乙肝dna检测规程模板.docx

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1、乙肝dna检测规程模板乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测标准操作程序1.目的：明确乙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行乙肝病揖核酸定量的检测。2.适用范围：2.1 适用于进行乙肝病毒核酸定量检测的检验人员。2.2 适合仪器：1.ightCyc1.er型核酸扩增荧光检测仪2.3方法原理：采纳PCR方法结合荧光探针的扩增技术2.4样品要求：血清3.职责：试验操作人员应严格按操作规程进行试验。4 .试剂来源：中山高校达安基因股份有限公司HBVDNA荧光PCR检测试剂盒。5 .质控物:阴性、阳性比照及阳性参控品系列均来源于试剂盒6.标准操作：6.1试剂打算（在试剂打算区操作）6.1.1将

2、试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（Taq陶为液态试剂，临用前取出，用后马上放回冰格），完全融解后混匀。6.1.2依据当次试验标本量，取出相应试剂总的需求量于管中（其余随即放回原温度保存），如所须要的管数为n（n=标本数+1管阴性比照+1管阳性比照+1管临界阳性比照+4管阳性参控品）（定性检测无需做阳性参控品），取PCR反应管，转移至样本制备区。6.2样本制备及加样（在标本制备区操作）6.2.1取血清标本40u1.,或阴阳性比照标准品各IOu1.（强阳性标准品运用前加入稀释液90u1.混匀），加等量DNA提取液打匀，（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头嘴部太细不

3、能吸取或取样后填满吸头的现象，可先用干净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截）。沸水浴10分钟，转至49静置8-12小时以保证病毒颗粒充分裂解。6.2.2100OOrpm离心5分钟，取上清液2u1.干脆加入到PCR反应管中，6000rpm离心数秒。6.2.3将各反应管带入PCR仪。6.3PCR扩增（在扩增区操作）按仪器运用说明或标准操作程序操作。扩增条件如下：93C2分钟预变性9330秒55C60秒（40个循环）6.4结果推断：6.4.12个阴性比照的Ct值应多数值，1个强阳性比照的Ct值应小于等于30,1个临界阳性比照的C1.值应大于阳性比照的Ct值，并小于等于38,否则试验视为无效。6.4.24

4、个阳性参控品的基因拷贝浓度的对数值为横坐标，以其实际测得的Ct值为纵坐标，作标准曲线，标准曲线的拟合度R应大于等于0.990,否则应视为试验无效。定量结果分析：上述两项质控标准均满意时，可对样品进行定量分析。分析数据时，依据标准曲线F1.动计算未知标本的相应基因拷贝浓度。若发觉有标本Ct值小于15,须将其剔除此次结果分析，该标本稀释后再测直至其Ct值大于15。6.5报告6.5.1定量结果推断检测样本中HBV-DNA1.103拷贝数/m1.(copies/m1.)时，按实际检测结果报告：检测样本中HBV-DNAu03拷贝数/m1.(copies/m1.)时，均报告低于检测下限。6 .5.2报告的

5、签发依据检测结果报告程序。7 .支持性文件：7.1 乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒说明书(中山高校达安基因股份有限公司)7.2检测结果报告程序。7.3 1.igh1.CyCIer型核酸扩增荧光检测仪本记录归档周期1年保存期限5年管理编号：生化检测流程记录表试验口期一年一月本表运用说明：各项目执行后在相应的方框内打。试验室内的温度为18-28C,海度5O7O%为合格范围。试验室清洁、消毒按SOP文件执行。本表保存在归档文件夹中，存放文件柜中保存2年。日立7600生化分析仪中检验结果保存计算机中，保存2年。前期打算口记录室内温度湿度口冰箱温度:冷藏冷冻仪器在校准有效期内（校准之口起1年），开机

6、，仪器工作状况:正常口。口检查清洗液口清洁样品针、试剂针、搅拌棒、清洗头口异样：记录（包括故障及订正方法）保养记录：口检查仪器试剂量，记录添加试剂量试剂名称模块添加量试剂生产厂家批号试验纯水，记录阻值：操作者：检测记录1、中文报告录入操作者2、英文项书目入操作者3、质控批号：室内质控物来源,4、审核质控结果：在控口：失控口：失控记录（包拈订正措施）失控记录:订正措施:试验结果审核：发觉不符合项记录,无口.审核者：试验后消毒记录5、试验后：填写记录清洁地面消毒试验台面及器具打开紫外线灯，紫外线灯照耀记录灯1照耀时间灯1照耀累计时间灯2照耀时间灯2照耀累计时间注：灯I=血液分别室紫外线灯（东）：灯

7、2=血液分别室紫外线灯（西）6、口按SOP文件处理废弃物操作者：HBV-DNA荧光定量基因检测过程记录表试验口期：年_月日S1.N6.O保存文件名：O1试验前：打开通风设备温度相对湿度试剂：厂家：批号：本次试验扩增试剂：数量:人份试剂存量:人份试剂配制过程记录：其它：试验后次保养：填写记录冰箱的常规维护清洁地面口用1：100O优氯净、75%酒精消毒试验台面、打开紫外线车照耀45分钟口处理废弃物口打开紫外线灯照耀45分钟口关闭通风设备标本处理区（2区）O1试验前：打开通风设备温度相对湿度室内质控物：来源质控浓度:copies/m1.定量阳性标准品浓度：104105106107标本处理过程:取待测

