血清总胆汁酸测定标准操作规程.docx

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1、血清总胆汁酸测定标准操作规程1.检验原理:(酶循环法)胆汁酸和硫代氧化型辅酶I(Thio-NAZT)在3Q-羟类固醇脱氢酶的作用下转化为硫代还原型辅酶I(Thio-NADH)和3-酮类固醇,此反应是可逆的。在大量还原型辅酶I(Thio-NADH)存在的情况下,逆向反应同时进行,再生成胆汁酸和氧化型辅酶I(NA。+)。通过循环使胆汁酸的量得到放大。在一定的反应时间内,酶循环产生的硫代还原型辅酶I与样品中的胆汁酸浓度成正比,在405nm处测定吸光度并计算每分钟吸光度的变化率可得出样本中胆汁酸的含量。胆汁酸+Thio-NAZTThio-NADH+3-酮类固醇3Q-酮类固醇+NADHAHSDnAZT+

2、胆汁酸2.试剂组成成分产品组成成分浓度RlPIPES缓冲液50mmolL硫代氧化型辅酶I2mmolLR2TriS缓冲液50mmolL还原型辅酶I二钠2.5mmolL3-羟类固醇脱氢酶30KU/LSTD胆酸钠30umolL3.样本要求:新鲜无溶血血清,勿使用肝素抗凝血浆。2225C保存8小时,28保48小时,-20保存7天,样本不可反复冻融!4.检验方法:仪器法(详见DF-603DI-600标准操作规程)5.参考范围:样本参考范围(umolL)血清0-9.676.检验结果的解释6.1 样本含量超出线性范围时,建议用O.9%(WV)的氯化钠溶液稀释样本。通常稀释2倍,当样本浓度较大时提高稀释倍数。

3、6. 2单位换算:mmolL=umolL0.OOl7检验方法的局限性6.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。7. 2若试剂浑浊或以水空白在405nm处吸光度大于0.800时不能使用。8.产品性能指标8.1 线性范围:在给定的样本/试剂比例和条件下测定时,本试剂线性范围可达0-180umolLo8. 2试剂空白吸光度:在405nm处,光径ICm时,空白吸光度AWO.800,A空白/分钟W0.005.8. 3准确度:相对偏差10%.8. 4精密度8. 4.1批内精密度CV3%8.1 2批间精密度:R10%8.5分析灵敏度:在给定的样本/试剂比例和条件下测定时,1UmOl/L的总

4、胆汁酸对应的AA不低于X1(48.6干扰试验干扰物浓度(gL)是否有干扰抗坏血酸0.3无明显干扰脂血5.0无明显干扰胆红素0.2无明显干扰血红蛋白5.0无明显干扰无明显干扰:添加干扰物后的测定值与初始测定值的相对偏差处于10%以内。8.7方法比较:本试剂盒与商品化试剂盒测定40个样本测定结果相关性如下:y=0.989x+0.360;r=0.995o9.临床意义:急性肝炎急性期患者的总胆汁酸测定的异常率达100%,平均增高幅度可达正常高限的10倍。动态观察说明总胆汁酸随肝功能的恢复逐渐转为正常,总胆汁酸持续较高水平的患者往往慢性归转,总胆汁酸测定对急性肝炎的的诊断和预后估计有较好价值。慢性活动性肝炎的总胆汁酸增高幅度较大。而慢性迁延性肝炎的总胆汁酸大多在正常范围,慢性肝炎患者如总胆汁酸20umol/L应考虑活动的存在。

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