新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准.docx

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1、ICS11.100.C63SZDB/Z深圳市标准化指导性技术文件SZDB/Z1222015新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准2015-01-23发布2()15-020实施深圳市市场监督管理局发布前III范南12缩略语I3术i否和定义I1.1 1新生儿听力筛直11.2 新生儿遗传性耳凭基因筛查21.3 减然对21.4 常染色体除性遗传21.1 5常染色体显性遗传23.6 统合突变23.7 杂合突变21崎杳对象、模式与结果显示5听力与遗传性耳聋基因联合筛杳流程图6筛查前宣传教育7听力与遗传性耳光基因筛查程序7.1听力崎杳程序7.2遗传性耳费基因帅查程序7.2.1知情同意书签箸7.2.2受检者资

2、料采集7.2.3样本来集、保存和运输47.2.1检测工作流程47.3粒量控制58筛查结果处理59追踪随访6附录A（资料性附录新生儿听力筛杳知情同意书7冏录B（资料性冏录新生儿遗传性耳聋基因嘛克知情同意书8附录C（资料性附录新生儿听力与遗传性耳先基因联合筛查送检单9附录D（资料性附录新生儿听力与遗传性耳比艰因联合筛杳报告单10冏录E（规范性附录新生儿听力损失高危因素12参考文献13I1.本标准按照GB,T2009给出的现则起草，谛注意本文件的某线内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的说任。本标准由深圳市卫生和人I计划生育委员会归1.1.本标准负责起草单位：深圳华大基因医学有限公司

3、、深圳华大临床检验中心.本标准主要起点人：赵立见、令蕊、梁金龙、杨玲，本标点为首次发布.新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查标准本标准规定了新生儿听力与遗传性耳魂他因联合笳食的晞杳对象和模式，听力与遗传性耳先城因岷合筛查流程，加吉前宣传教科，听力与遗传性耳聋基因箭变程序、筛查结果处理及追踪随访的要求.本标准适用于新生儿听力与遗传性耳聋将因联合籍查的机构，通过听力与遗传性耳受基因的联合筛可使先天性耳点患儿、具行迟发性耳荒风险的高危儿、以及具有药物城感性耳告风险的而危儿得到早发现、早诊断、早干预,并指导临床用药2 Wff下列缩略语适合于本标准.bp：碱龙对(basepair)A：腺嚓吟(Adenin

4、e)Ti胸腺啼嚏(Thyminc)G：鸟噪吟(Guanine)C：fe(Cy1.OSinC)U：尿嗑U(Uraci1.)DNA：脱氧核制!核酸(DetixyribiMiucIeicAcidRNA：核.鹅核酸(Ribonuc1.eicAcid)PCR：裳合筋链反成(Po1.ymcrascChainReaction)M1.DITOF-MS：妖质辅助激光解吸附/电离飞行时间顷诺(MiMriXASS加d1.aSerDesrpioioniauonTimc-of-t1.ightMassSpectromcin)dNTPs：三微酸Wt基脱氧核甘酸(Deoxyribonuc1.eosideTriphosphat

5、e)3下列术谱和定义适用于本文件.3.1 新生儿听力筛查采用耳声发射、自动听性脑干反应和冷阻抗等电生理学检测技术，对处于自然睡眠或安怖的状态下的新生儿进行的客观、快速和无创的听力检查.32新生儿遗传性耳登基因缔查采用MA1.DI-ToF-MS技术对新生儿脐带血、足跟血进行遗传性耳蓬基因筛查,可到阍新生儿四个常见遗传性耳近基因突变怖况。3 .3碱基对碱基对是一对相互匹配的碱基.被级犍连接起来.组成喊基对的碱基包括A、T、G.C.U：是形成DNA、RNA堆体以及编码遗传信息的化学结构.4 .4常染色体隐性遗传行染色体胞性遗传是人类范因的一种遗传模式，指位于常染色体上的法因，其拈因性状是I性表达的,

