细胞系RAW267巨噬细胞.docx

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1、细胞系：RAw264.7巨噬细胞1 .凋亡实验分组，芍药昔处理细胞(需要用脂多糖LPS(IugZmI)激活RAW264.7时间24h)1.1 分组：空白组300ugml芍药昔组500ugmL芍药昔组700IWmL芍药昔组12实验操作步骤：正常流式操作步骤即可(1.收集细胞：数FI约(15)X106个mL,500-1OOOr/min离心5min,弃去培养液。2.细胞洗涤：3mlPBS洗涤1次。3.乙醇固定：离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定，4C,1-2小时。4.细胞重悬：离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。5.细胞过滤：400目的筛网过滤1次，500-10r/min离心5min,

2、弃去PBS。6.染色：用ImlPl染液染色，4e避光30min。7.流式细胞仪检测。1.3 实验结果说明及预期：期望每组之间细胞凋亡有差异，2 .细胞摄取实验(罗丹明B处理细胞)(需要用脂多糖LPS(lugnl)激活RAW264.7时间24h)2.1 分组：ImgZmI罗丹明B组0.1mgml罗丹明B组0.0ImKZml罗丹明B组2.2 实验操作步骤：将RAW264.7细胞以2IO5个/孔的密度接种于12孔板中，用脂多糖(LPS)(IgmL)活化。孵育过夜后，给不同实验分组浓度的罗丹明B处理，再孵育2小时。用冷PBS洗涤3次，室温下用4%多聚甲醛固定15分钟。然后，用DAPl对RAW264.7细胞的细胞核进行3分钟染色。使用共聚焦激光扫描显微镜观察细胞对罗丹明B的摄取。2.3 实验结果说明及预期：期望每组之间细胞有较为明显荧光强度差别，强度依次减弱，如果结果图片拍摄效果不好，可根据图片效果需要自行更改浓度分组，就是需要跟下图差不多有差异的荧光图，结果效果图如下.LPS(+)Sta-RS-FA-PPLPNsFA-PPLPNsSta-R8-PPLPNsX3三WRP0qHPwa8-Jsa-0W