沙门氏菌增菌B6GN肉汤培养基志贺氏菌增菌B7碱性蛋白胨水培养基霍乱弧菌增菌B87.5%氯化钠肉汤培养基金黄色葡萄球菌增菌B9缓冲蛋白胨水培养基沙门氏菌增菌B10血液增菌培养基血液中细菌

7、增菌B11SCDLP液体基础培养基化妆品中细菌增菌增菌、运送用培养基增菌、运送用培养基2 2、选择培养基、选择培养基 在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。名 称 用 途SS琼脂培养基 沙门氏和志贺氏菌属分离HE琼脂培养基志贺氏菌分离鉴别伊红美蓝琼脂培养基 大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别麦康凯琼脂培养基（MacC）肠道致病菌分离甘露醇高盐琼脂培养基）绿脓杆菌分离鉴别XLD琼脂培养基志贺氏、沙门氏菌分离中国蓝琼脂培养基肠道菌分离鉴别碱性琼脂培养基霍乱弧菌分离高盐蔡氏琼脂培养基真菌、酵母菌分离分离培养用的培养基分离培养用的培养基3、鉴别培养基、鉴别培养基 在培养

8、基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。鉴别用培养基鉴别用培养基名名 称称用用 途途蛋白胨水培养基蛋白胨水培养基靛基质和霍乱红试验靛基质和霍乱红试验乳糖胆盐发酵培养基乳糖胆盐发酵培养基大肠杆菌发酵乳糖试验大肠杆菌发酵乳糖试验0.5%0.5%乳糖发酵培养基乳糖发酵培养基肠道菌生化试验（复发酵）肠道菌生化试验（复发酵）半固体培养基半固体培养基动力试验和菌种保存动力试验和菌种保

9、存三糖铁琼脂培养基（三糖铁琼脂培养基（TSTTST）肠杆菌糖发酵及硫化氢反应肠杆菌糖发酵及硫化氢反应氰化钾基础培养基氰化钾基础培养基沙门氏菌分离沙门氏菌分离脱羧酶试验对照培养基脱羧酶试验对照培养基细菌脱羧酶试验细菌脱羧酶试验（三）培养基制备的基本方法和注意事项（三）培养基制备的基本方法和注意事项 培养基的制备记录 培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化 培养基pH的初步调正 培养基的过滤澄清 培养基的分装培养基的灭菌培养基的质量测试培养基的保存 1、培养基的制备记录、培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种

10、成份的牌号，最终方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等。度和时间制备的日期和制备者等。记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。的培养基一同存放、以防发生混乱。2 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取成分即在配方上面做出记

11、号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。取完毕后，还应进行一次检查。3 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 指示剂应在调节好指示剂应在调节好PH值后再加入；值后再加入；煮溶后要补加足水份；煮溶后要补加足水份；不能把培养基煮焦，焦化的不能使用。不能把培养基煮焦，焦化的不能使用。4 培养基培养基pH的校正的校正 灭菌后灭菌后PH值会下降值会下降0.10.2，在做培养基校，在做培养基校正正PH值时，应比实际值高值时，应比实际值高0.10.2；PH调整后，还应将培养基煮沸。

12、调整后，还应将培养基煮沸。液体培养基可用滤纸过滤法液体培养基可用滤纸过滤法 琼脂培养基琼脂培养基,可用中间夹有薄层吸水可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤棉的双层纱布过滤5 培养基的过滤澄清培养基的过滤澄清培养基的分装培养基的分装斜面：斜面：1/管管半固体培养基：半固体培养基：1/3管管 高层斜面：高层斜面：1/41/3管管 平板：平板：1315ml7 培养基的灭菌培养基的灭菌（1）含糖类或明胶的培养基：）含糖类或明胶的培养基：113灭菌灭菌15分钟分钟或或115灭菌灭菌10分钟。分钟。（2）无糖培养基：）无糖培养基：121灭菌灭菌1520分钟。分钟。（3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽

13、取）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约后再加入冷却至约50左右的培养基中。左右的培养基中。（4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55-60时取出，再摆置成适当斜面。时取出，再摆置成适当斜面。8 培养基的质量测试培养基的质量测试（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。（）将全部培养基放入（）将全部培养基放入361C恒温箱培养过夜，恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。如发现有菌生长，即弃去。（）用有关的标准菌株接种（）用

14、有关的标准菌株接种12管或瓶培养基，培管或瓶培养基，培养养2448小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。弃去，不能使用。9 9 培养基的保存培养基的保存 （1）基础培养基不能超过两周）基础培养基不能超过两周（2）生化试验培养基不宜超过一周，）生化试验培养基不宜超过一周，（3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过板培养基不宜超过3天。天。培养基、玻璃器皿天平秤、药匙杀菌锅(Autoclave

15、)无菌操作台(Laminarflow)1.以量桶量桶裝取適當量蒸蒸馏馏水水於玻璃容器中2.於玻璃容器上标示培养基名称1.放上秤藥紙並歸零歸零 2.以秤藥匙舀出適當量培養基(請看培養基罐上說明)傾倒培養基時小心不要沾到玻璃壁上培養基配製 溶解培養基1.清理配藥桌面與天平2.清洗秤藥匙，擦乾放回3.藥品放回藥品櫃注意事項 配藥結束1.調整分注器分注器 刻度2.分裝試管3.蓋上試管蓋培養基配製 分裝放入杀菌锅杀菌锅(Autoclave)灭菌培養基配製 灭菌加水蓋過鐵板放東西關門調整溫度時間關緊洩壓閥注意事項 杀菌锅的使用滅菌結束後，等壓力降回零壓力降回零時才可打開門進入殺菌釜之物品，蓋子不可關太緊或

16、太鬆注意事項 殺菌釜使用拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套注意事項 殺菌釜使用第二节、微生物检验的基本操作技术第二节、微生物检验的基本操作技术主要内容主要内容无菌技术M的接种与分离技术微生物的培养方法微生物的生长现象与观察一、无菌技术一、无菌技术（一）什么是无菌技术（一）什么是无菌技术指在微生物实验工作中，控制或防指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。操作方法和有关措施。（二）无菌环境（二）无菌环境无菌室无菌室无菌柜无菌柜超净工作台超净工作台1、无菌室、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间（2）无菌室的消毒和防污染无菌室的消毒和防污染每日（使用前）紫外线照射（每日（使用前）紫外线照射（12小时）小时）.每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）小时）.每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。行消毒。2、超净工作台、超净工作台 超净台的使用与保养超净台的使用与保养:（1）风速保持在）风速保