YY_T 1535-2024 人类辅助生殖技术用医疗器械 人精子存活试验.docx

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1、ICS11.(MOJOCCSC30YY中华人民共和国医药行业标准YY15352024代YY/r1635-2017人类辅助生殖技术用医疗器械人精子存活试验Medica1.devicesforhumanassistedreproductivetechno1.ogy一Humanspermviabi1.ityassay(HSVA)20254)7-20实施2024-07f8发布国家药品监督管理局发布目次前百I1.I1池困12规范性引用文件I3术语、定义和缗略语14试验方法25方法一人精子活力试验36方法二人精子活力恢笈试脸47方法三人精子冷冻复苏试验68试验报告内容7附录A（资料性）供试产品的试验操作8

2、参考文献9本文件按照GBT1.12020标准化工作导购第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替YY/T1535-2017人类体外辅助生殖技术用医疗器械生物学评价人精了存活状,YY.T15552017相比，除结构调整和编犍性改动外，主要技术变化如下：a）在“范用”中将人精子存:活我脸的试脸方法增加为三种：人精子活力试验、人精子活力恢发试验和人精子冷冻红苏试脸（见第1章）；b）将术语“人精子存活试验”更改为“人精子活力试验”，并更改了其定义（见3.1.1,2017年版mi.1）:C）更改了“精子活力”的定义（见31.2、2017Wm1.2）;d）将术语“精子活力分级”更改为“精了

3、运动分类”，并更改r定义（如11.4,2017母版的3.1.4）;e）将术语“精子活力系数”和“相对精子活力系数”分别更改为“精子活力比值”和“相对精子活力比值”期1.5、31.62017年版的3.1.5、a1.6）：0增加了人精子活力恢更试验和人精子冷冻亚苏试验中使用的术语、定义（见3.1.7、3.1.8和3.1.9）：g）更改了部分缩略语（见3.2,2017年版的3.2）;h）删除了人精子存活试验中试验方法概述（见2017年版的41）;i）更改了主要仪潜和器具的表述（WA1.,2017年版的（2）;j）更改了耗材和试剂的表述（见4.2,2017年版的4.2）;k）更改材料的要求（见4.3,

4、2017年版的4.3）:D增加了计以物即助精子分析法的要求（见44.2）：m）更改了精子样本制备方法（见4.5,2017年版的44.2）:n）增加了“阴性时照组”和“供试产品组”所需的样品体积（见5.1和5.2）,删除了“阳性对照品（见2017年版的4.4.3.1和4.4.3.2）,增加了“方法一人精子活力试验”的具体操作方法（见区3、54）;o）删除了试验可接受准则中的阳性对照组指标（见2017母版的，1.4.5.2）;P）增加了“方法二人精子活力快更试验”和“方法三人精子冷冻亚苏试脸”（见第6、7章）；q）更改了附录A表A.1.（见表A.1.,2017年版的A.1）.请注意木文件的某些内容

5、可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的无任.本文件由国家药品监怦管理局提出。本文件由人类助生殖技术用医疗器械标准化技术归口单位本文件起草单位：上海市第I人民医院生殖医学中心、北京大学第二医院、Jt海交通大学医学院附屈仁济医院、中国人民解放军总医院第七医学中心、山东大学附属生殖医院、上海市生物医药技术研究院、浙省医疗器械审评中心.本文件主要起草人：日成、冏龄,PE杰、孙苏、李隹华、高选、施忠娟、张坤智、乔杰。本文件历次版本发布情况为：2017年首次发布为YY“15352017;一本次为第一次修订.人类辅助生殖技术用医疗器械人精子存活试收1 MH本文件描述了人类辅助生殖技术用医疗器械产品进

6、行人精子存活的试黝方法,包含人精子活力试脸、人精子活力恢整试验和人楮子冷冻复苏试验。人精f活力试验电用于评价人类！助生殖技术用医疗器械中与林子直接接触的培养液类及器具/耗材类产品可能产生的毒性风陵,通过观察加f与液体类产品或浸提液F1.接接触后的活力变化侪况，WI价培养液类及语耳/耗材类产品可能产生的M子毒性风冷，人袖子活力快发试验适用于评价精子制动液和类似产丛可能产牛的毒性风险.通过观察忖子JM子制动液城类似产丛It接接触后的活力愎发情况,评价精子制动液或类似产品可能产生的而性风险“人精子冷冻犯苏试脍适用于评价人类精子冷冻液产丛可能产生的精子林性和冷冻发苏伤害风冷.通过观索柚子与相子冷冻液的

7、H接接触以及冷冻4苏后的活力恢复情况，判断精f冷冻液产品可能产生的源性和冷冻亚苏伤咨风隆.2般范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规危性引用而构成本文件必不可少的条款.共中.注日期的引用文件.仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引Jf1.文件,其最新版本(包括所有的修改40本用于本文件.GBJT16886.12医疗器械生物学评价第12部分，样用制备。参照样品WT(1995人类物助生殖技术用医疗器械术语和定义3术语、定义M甯11术语、定义YY/T0995界定的以及下列术谓和定义适用于本文件.3.1.1人，子活力试3humanSPermmoti1.ityaway箱精子以供试产丛或其浸娜液共

8、培养后，通过观察精子活力的变化来判断受试产品对精子的再性风险“3.12W1.于法力Spermmoti1.ity精液中的活动精子，以活动精子占至郃林子的Ii分率衣示。3.13It子活力，定spentBoti1.ityassayM子运动能力的测定.3.1.4It子运动分类categonofpernmovementsM子运动分四个级别：快速的向运动、慢速前向运动、非前向运动和不活动.精干活力比假SPereButi1.ityirx1.ex经过一定培养时间后的精子活力与培养开始时精子活力的比值。法反映精子活力的变化情况.3. 1.6相对耕子活力比值re1.ativeratioofspermmoti1.i

