梅毒的实验室诊断.ppt

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1、梅毒的实验室诊断梅毒的实验室诊断梅毒概况梅毒概况梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播疾病。人体受感染后，螺旋体很快播散到全身，播疾病。人体受感染后，螺旋体很快播散到全身，几乎可侵犯全身各组织与器官，临床表现多种多样，几乎可侵犯全身各组织与器官，临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长且时显时隐，病程较长中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国传染病防治法规定要管理的性规定要管理的性病是艾滋病、淋病和梅毒，应加以重点防治。卫生病是艾滋病、淋病和梅毒，应加以重点防治。卫生部部性病防治管理办法性病防治管理办法则规定除上述则规定除上述3 3种病以外，

2、种病以外，还有生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性尿还有生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性尿道炎（道炎（NGU）、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病）、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病梅毒早期主要侵犯皮肤及粘膜，晚期除侵犯皮肤、梅毒早期主要侵犯皮肤及粘膜，晚期除侵犯皮肤、粘膜外，还可侵犯心脏血管系统及中枢神经系统等粘膜外，还可侵犯心脏血管系统及中枢神经系统等全身各个系统；另一方面，梅毒又可多年无症状而全身各个系统；另一方面，梅毒又可多年无症状而呈潜伏状态呈潜伏状态梅毒的分期梅毒的分期一期梅毒：主要表现为单个、无痛性的硬下疳，通常在一期梅毒：主要表现为单个、无痛性的硬下疳，通常在感染梅毒螺旋体后感染

3、梅毒螺旋体后34周出现周出现二期梅毒：一期梅毒不经治疗，二期梅毒：一期梅毒不经治疗，梅毒螺旋体梅毒螺旋体在几周至几在几周至几个月后会播散至血液中，引起二期梅毒。二期梅毒的临个月后会播散至血液中，引起二期梅毒。二期梅毒的临床表现多种多样，常见的有发热、淋巴结病、弥漫性皮床表现多种多样，常见的有发热、淋巴结病、弥漫性皮疹、生殖道或会阴湿疣等。一、二期梅毒统称为早期梅疹、生殖道或会阴湿疣等。一、二期梅毒统称为早期梅毒毒三期或晚期梅毒：一般在最初感染的数年至十数年后发三期或晚期梅毒：一般在最初感染的数年至十数年后发生，可累及任何器官，常见的有梅毒瘤性梅毒、心血管生，可累及任何器官，常见的有梅毒瘤性梅毒

4、、心血管梅毒及神经梅毒梅毒及神经梅毒隐性梅毒：无症状但梅毒血清学试验呈阳性。分为早期隐性梅毒：无症状但梅毒血清学试验呈阳性。分为早期隐性梅毒（病程一年以内）和晚期隐性梅毒（病程一年隐性梅毒（病程一年以内）和晚期隐性梅毒（病程一年以上）以上）一期梅毒硬下疳皮损一期梅毒硬下疳皮损二期梅毒皮损二期梅毒皮损梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关，从社会学角梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关，从社会学角度来看，凡人群中梅毒发病率高，意味着人群中性乱现度来看，凡人群中梅毒发病率高，意味着人群中性乱现象严重，提供了艾滋病流行的条件；从医学角度来说，象严重，提供了艾滋病流行的条件；从医学角度来说，患有梅毒的人

5、，因有局部溃疡，可明显增加带有患有梅毒的人，因有局部溃疡，可明显增加带有CD4受受体信息的目标细胞，故对体信息的目标细胞，故对HIV感染的易感性增加感染的易感性增加2-10倍。倍。同样，同样，HIV感染者伴有梅毒，其生殖道排出的感染者伴有梅毒，其生殖道排出的HIV的量的量要比仅有要比仅有HIV感染者排出的量大得多感染者排出的量大得多梅毒和梅毒和HIV合并感染的比例很高。就梅毒治疗而言，对合并感染的比例很高。就梅毒治疗而言，对HIV阳性患者需要更多地进行监测和跟踪，因为其治疗阳性患者需要更多地进行监测和跟踪，因为其治疗失败的可能性比较大失败的可能性比较大神经梅毒在神经梅毒在HIV感染者中出现的比

6、例也明显增加感染者中出现的比例也明显增加在在HIV感染者中，梅毒血清学反应有时会出现难于解释感染者中，梅毒血清学反应有时会出现难于解释的现象，因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表的现象，因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表现为阴性者，建议考虑现为阴性者，建议考虑HIV检查检查梅毒与梅毒与HIV感染感染梅毒的治疗梅毒的治疗非口服途径的青霉素可用于各期梅毒的治疗非口服途径的青霉素可用于各期梅毒的治疗早期梅毒的治疗首选早期梅毒的治疗首选240240万单位苄星青霉素万单位苄星青霉素G G单次肌肉注射。单次肌肉注射。对青霉素对青霉素过敏者，替代治疗方案有强力霉素（口服，过敏者，替代治疗方案有强力

7、霉素（口服，100mg一次，每日一次，每日2次，次，持续持续2周）或四环素（口服，周）或四环素（口服，500mg一次，每日一次，每日4次，持续次，持续2周）周）早期隐性梅毒的治疗方案与早期梅毒相同。晚期隐性梅毒的首选治疗早期隐性梅毒的治疗方案与早期梅毒相同。晚期隐性梅毒的首选治疗方案为每周一次肌肉注射方案为每周一次肌肉注射240万单位苄星青霉素万单位苄星青霉素G，持续，持续3周；对青霉周；对青霉素过敏者，替代治疗方案有强力霉素（口服，素过敏者，替代治疗方案有强力霉素（口服，100mg一次，每日一次，每日2次，次，持续持续4周）或四环素（口服，周）或四环素（口服，500mg一次，每日一次，每日4

