WS-T411-2024抗丝状真菌药物敏感性试验标准 肉汤稀释法.docx

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1、ICS11.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T4112024代替WS/T4112013抗丝状真菌药物敏感性试验标准肉汤稀释法StandardsforantifungalsusceptibilitytestingoffilamentousfungiBrothdilutionmethod2024-04-02发布2024-09-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布目次前言H1范围12规范性引用文件13术语和定义14抗真菌药物的配制25培养基的配制66肉汤稀释法操作步骤67结果判读与解释88质量控制10附录A（资料性）RPMlT640干粉肉汤培养基配制方法12附录B（规范

2、性）肉汤稀释法质控菌株MlC范围14附录C（规范性）体外微量肉汤稀释法MIC折点14附录D（规范性）丝状真菌ECV值汇总表16附录E（规范性）EUCAST微量肉汤稀释法质控范围、折点和ECOFF值19参考文献22本标准为推荐性标准。本标准代替WS/T411-2013抗丝状真菌药物敏感性试验一肉汤稀释法，与WS/T411-2013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术内容变化如下：范围明确了不适合本行标的真菌种类（见1）;增加了术语和定义中“最低有效浓度”、“流行病学界值”、“野生型”、“非野生型”和“拖尾生长”（见3.2、3.8、3.9、3.10、3.12）;抗真菌药物储存液使用的溶剂、稀释

3、液和检测范围表格分为非皮肤真菌和皮肤真菌，增加了艾莎康理、阿尼芬净、环毗酮、灰黄霉素、特比奈芬（见4.4.1）;结果解释内容，按C1.SI（Clinicaland1.aboratoryStandardInstitute）折点和流行病学界值（C1.Sl表述：epidemiologicalcutoffVaIUe,ECV）解释结果；增力口了EUCAST（TheEUroPeanCommitteeonAntimicrobialSusceptibilityTeSting）折点和流行病学界值（EUCAST表述：epidemiologicalcutoff,ECOFF）结果解释，并在附录E列出试验条件、质控范围

4、、折点、ECoFF值等表格（见7.2、附录E）;一增加了结果报告方式，C1.SI及EUCAST两种药敏方法相应的报告结果方式（见7.3）;质量控制部分删除了质控频率和检测频率内容，增加：D按培养基和材料质控、纯度质控、终点判读质控描述；2）日常使用质控菌株的复苏方法（见2013年版的7.5,见8.2、8.3、8.5.2）;一更改了附录A为相关培养基配制表格，附录B为质控菌株MlC范围，附录C为烟曲霉对伏立康嗖的MlC折点，附录D为丝状真菌ECV值汇总表等（见附录A、附录B、附录C、附录D,见2013年版的附录A、附录B、附录C、附录D）。本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责

5、技术审查和技术咨询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法规司负责统筹管理。本标准起草单位：北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、中国医学科学院北京协和医院、首都医科大学附属北京友谊医院、北京大学人民医院、北京大学第一医院、首都医科大学附属北京同仁医院、复旦大学附属华山医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院。本文件主要起草人：胡继红、徐英春、苏建荣、胡云建、王辉、李若瑜、鲁辛辛、章强强、孙自铺、艾效曼。本标准于2013年首次发布，本次为第一次修订。抗丝状真菌药物敏感性试验标准肉汤稀释法1范围本标准规定了微量和宏量肉汤稀释法检测抗丝

6、状真菌药物最低抑菌浓度(MinimaIInhibitoryConcentration,MIC)的参考方法。本标准适用于引起深部真菌感染的产抱丝状真菌的药物敏感性试验，包括曲霉属某些种(Aspergillusspp.)及种复合群、镰刀菌属某些种(FlISariUmspp.)及种复合群、根霉属某些种(Rhizopusspp.)和毛霉目MUCOraIeS(接合菌纲ZygomYCeles)、多育节荚抱霉(1.Omenu)SPOraprolificans,原多育赛多泡霉(ScedosponumPrOlifiCanS)和申克胞子丝菌复合群的菌丝相,以及引起皮肤真菌感染的毛癣菌属某些种(TriChoPhyt

7、onSPP.)、小狗子菌属某些种(Microsporumspp.)和表皮癣菌属某些种(EPidermOPhytOnspp.)。本标准不适用于检测双相真菌如皮炎芽生菌(BlaStomyCeSdermatitidis)英膜组织胞浆菌(HistoplasmaCapsulatum)粗球电子菌属(CoCeidioideSspp.)马尔尼菲篮状菌(Talaromycesmameffei)及酵母样真菌的药敏试验，也不适用于检测棘白菌素类对皮肤真菌以及环毗酮、灰黄霉素或特比蔡芬类对非皮肤真菌的药敏试验。2规范性引用文件本标准没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1最低抑菌浓度mini

8、malinhibitoryconcentration;MIC肉汤稀释法中，抗真菌药物能抑制微生物生长的最低浓度。3.2最低有效浓度minimaleffectiveconcentration;MEC在最低浓度抗菌药物作用下，与生长对照孔菌丝浑浊生长相比，引起菌丝呈小而圆菌落、非融合生长变化的最低药物浓度。本定义目前仅用于棘白菌素类抗真菌药。3.3折点breakpoint用于区分菌株为敏感、中介、耐药的最低抑菌浓度(MIC)3.4解释性分类interpretivecategory结果解释分类基于可获得的微生物特性、药代动力学-药效学(PK/PD)参数和临床疗效结果数据。根据建立的折点将药敏结果进行

