铁含量亚铁嗪比色法检测试剂盒说明书分光法48样.docx

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1、铁含量(亚铁嗪比色法)检测试剂盒说明书(分光法48样)一、产品简介:在酸性介质中铁从复合物中解离出来,再被还原剂还原成二价铁,并与亚铁嗪生成紫红色化合物,该有色物质在562nm处有特征吸收峰,进而计算得出铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。二、试剂盒组分与配制:试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mLI瓶4保存试剂一液体26mL1瓶4保存试剂二粉体Xl支4保存用前甩几下或离心使粉体落入底部,再加入2.4mL的蒸储水溶解备用。试剂三液体2mLxl支4C保存标准品液体ImLxl支4C保存临用前用试剂三稀释50倍(即取10L的标准品至EP管中,再加490L的试剂三),制备成2gmL的铁标

2、准品。二、所需仪器和用品:可见分光光度计、ImL玻璃比色皿(光径ICm)、可调式移液器、离心机、蒸储水。四、铁含量检测:建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!Iv样本制备:组织样本:取约0.1g组织,加入ImL提取液,进行冰浴匀浆。4oC12000rpm离心5min,取上清,置冰上待测。【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:510的比例进行提取。细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入ImL提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3s,间隔IOs,重复3

3、0次);1200OrPm4离心Iomin,取上清,置冰上待测。【注】:若增加样本量,可按照细菌,细胞数量(104):提取液(mL)为5001000:1的比例进行提取。液体样本:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。2、上机检测:可见分光光度计预热30min,设定波长到562nm,蒸储水调零。所有试剂解冻至室温,在EP管中依次加入:试剂名称(L)测定管标准管(仅做一次)空白管(仅做一次)样本240标准品240蒸储水240试剂一520520520试剂二I40I4040充分混匀,置室温15min后,若浑浊则需30(X)rpm离心5min后取全部上清液至ImL玻璃比色皿(光径1cm)中,于

4、波长562nm处读取各管吸光度A。五、结果计算:1、按照组织质量计算:铁含量(gg)=(C标准XVI)X(A测定-A空白)(A标准-A空白)(VIVxW)=2(A测定-A空白)(A标准-A空白)W铁含量(nmolg)=(C标准XVl)X(A测定-A空白):(A标准-A空白)(VI:VXW)XI(PMr=35.8IX(A测定-A空白)+(A标准-A空白)W2、按细胞数量计算:铁含量(g104cell)=(C标准XVI)X(A测定A空白):(A标准A空白H(VIVx细胞数量)=2(A测定-A空白H(A标准-A空白)4细胞数量铁含量(nmol/IO,cell)=(C标准XVI)X(A测定A空白)(A标准-A空白)(VWVx细胞数量)103Mr=35.81(A测定A空白H(A标准A空白)细胞数量3、按照液体体积计算:铁含量(gmL)=(C标准XVI)X(A测定A空白)(A标准A空白)V1=2(A测定-A空白)(A标准A空白)铁含量(molL)=(C标准XVI)X(A测定-A空白片(A标准-A空白HVlXlO3.Mr=35.81(A测定A空白H(A标准A空白)C标准铁标品浓度,2gmL;Vl加入样本体积,0.24mL:Vi提取液体积,1mL:W一样本取样质量,g;Mr铁分子量,55.847o

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