8、血清一个、阳性室内质控品一个、阴性比照个各100u1.至1.5m1.离心管中向离心管加入100uIDNA浓缩液混匀12000rpm离心】0分钟去上清，沉淀加入20u1.提取液、混匀Io（TC干浴10分钟12000rpm离心5分钟向个PCR反应管中分别加入处理过的样本、阳性室内质控、阴性比照和阳性梯度标准品各2u1.,盖紧管盖，600OrPm离心1分钟。试验后次保养：填写记录冰箱的常规维护口加样器的常规维护口离心机的常规维护口恒温器的常规维护口平安柜的常规维护口清洁地面口用1：100O优氯净、75%酒精消毒试验台面、打开紫外线车照耀45分钟口打开紫处线灯照耀45分钟口处理废弃物口关闭通风设备扩增

9、分析区（3区）O1试验前：打开通风设备温度相对湿度产物扩增过程：将PCR反应管置于扩增仪上相应位置，扩增时间一小时分口设定扩增参数：预变性匕一分钟，第一步扩增c秒分钟一个循环，其次步扩增c秒c一秒一个循环测试所得标准值：Y轴截距：斜率：相关系数：阈值：室内质控结果：结果:copies/m1.填写室内质控记录、描质控图结果是否在控：是口否试验后次保养：填写记录口电脑的常规维护口S1.AN6.0的常规维护口清洁地面口用1:1000优氯净、75%酒精消毒试验台面、打开紫外线车照耀45分钟口打开紫处线灯照耀45分钟口处理废弃物口关闭通风设备操作者：审核者：年月日细菌内毒素检查法标准操作规程目的：建立细

10、菌内毒素检查的基本操作，为细菌内毒素检查人员供应正确的操作试剂打算区（1区）规程。2 .依据：中华人民共和国药典2000年版二部。3 .范围：本标准适用于细菌内毒素检查的操作。4 .职责：QC细菌内毒素检查人员对本标准的实施负责。5 .程序：6 .1.定义:1.1.1. 1.1.细菌内毒素检查法：本法系利用偻试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以推断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。1.1.2. 细菌内毒素国家标准品：系H大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁番试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。1.1.3. 细菌内毒素工作标准

11、品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每Ing工作标准品效价应不小于2EU,不大于50EUo细菌内毒素工作标准品用于试验中蜜试剂灵敏度且核干扰试验及设置的各种比照。1.1.4. 细菌内毒素检查用水:系指与灵敏度为003EUm1.或更高灵敏度的翟试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。5. 2.试验设备：电热干燥箱（503001）C、电热恒温水温箱。试验用具：注射器（精度0.02m1.）、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金屈宜镶、注射器盒、时钟。试剂：赏试剂（其标示值用表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。5. 3.用具除热原：试验中所用的试管、注射器

12、、针头、金属直镶等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金屈宜铢等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），经250C加热30分钟，除去热原。5.4. 检查法：5.4.1. 打开干净工作台的风机及照明开关，并用75对酉精棉球擦拭台面，打开恒温水温箱的开关，使水温恒定在（371）-Co5.4.2.用75%酒精棉球擦手消毒。5.4.3.内毒素阳性比照溶液的制备：5.4.3.1.取内毒素工作标准品1支,用75蛤酉精棉球消毒瓶颈，用砂轮割开瓶颈。5.4.3.2.用注射器吸取Im1.内毒素检查用水,加入到内毒素工作标准品中，混匀，作为内毒素标准品溶液，再从中取出适量，稀释成2.0浓度的内毒素溶液，作为内毒

13、素阳性比照溶液。5.4.4.供试品溶液的配制：5.4.4.1.供试品的最大有效稀释倍数（MVD）的计算：MVD=C1./式中：1.为供试品的细菌内毒素限值C为供试品溶液浓度为卷试剂灵敏度的标示值。5.4.4.2.取供试品适量，加入内毒素检查用水，制成按最大有效稀释倍数稀释的供试品溶液。5.4. 5.供试品阳性比照液的配制:从前面的内毒素标准品溶液中取出适量，加入适量的供试品溶液，稀释成浓度为2.0浓度的供试品阳性比照液。5.4.1. 4.6.取0.Im1./支规格的赏试剂原安瓶5支，用75峪酉精棉球消毒瓶颈。5.4.2. 4.7.在安瓶瓶颈处一侧先贴上一小条白胶布，在另一侧用砂轮轻划数下，从划

14、痕处轻轻掰开瓶帕，使瓶帽正好粘在臼胶布上,把安瓶放在台面上。5.4.8. 每支中均加入细菌内毒素检查用水OJm1,混匀，5支锭试剂安瓶均如此操作。5.4.9. 4.9.向其中两支中各加入0.Im1.供试品溶液作为供试品管。5.4.10. 4.10.1支中加入0.1.m1.2.0浓度的内毒素阳性比照液作为阳性比照管。5.4.11. 1支中加入0.1m1.细菌内毒素检查用水作为阴性比照管。5.4.12. 1支中加入0.1m1.供试品阳性比照液作为供试品阳性比照管。5.4.13. 将安瓶中溶液轻轻混匀后，将粘在白胶布上的瓶帽与割开瓶颈处对正，并封好白胶布,放到试管架上并标明编号。5.4.14. 把试

15、管架垂直放入(371)C相宜水温的恒温水5.5.结果推断:5.5. 1.将试管架从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）;凝胶不能保持完整，并从管壁滑脱者为阴性，记录为（一）.供试品2管均为）应认为符合规定，如2管均为（+）应认为不符合规定。5.5.2.如两管中1管为（+）,1管为（一）按上述方法另取4支供试品管复试：4管中有1管为（+）即认为供试品不符合规定。5. 5.3.阳性比照为（一）或供试品阳性比照为（一）或阴性比照为（+）均认为试验无效。革兰氏染色标准操作程序1、目的nbsp;1.、目的确保染色结果清楚牢靠。2、范围球菌、杆菌和弧菌染色3、职责临床微生物试验室当班