革兰阳性需氧杆菌.ppt

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1、1234567二、二、微生物特性微生物特性 炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000 革兰染色 100089培养特性:需氧或兼性厌氧,生长条件不严格,最适温 度3035普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽,边缘不整齐的菌落,低倍镜下菌落边 缘呈卷发状10炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落 11121314荚膜多肽抗原:-与毒力有关,有抗吞噬作用,有利于细 菌生长和扩散 -荚膜肿胀试验,对本菌鉴定有意义芽胞抗原:有免疫原性和血清学诊断价值151617-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一,对碘和氧化 剂较敏感,常用以下方法杀菌:1:2500碘 10min、3%H2O2 1h、4%高锰

2、酸钾 15min、0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯酶素均敏感18三、微生物学检验三、微生物学检验1920无杂菌污染标本:直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本:加10倍量生理盐水充分浸泡,振 荡1015min、静置10min,取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌,保留芽胞活性,再增菌和培养污染杂菌液体标本:离心,弃上清液后,加0.5%洗涤 剂振荡1015min,离心取沉淀物增菌和分离培养 21生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板

3、2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验22痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌374h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色 G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔,8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告232425青霉素抑制试验:接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板,3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验:兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片26 噬菌体裂解试验:AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验:接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板,10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜

4、粗糙型菌落 动物试验:小鼠、家兔或豚鼠皮下接种27植物凝集素试验:Ascoli热沉淀试验:可作追溯性诊断2829303132培养特性:培养特性:需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度3035普通琼脂平板:菌落较大,灰白色,表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状,有 蜡样光泽3334生化反应:能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精,产酸不产气能胨化牛乳,液化明胶,VP(+)、卵磷脂 酶(+)多次传代后生化特性常可改变 35抵抗力:耐热,肉汤中细菌需10020min才能杀死,食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感,对青霉素、磺胺、呋喃类耐药363

5、738检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板3718-24h纯培养动物试验(肠毒素测定)生化反应血清凝集(分型)报告结果直接涂片染色镜检39检验方法:直接镜检分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板鉴定与分型:根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型,肠毒素检测404142434445孕妇李斯特菌病新生儿李斯特菌病成人李斯特菌病局部感染4647 2025形成周鞭毛,有动力;37时鞭毛 很少或无 细菌接种半固体培养基,置室温,由于动力 强,细菌自穿刺线向四周弥漫生长,在离琼 脂表面数毫米处出现一个倒伞形的生长,是 本菌

6、特征之一48495051525354鉴定:形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出 鉴定 可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多价抗 血清做玻片凝集试验进行鉴定与其他G+菌鉴别55 触酶 动力 马尿酸盐水解产单核李斯 +-B群链球菌 -+本菌有耐碱耐盐的特点,可用触酶试验与 肠球菌鉴别56本菌隶属于丹毒丝菌属575859红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌 革兰染色革兰染色 100060培养特性:厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境,传代后有氧环境也能生长,最适温度30-35。在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛 61BAP:3524h可形成两种菌落光滑型:菌落细小、透明突起、发亮、边缘整 齐、质软易于悬于液体中,毒

7、力较强粗糙型:菌落较大,颗粒状、扁平、边缘不齐 可呈卷发状,无毒力BAP上新分离的菌株有轻微的溶血,培养时间延长溶血现象明显,传代后溶血特性常消失62 在半固体表层下数mm处发育最好,常呈带状 含碲盐的培养基黑色菌落 63 葡萄糖肉汤:培养24h后,呈轻微混 浊,不 形成菌膜,室温静置23天后,管底有少量 灰色沉淀;粗糙型沉淀较多。S-R变异同时毒力、抗原性也发生变异,但 遗传学上不稳定,常出现互变。6465鉴定依据:G+、H2S+、无动力、触酶-、吲哚-、VP-与产单核细胞李斯特菌鉴别(表11-2)新霉素敏感试验:红斑丹毒丝菌R 产单核李斯特菌S 动物毒力试验:对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致病性

8、,0.2ml的24天培养物注入小鼠腹腔,4-5天后,败血症而死,心血培养(+)66属于加特纳菌属此菌属只有本菌一个种67686970生化反应:氧化酶-、触酶-、尿素酶-发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等产酸不产气水解马尿酸钠和淀粉,吲哚-、明胶液化-、甘露醇分解-抵抗力:对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素、甲硝哒唑敏感,对萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐药。7172涂片染色镜检:观察线索细胞,了解阴道菌群状况,常见大量小的G-和染色不定的杆菌和球杆菌,而无大的G+杆菌(乳酸杆菌)pH测定:pH4.5,提示细菌性阴道病胺试验:滴加10%KOH即发出鱼腥嗅为“+”73分离培养:5%人血琼脂平板、35、5%CO2环境48h鉴定:菌落、涂片染色、氧化酶-、触酶-、糖发酵及其他生化反应 74分泌物(阴道、宫颈)新鲜湿片(找线索细胞)涂片染色镜检分离培养(5%人血平板)溶血菌落纯培养(5%人血平板)触酶(-)氧化酶(-)GV的主要鉴定试验初步报告最后报告

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