9、敏感、中介、耐药解释分类。3.5敏感susceptible;S此浓度的抗真菌药物在体外试验中能抑制真菌生长，当使用推荐剂量时，可能获得良好的临床疗效。3.6中介intermediate菌株的MIC通常可达到常规用药时血液和组织中的药物浓度水平，但反应率可能低于敏感株，不能明确划分为“敏感”或“耐药”。在体外可抑制真菌的生长，但不能确定此浓度的临床疗效。药物在机体生理浓集部位或可用高于正常剂量的药物进行治疗以获得临床疗效。还可作为检测方法固有变异的缓冲区，以防止微小的、不可控的技术因素导致较严重的错误结果，特别是那些毒性范围窄的药物。3.7耐药resistant;R当使用推荐剂量时，临床治疗很可

10、能失败。3.8流行病学界值epidemiologicalcutoffvalue;ECV/epidemiologicalcutoff;ECOFF基于菌株MIC值，将微生物群归类为是否含有获得性耐药和/或突变耐药表型的两个群体（野生型和非野生型）。ECV定义了菌株野生型生物群药物敏感性的上限值（MIC最大值）。3.9野生型wiId-type;WT通过ECV值定义的解释分类，ECV将分离菌株归类为对某种检测的抗真菌药物无获得性耐药机制或无敏感性降低的生物型。3.10非野生型non-jwiId-type;NWT通过ECV值定义的解释分类，ECV将分离菌株归类为对某种检测的抗真菌药物具有推测的/已知获得

11、性耐药机制或敏感性降低的生物型。3.11效价potency抗菌药物中具有抗菌活性的组分，其有效含量通过同类标准物质测定得出，单位通常用mg/g、gmgIUg,或用百分比表示。3.12拖尾生长trailgrowth在结果读取时间内，随着培养时间的延长，在一定药物浓度范围内菌量减少但仍少量持续生长的现象。3.13质量控制QualityControliQC为保证检测的准确性和可重复性而采取的方法或技术。4抗真菌药物的配制4.1抗真菌药物标准品或参考品抗真菌药物使用标准品或参考品。使用有效期内的标准品或参考品，按说明书推荐的条件下储存。当把药物从低温环境中取出时，需恢复到室温后再开瓶。4.2称药物可使

12、用式（1）、式（2）计算药物重量及稀释液体积：WS/T4112024t（2）式中：m药物的重量，单位为亳克（mg）;P药物的浓度，单位为微克每亳升（gm1.）;T药物的效价，单位为微克每毫克（Ugmg）;V药物的浓度，单位为毫升（m1.）。4.3药物储存液（母液）4.3.1药物称量药物称量按照配制储存液的浓度计算，配制储存液浓度至少按检测范围最高浓度的100倍配制储存液。但有些溶解度低的药物应配制较低浓度的储存液。称量应在分析天平上进行，天平应定期校准。4.3.2溶剂溶解时，一些药物需使用非水溶剂溶解，溶剂的信息可参考厂家说明书。溶剂（分析纯）包括：二甲基亚飒（DMSO）、乙醇、聚乙二醇和按甲

13、基纤维素。4.3.3过滤储存液通常是无菌的，当有特殊要求时应进行无菌膜过滤（过滤细菌常用孔径为02um,但应避免使用纸张、石棉和玻璃滤器等具有吸附抗真菌药物的材质。4. 3.4存储储存液应在无菌塑料管中分装，密封保存于-70C（或-20C-70C）o从冰箱中取出的当天使用，现用现取，未用完的应丢弃。大多数药物储存液在-70C可保存6个月。4.4药物稀释液4.4.1 药物稀释液浓度范围药物稀释液及药物浓度检测范围见表1。表1抗真菌药物储存液使用的溶剂、稀释液种类及药物浓度检测范围抗真菌药物溶剂*稀释液浓度范围Ug/m1.抗非皮肤真菌药物两性霉素BDMSOo培养基0.0313-16艾沙康哇DMSO

14、培养基0.0313-16伊曲康哇DMSO培养基0.0313-16酮康建DMSO培养基0.0313-16泊沙康哇DMSO培养基O.031316伏立康嘎DMSO培养基0.0313-16氟康哇DMSO培养基0.125-64氟胞喀咤DMSO培养基0.12564卡泊芬净DMSO培养基0.008-4表1抗真菌药物储存液使用的溶剂、稀释液种类及药物浓度检测范围(续)抗真菌药物溶剂“稀释液浓度范围ug/m1.抗非皮肤真菌药物阿尼芬净DMSO培养基0.0084米卡芬净DMSO培养基0.008-4抗皮肤真菌药物环毗酮DMSO培养基0.06-32灰黄霉素DMSO培养基0.125-64筑康理DMSO培养基0.125-64伊曲康建DMSO培养基0.0010.5伏立康啜DMSO培养基0.001-0.5特比蔡芬DMSO培养基0.0010.5泊沙康嗖DMSO培养基0.0048某些溶剂存在潜在毒性，使用前应咨询厂家。DMSo指二甲基亚碉。培养基指RPMIT640肉汤培养基，如使用商品化RPVl-1640肉汤干粉配制，步躲见表A.1.4.4.2 水溶性药物稀释液对于溶于水的抗真菌药物，直接用肉汤1:50稀释。当进行小样本量检测时推荐使用表2的稀释步骤。表2水溶性抗丝状真菌药物敏感试验稀释步骤(小样本量皮肤真菌)配制步骤浓度(gm1.)