9、tyindex在相同的培养时间下,供试产品精子活力与阴性对照纲精子活力的比值。注：反映供求产品褥仔活加9陶曜度。3.1.7精子活力复Spetiiim1.iIiIyrecovery精子与供试产品(精f制动液或类似产M)接触30min后清洗,再经过一定时间培养后精子活力的恢现情况.3.1.8精子活力恢复比值spermmotityrecoveryindex在相同的培养时间下，供试产品(精子制动液或类似产的精干活力与阴性对照组精予活力的比值.注：反映供试产AHMfrr活力的影响程度.3.1.9精子冷冻爱苏比值spermcryo-surviva1.index精f与供试产品直接接触经过冷冻复苏后的活力与冷

10、冻前精子活力的比值.it：反映供试产品对精子在冷冻史苏过他I，的步向程度3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。CASA:计算机辅助精子分析(COn1.PUtCr-AidedSpermAna1.ysis)HSCA:人精子冷冻复苏试验(HUBanSpemCryo-surviva1.Assay)1ISMR:人精干活力恢爱试验(I1.uaanSpermMoti1.ityRecoveryAssay)IIS,M:人精子活力试验(HUmanSpermMoti1.ityAssay)IM:不活动(ImnU1.iy)NM:非前向运动(NOnProgressiveMOtiIity)PM:前向运动(ProgreSSiV

11、eMo1.i1.ity)PYP:聚乙烯咄略烷IW(Po1.yViny1.Pyrro1.idone)SCI:精子冷冻红苏比值(SPennCryosurviva1.Index)SMI:精子活力比值(SPeEMoti1.ityIndex)SMRI:精子活力恢复比值(SPerBMOIiIityReccveryIndex)4试验方法1.1主要仪器和器具光学显微镜、精广计数板、计数零、恒温台、计时零、温度计、水平式离心机、超净工作台、二班化碳(或5%氧气、5%二氧化酸、90%氯气)培养箱或恒温培养箱.注：除人工计数所需的仪器和器其外，选择精(计数格的力分析仪器，4.2 耗材和试剂试粉所用耗材和试剂均需要无

12、曲并通过体外鼠胚试龄或人精干存活试验，包括取精杯、格液管、微贵格液吸头、网底试管、悔型黑心管、级冲液或精子洗涤液、精子制动液和柿f冷冻液产品.4.3 材料精液样本符合捐精者标准要求.选用精液样本的标准是：PM精子百分率N50%、柿子正常形态率多4%、精子浓度360X1Q6精子/m1.、圆细胞密度IX心个/mu用至少3份来自不同捐精者的合格冷冻精液进行试脸。4.4 测试原理4.5 4.1人工计数法吸取少好精液样木置于预热的379计数板上，茨上藤玻片在显澈镜下观察，将快速前向运动(PM)和慢速前向运动(PM)、非前向运动(NND和不活动UM)的精子分别计数,至少计数200个相子，并重更计数一次,计

13、算活动精子占全部精子的百分率，见式(D：于活力-peZ100Xr+IM+IM式中：PM快速前向运动和慢速前向运动的精子数H；NM一一非前向运动的精子散F1.;IM不活动的精子数目.4.4 2计算机辅助精子分析法根据CASA系统仪器制造商提供的说明行和使用指南，选择至少5个视界进行精子计数和活力测定.4.5 精子样本制备4.5.1 洗涤分离精子用梯度离心法分离死活精子后，分别用3m1.预热至37C的缓冲液或精子洗涤液清洗2次(50Qg网心5min),去除上游吸取离心管底部精子进行上游,4.5.2 精子上游取37C修热的缓冲液或精子洗涤液2m1.置于椎型离心管中,吸取0.5m1.精子样本缓慢地加入

14、缓冲液或楮子洗涤液底部，在37C培养箱内置于45角倾斜的试管架上典育培养1h,羽育培养结束后，竖直试管，缓慢地吸取上清液(约Im1.1.5m1.).计数井视定精子活力.使用精干活力HW汽的样MjS行下-步精子样本制备。4.5.3 离心制备供试精子样本取上游后的供试精子样本，放置于椎型;就心管内，以50Og离心5in后弃上消液，用线冲液或精了洗涤液来新怨:浮精子，在显微镜下计数精子，物精子浓度柿糅约为20XIOWiVm1.,在显激镜下评估精子活力并记录.5方法一人活力M1.t阴性对照组：使用已通过无菌测试、细菌内毒素测试、体外泄胚试验和人精子存活试验的相对应液体类产M,取09m1.放入圆底试管内

15、.供试产品组：JttO.9In1.供试产品样品放入圆底试管内，根据供试产品特性参照附录A进行试验操作。阴性对照组：使用已通过无菌测试、细菌内毒素测试、体外泄胚试验和人精子存活试验的配子缓冲液或精f洗涤液产M,取09m1.放入圆底试管内。供试产品组：取09m1.供试产品的浸提液放入园底试管内，供试产品浸提液按照GB,T16886.12进行制备.根据供试产品特性参照附录A进行试验操作.&3IDW阴性对照组：取0.1m1.供试精了样本，缓慢地放入含有09m1.阴性对照组液体的恻底试管内混匀后盅紧盖子.供试产品组：KZO.Im1.供试精子样本.缓慢地放入5.1或5.2中已制备好的供试产品组圈底试管内混匀后5S紧前子。&4在371C条件下共培养24h（CO2辍冲体系的培养液需婴在CO,培养箱内松动前子）.&5mSt共培养结束后,测定两组的精子活力.&6用至少“分来门不同捐精者的合格冷冻精液进行试验.计算精子SM1.和相对SM1.分别见式