菜花DNA的提取.ppt

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1、调节调节pH：RNA能在室温条件下被稀碱水解成核甘能在室温条件下被稀碱水解成核甘酸而酸而DNA对碱较稳定（核酸的理化性质），所以对碱较稳定（核酸的理化性质），所以提提DNA一般要在偏碱的环境中提取，提一般要在偏碱的环境中提取，提RNA要在要在偏酸的环境中稳定。偏酸的环境中稳定。调节盐浓度调节盐浓度(盐的分步沉淀盐的分步沉淀)：在浓：在浓NaCl（12M）溶液中，溶液中，DNA溶解度大，溶解度大，RNA溶解度小；在稀溶解度小；在稀NaCl（0.14M）中，）中，DNA溶解度小，溶解度小，RNA溶解度溶解度大，因此可利用不同浓度的大，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将溶液将DNA和和RNA从样品中

2、分开。从样品中分开。C.除蛋白除蛋白加去垢剂或变性剂加去垢剂或变性剂（SDS，十二烷基硫酸锂，十二烷基硫酸锂LDS，十二，十二烷基肌酸钠，脱氧胆酸钠）使蛋白变性，与烷基肌酸钠，脱氧胆酸钠）使蛋白变性，与DNA分开；分开；用有机溶剂沉淀，除去蛋白用有机溶剂沉淀，除去蛋白常用的有机溶剂：苯酚，氯仿，异丙醇，醚，常用的有机溶剂：苯酚，氯仿，异丙醇，醚，8羟喹羟喹咛，间甲酚等咛，间甲酚等本次实验所用：氯仿：异戊醇本次实验所用：氯仿：异戊醇24：1 氯仿：使有机相和水相易分层，增加核酸得率，同时氯仿：使有机相和水相易分层，增加核酸得率，同时可除去脂类。可除去脂类。异戊醇：可减少泡沫，也能促使有机相，水相

3、分离。异戊醇：可减少泡沫，也能促使有机相，水相分离。D.除糖，脂类除糖，脂类 对于含糖量高，含脂高的样品需要做对于含糖量高，含脂高的样品需要做 加蛋白水解酶加蛋白水解酶：如提动物组织中的：如提动物组织中的DNA，常加蛋白，常加蛋白酶酶 K二二.利用盐不同浓度提取利用盐不同浓度提取DNA1）材料）材料菜花菜花5mol/L NaCl溶液溶液;0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA-Na溶液溶液;25%SDS 溶液；溶液；24:1 氯仿异戊醇混合液；乙醇；氯仿异戊醇混合液；乙醇；1.取菜花取菜花 4g，置研钵中，加少许石英沙仔细磨成，置研钵中，加少许石英沙仔细磨成糊状。糊状。2.

4、分次加入分次加入10ml 0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA溶液，将糊状物转入溶液，将糊状物转入 两个两个10ml的离心管中。的离心管中。6000r/min离心离心10min，弃去上清。（注：做鸡，弃去上清。（注：做鸡肝的可再加肝的可再加7ml/管管 0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA溶液，将沉淀搅匀后溶液，将沉淀搅匀后6000r/min离心离心8min，弃去上清）。所得沉淀为脱氧核糖核蛋白粗制品。弃去上清）。所得沉淀为脱氧核糖核蛋白粗制品。3.向上述沉淀物加入向上述沉淀物加入0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA溶液溶液2m

5、l/管，管，25SDS溶液溶液0.25ml/管管,搅搅拌至混匀。置拌至混匀。置60水浴保温水浴保温10min，取出冷至室温。，取出冷至室温。此步操作系使核酸与蛋白质分离。此步操作系使核酸与蛋白质分离。4.加入加入5mol/L NaCl 溶液溶液1ml/管，搅拌混匀，加管，搅拌混匀，加入约一倍体积的氯仿异戊醇混合物（约入约一倍体积的氯仿异戊醇混合物（约4ml/管），管），颠倒混匀颠倒混匀12min。6000r/min离心离心10min。5.吸出上清至洗净的研钵中，加入吸出上清至洗净的研钵中，加入2倍体积的预冷倍体积的预冷95%乙醇，放置乙醇，放置2-3分钟，分钟，DNA沉淀析出，用玻棒沉淀析出，用玻棒慢慢搅动，可将慢慢搅动，可将DNA丝状物缠在玻棒上。丝状物缠在玻棒上。6.将沉淀转入将沉淀转入eppendorf管中管中,用无水乙醇洗涤一次用无水乙醇洗涤一次,自然干燥自然干燥,4 保存备检测保存备检测.实验结果分析讨论五五.琼脂糖凝胶法检测琼脂糖凝胶法检测DNA核酸检测方法核酸检测方法紫外吸收法紫外吸收法有机试剂法有机试剂法琼脂糖凝胶电泳法琼脂糖凝胶电泳法提取完好的提取完好的DNA琼脂糖凝胶电泳图谱琼脂糖凝胶电泳图谱未除去未除去RNA的的DNA琼脂糖琼脂糖凝胶电泳图谱凝胶电泳图谱