6、即只有同一个体中的等位基因存在两个异常挎贝时才显示性状。5 .5常染色体显性遗传常染色体显性遗传是人类基因的种遗传模式，指位于常染色体上的菸因，其她因性状是显性表达的,即只要同一个体中的等位基因存在一个异常拷贝时就会显示性状。6 .6纯合突变纯合突变是指对等位法因在同一个位置都存在突变,7 7杂合突变杂合突变是指一对等位基因中只有其中个基因出现突变.8 的左对象、模式与结果显示8.1 筛查对象：所有新生儿.42筛查模式：联合采用听力简杳和基因检测技术手段，对新生儿进行系统的听力与遗传性耳光相关基因的检测,可以更加全面和有效地及早发现听力损失和携带耳遂致病基因的新生儿,辅助临床早期诊断.段警临床

7、早期干预,指导临床用药.4.3筛杳结果显示：听力初筛和双。年的结果将用“通过”和“未通过”来去述，“通过”者说明听功能基本正常：“未通过”者说明可能存在耳花,需要进一步检查,确定诊断.并按相关规定定期进行随访。遗传性耳停就因随香结果将宜接显示所检测因位点的突变情况，分为“正常”与“突变”两种结果。“正常代表的是箭查“通过”，”突变”代表的是箭杳“未通过”。5听力与遗传住耳三西因联合nsSe筛Si前宣传教育宣传各年龄段所党语言观察方法及相关科普知识，下发相关科普宣教资料I未通过通过I,匐诊程序未通过高度预警程序通过一听力学渗断程序未通过*听力和基因的联合诊断程序6MiratWkW筛查前府对监护人

8、进行宣传教育,告知监护人听力与遗传性耳花基因联合筛查的意义、重要性、检出能力和技术局限性等信息.遵循知情I可建、尊泵监护人个人遗愿选择的原则开展筛宣。7听力与遗传性耳聋因的杳程序7.1 听力林查程序7.1.1 知情向意书签署：知情同意行中明确听力筛食的性质、合理的预期目的、风侬性和必要性等。新生儿听力筛查知情同意书参见附录A.7.1 2初筛：在新生儿出生后23天（48-72h）进行筛查型耳声发射仪和/或自动听性脏干反应仪筛查，如单耳或双耳不通过,进入程序7.1.3.7.1.3狂筛：初筛未通过的新生儿在出生42天内使用筛式型耳声发射仪和/或自动听性脑干反应仪筛查进行双耳发第。72遗传性耳聋基因筛

9、查程序7.2.1知情同意书签署知情同痣书中明确遗住性耳莲祭因崎农的性质、预期目的、技术方法、风险性和必要性等。新生儿遗传性耳聋基因筛杳知情同意书参见附录&7.2.2受检者资料采集包括受检新生儿的基本估息、新生儿听力筛查结果、新生儿母亲相关伯恩、家族遗传性耳徙病史等，新生儿遗传性耳挣基因。中杳送检单畚见附录Co723样本采集、保存和运输7. 2.3.1样本采集I）在遗传性耳弹基因筛查采血卡上填写新生儿性别、监妒人姓名、送检医院、采血苕、采血时间、而护人的联系电话等.采血R为专业制作的枭样耗材，制作过程中需经过特殊处理和消揖火萧，避免外源污染,采血卡内侧应有液体防治防污染的保护膜.2）严格按照无序

10、操作规范，采集新生儿脐带血或足距血涂布于采血PJ:.血愤不少于一个直径为I1.mm的血斑。3）在采血卡上粘贴唯一样本编号标签.4）常温晾干，避免阳光及紫外线照射、烘烤、挥发性化学物质等污染.5）将隙干的血片固尸密封袋内保存.6）在新生儿听力与遗传性耳聋基因联合筛查送检第（参见附录C）上填写样本信息.申清检测者和送检医生均需在送检单上签字。7.2.3.2样本在常温下运输保存不宜超过5天。7.24检测工作流程7.2.4.1样本接收：核对样本编号.送检单及知情同意书对符合要求的样本接收、登记并在送检单上签字。对不符合要求的样本，拒收、赞记并通知JR新采样，7.2.4.2DNA提取：按照DNA提取试剂

