课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、尿素尿素CO(NHCO(NH2 2)2 2 重要的农业氮肥。重要的农业氮肥。只有被土壤中细菌分解为只有被土壤中细菌分解为NHNH3 3才能被植物吸才能被植物吸收利用收利用脲酶脲酶课题背景课题背景CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3（一一）筛筛 选选 菌菌 株株 KH KH2 2POPO4 4 1.4g 1.4g NaHPO NaHPO4 4 2.1g 2.1g MgSO MgSO4 4 H H2 2O 0.2gO 0.2g 葡萄糖葡萄糖 10.0g10.0g 尿素尿素 1.0g1.0g 琼脂琼脂 15.0g15.0g 将上述物质溶解后，将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100

2、0mL1000mL。该培养基的配方中，为微该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮细菌能利用尿素作为氮源而生存。源而生存。能分解尿素的细菌的筛选能分解尿素的细菌的筛选 根据培养基配方，回答下列问题：根据培养基配方，回答下列问题：方法方法 运用运用稀释涂布平板法稀释涂布平板法来来统计统计样品中的样品中的活菌活菌数。数。（二）（二）统计菌落数目

3、统计菌落数目原理原理 1 1个菌落个菌落1 1个活菌个活菌为了保证结果准确，一般选择菌落数为了保证结果准确，一般选择菌落数在在3030300300的平板上进行计数。的平板上进行计数。为使结果接近真实值，需培养计算出为使结果接近真实值，需培养计算出三个或三个以上三个或三个以上的平板菌落的平板菌落平均数平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低低。注意事项注意事项 阅读教材阅读教材2222页页“（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目”一段，并讨论一段，并讨论教材中提出的问题。教材中提出的问题。甲：没有甲：没有重复实验重复实验（至少涂布（至少涂布3 3个平板）个平板）乙：乙

4、：A A组结果误差过大，不应用于计算平均值组结果误差过大，不应用于计算平均值计算公式：计算公式：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4 B每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数=（CV）M 设置对照的主要目的是排除实验组中非测设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。度。阅读阅读P22P222323页页“（三）设置对照（三）设置对照”一段讨论教材中提出一段讨

5、论教材中提出的问题。的问题。菌落菌落计数计数制培养制培养基基样品稀释样品稀释涂布平板涂布平板土壤取样土壤取样 准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和选择培养基。选择培养基。相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显数目应明显多于多于选择培养基上的数目，因此，选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了到了选择选择作用。作用。（1 1）制培养基）制培养基（2 2）土壤取样）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消从肥沃、

6、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒处理）表层土毒处理）表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先灭菌左右，再取样，将样品装入事先灭菌过的信封中。过的信封中。稀释倍数为稀释倍数为 10101 1 10106 6。每个稀释度均用。每个稀释度均用3 3个选择培养基。个选择培养基。（3 3）样品稀释涂布）样品稀释涂布（4 4）微生物的培养与观察）微生物的培养与观察 1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌说明

7、培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。养基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功样品的稀释操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。菌落的计数。3.3.重复组的结果是否一致重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样，统计的如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各结果应该接近

8、。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。项操作过程中去分析、寻找可能的原因。能分解尿素的细菌的鉴定能分解尿素的细菌的鉴定鉴定的原理：鉴定的原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pHpH升高。升高。鉴定方法：鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。1.1.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需

9、要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是别是()()A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B.B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚 合酶。合酶。B.B.统计某一稀释度的统计

10、某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值。作为该样品菌落数的估计值。C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。4.4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（）A.A.较多的氮源物

11、质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C 5、实验测定链霉素对、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用3种细种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37条条件下恒温培养件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是下叙述，不正确的是 A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长 B

12、链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人D D 4 4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是方法依次是 ()()化学消毒化学消毒 灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 紫外线消毒紫外线消毒 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 巴氏巴氏消毒法消毒法A.A.B.B.C.C.D.D.解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温

13、，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。氏消毒法。A A5、某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察与计数。请回答与此实接种、培养及菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了培养提供了_和和_。除此之外，。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是培养基还必须含有的基本成分是_和和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。氮源氮源碳源碳源无机盐无机盐水水高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