8、次，持续次，持续4周）周）合并合并HIV感染者的治疗方案同晚期隐性梅毒感染者的治疗方案同晚期隐性梅毒梅毒瘤性梅毒和心血管梅毒的治疗方案与晚期隐性梅毒相同。神经梅梅毒瘤性梅毒和心血管梅毒的治疗方案与晚期隐性梅毒相同。神经梅毒的治疗只能采用青霉素，具体方案为静脉注射水溶性青霉素毒的治疗只能采用青霉素，具体方案为静脉注射水溶性青霉素G（每（每4小时小时300万万400万单位，持续万单位，持续1014天）或肌肉注射普鲁卡因青霉素天）或肌肉注射普鲁卡因青霉素G（240万单位一天，持续万单位一天，持续1014天）同时口服丙磺舒（天）同时口服丙磺舒（500mg一次，一次，每日每日4次，持续次，持续1014天

9、）天）孕妇的治疗只能采用青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治疗孕妇的治疗只能采用青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治疗暗视野显微镜检查法暗视野显微镜检查法：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特异的一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫异的一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在毒（须在3周内不同的周内不同的3天采样检测，才能得出阴性结果）。天采样检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊断的准确性受操作者的经验、病灶中活螺暗视野显微

10、镜法诊断的准确性受操作者的经验、病灶中活螺旋体的数量及口腔、肛门破损处存在的非致病性螺旋体等因旋体的数量及口腔、肛门破损处存在的非致病性螺旋体等因素影响素影响镀银染色法镀银染色法：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察高倍显微镜进行观察直接免疫荧光法（直接免疫荧光法（DFA)：是目前国外采用较多的方法，其特是目前国外采用较多的方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗

11、梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其他非致病性或色的梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其他非致病性或条件致病性螺旋体条件致病性螺旋体梅毒的病原学检测（一）梅毒的病原学检测（一）暗视野显微镜法直接镜检图像暗视野显微镜法直接镜检图像（1000）间接免疫荧光法镜检图像间接免疫荧光法镜检图像（1000）聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）：PCR能对生殖器溃疡进行早期的鉴能对生殖器溃疡

12、进行早期的鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为PCR和和RT-PCR。PCR的设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原的设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和和TpN47的的DNA开放编码区，常见的引物有开放编码区，常见的引物有K03A、K04、47-1、47-2、47-3、47-4等。由于在等。由于在PCR中会偶然出现非特异中会偶然出现非特异的的PCR产物而干扰结果，这就必须用特异性的产物而干扰结果，这就必须用特异性的DNA探针进行探针进行DNA-DNA杂交来提高杂交来提高PCR的特异性及敏感性。此外，由于的特异性及敏感性。此外，由于Tp

13、N47的保守性，雅司螺旋体可产生类似的的保守性，雅司螺旋体可产生类似的PCR产物，所以产物，所以这种设计的这种设计的PCR不能区分梅毒和雅司；但可以区分梅毒螺旋不能区分梅毒和雅司；但可以区分梅毒螺旋体和引博氏疏螺旋体，这就可以解决梅毒与莱姆病之间血清体和引博氏疏螺旋体，这就可以解决梅毒与莱姆病之间血清诊断中的免疫交叉问题。另一种是诊断中的免疫交叉问题。另一种是RT-PCR，常见的设计是针，常见的设计是针对梅毒螺旋体的对梅毒螺旋体的16s rRNA 366bp片段，这种方法污染少，特片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。异性敏感性高，但价格稍高。PCR在梅毒持续感染中的诊断在梅毒持续

14、感染中的诊断价值目前尚无一致意见，理论上价值目前尚无一致意见，理论上PCR可查出死亡的可查出死亡的TP，所以，所以治疗后治疗后PCR阳性并不意味着治疗失败，但死亡的阳性并不意味着治疗失败，但死亡的TP从机体内从机体内清除较快（清除较快（1530天），而存活的天），而存活的TP从机体内清除至少需从机体内清除至少需120天，所以治疗数周后天，所以治疗数周后PCR阳性意味着持续感染的可能阳性意味着持续感染的可能。此外，也有将此外，也有将PCR用于产前诊断和神经梅毒诊断的报道用于产前诊断和神经梅毒诊断的报道 梅毒的病原学检测（二）梅毒的病原学检测（二）人类对梅毒无先天免疫性，尚无疫苗接种进行人工人类对

15、梅毒无先天免疫性，尚无疫苗接种进行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫。已完全治免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染愈的早期梅毒患者仍可以再感染感染梅毒后，首先产生感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，型抗梅毒螺旋体抗体，感染感染2周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗39个月后个月后或晚期梅毒治疗或晚期梅毒治疗2年后，大部分病人年后，大部分病人IgM可转阴性，可转阴性，再感染时又出现阳性，故再感染时又出现阳性，故IgM型抗体的存在是活动型抗体的存在是活动性梅毒的表现性梅毒的表现感染梅毒感染梅毒4周左右产生周左右产生IgG型抗

16、梅毒螺旋体抗体，即型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出至终生在血清中可测出梅毒的免疫性（一）梅毒的免疫性（一）梅毒的免疫性（二）梅毒的免疫性（二）另一种具有抗体性质的物质叫反应素（另一种具有抗体性质的物质叫反应素（reagin），），是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在感染后般在感染后57周（或下疳出现后周（或下疳出现后23周）产生。周）产生。经正规治疗后可逐渐消失经正规治疗后可逐渐消失胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（69个月）已能合成个月）已能合成IgM型抗体，出生后第型抗体，出生后第3个月开始个月开始形成形成IgG型抗体；型抗体；IgM抗体不能通过胎盘，而抗体不能通过胎盘，而IgG抗体能通过胎盘，如在患儿血清中检侧出抗体能通