11、盒说明书操作要求进行DNA提取.提取过程中,设置阴性对照，提取好的DNA样本可曲存于4C冰箱中，长期应保存于20C0射于冻存的DNA样本，-20C保存不超过2年,反纪冻融不超过5次.7 243PCR扩增和廷仰反应1）通过多或PCR扩增,获得纪序列扩增产物。2）使用虾碱性璘酸梅处理扩增产物,除去扩增产物中的NTPs.3）加入延伸引物进行通械基延伸反应，在延伸引物3濯连接一个与突变位点互补的Itt基.孩得小片段单链延伸产物.8 .2.4.4产物纯化和质谱上机1）使用阳肉子交换树脂纯化延伸产物.除去延伸产物的阳离子.2）用基痂辅助激光裤吸附/电离飞行时间质谱技术（MA1.DITOF-MS）对纯化后的

12、产物进行质谱检测.7.2.4.5数据分析：使用MaSSARRAYTyper系统时耳莲菸因筋自信息进行数据分析，7.2.4.6出具报告：通过报告系统生成报告单,并反馈给受检者监护人.检测报告包含送检信息、受检者基本伯恩和检测结果等内容.新生儿听力与遗传性耳弹基因联合筛吉报告单参见附录D.7.3质量控制7.3.1新生儿听力筛查程序的初筛.立崎、阳性病例确渗和治疔的机性设置、房屋与设法和人员要求应符合卫生部新生儿听力能杳技术规范3的要求，7.3.2新生儿遗传性耳母基因筛查相关人员应接受生物安全、检测技术等专业均训，持证上岗.7.33新生儿遗传性耳黄触因筛食机构应配备必要的基础设施和适宜的检测环境，对

13、设施和环境进行监控.734新生儿遗传性耳苑地因箭杳时应设立阴性市更对照,确保每次检测的质Iih如阴性而照与预期结果不相符时，进行原因分析并采取纠正措施，形成出面记录.X.1听力筛查与遗传性H总基因筛查均通过且无高危因素的新生儿,传授监护人各年龄段相应的听性行为反应观察方法知识及发放科普宣教资料。听力筛查与遗传性耳差基因筛资均通过但具有高危因素的新生儿，应当定期跟踪追访到3周岁，在随访过程中怀疑有听力损失时，应当及时到听力障碍诊治机构就诊,新生儿听力损失高危因素参见附录E.8.2 听力筛查通过但遗传性耳隹基因筛查未通过的新生儿，进入高度预警程序,进一步进行基因诊断、遗传咨询以及听力学监控，井陆访

14、。8.3 遗传性可爱明因筛杳通过但听力篇查未通过的新生儿，进入听力学诊断程序。听力女蹄未通过的新生儿.在出生3个月内诳行第一次诊断性检查，对确诊为听力障碍的患儿应当在6个月内进行相应的临床医学和听力学干预,并定期跟踪追访至6周岁（银半年至少1次）.8.4 听力筋杳与遗传性耳势聪因筛食均未通过的新生儿，进入听力和%因的联合诊断程序，进一步确诊和随访.8.5 遗传性耳花基因筛查结果未通过表示发现检测范阳内的基因突变.其指导意义如下:8.5.1对于城粒体12SrRNA基因突变检测为突变的新生儿，其终身应避免使用M型精仃类药物以防止的物性耳筐发生。8.5.2对于常染色体隐性遗传基因统合突变或单基因坡合

15、杂合突变的新生儿，其可能于出生时出现耳蓬联状,须尽早进行临床医学和听力学干预。8.53对于常染色体隐性遗传域因杂合突变的新生儿,其为致准突变基因携带者本身不发病，若日后与具有相同基因型的携带者始则其后代发病概率为25%.8.5.4对于常染色体显性遗传基因统合突变或杂合突变的新生儿，其可因该基因突变而导致耳蓬.部分人群可表现为迟发，应定期监测，一旦发现听力下降，即给予早期干预和治疗。9.1 追踪随访对象为出生时存在径烧高危因素者、听力箍食未通过老、遗传性耳径法因筛查未通过者以及听力筛查和遗传性耳连基囚筛查均未通过者.9.2 如实登记随访结果,保存随访资料.总结统计分析.评估筛件效果.并指导儿氽听力测试和保健.附录A（资料性附录）新生儿听力筛查知情同意书新生儿听