全胃切除术后家兔营养不良的实验研究_0.docx

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1、全胃切除术后家兔养分不良的试验探讨临床医学论文-全胃切除术后家免养分不良的试验探讨作者：任重牛伟新刘寒何国栋王洪山高晓东【摘要】目的通过建立家兔全胃切除和迷走神经干切断的模型，初步探讨全胃切除术后所引起的进食削减、体质虽下降、养分不良的缘由。方法新西兰兔24只，随机分为A组(比照组)、B组(全胃切除组)和C组(迷走神经干切断组)，视察B、C组手术后体质量:比、进食;Q：、血浆胆囊收缩素、胃动素含鼠、近段小肠上皮单糖传运体G1.UT5和SG1.T1.的InRNA表达状况等指标，并和A组比较。结果与A组相比，B组术后体质量比、进食殳明显卜.降。家兔术后血浆胃动素含危变更不大，胆囊收缩素含量分别于术

2、后第3天和第14天上升(PO.05)B组家兔十:指肠和空肠G1.UT5DiRNA表达显著下降(P0.05和0.01)o在十二指肠和空肠B组家兔SG1.T1.mKNA表达均无变更(PO.05)OC组家兔术后上述指标与比照组比较，差异均无统计学意义(PO.05)O结论全胃切除术后与胃动素相关的消化间期小肠蠕动和食物排空速度可能未出现变更，而胆囊收缩素含眼上升可能与中枢性摄食抑制、食欲下降有关；胃切除后家兔小肠近段G1.UT5mRNA表达明显下降，SG1.T1.mRN表达无变更。迷走神经干的切断在这些病理生理变更中不起重要作用。【关键词】全胃切除术：迷走神经干切断术；养分不良；家兔【Abstract

3、】ObjectiveToexp1.orepre1.iminariIythecausesforanorexia,weightreductionandma1.nutritionaftertota1.gastrectomybyestab1.ishingrabbitmode1.oftota1.gastrectomyandvagotomy.MethodsTwentyfourNewZea1.andrabbitsweredividedrandom1.yintogroupA(contro1.group),groupB(undergonetota1.gastrectomy)andgroupC(undergone

4、vagotomy).Theratiooftheweight,theamountoffoodtaken,thecontentofcho1.ecystokinin(CCK)andmot1ininp1.asma,theexpressionofthemRNAofG1.UT5andSG1.T1.attheepithe1.iumoftheproxima1.partofsma1.1.intestineingroupsBandCafteroperationwereobservedandcomparedwiththoseingroup.Resu1.tsComparedwithgroup,theratioofth

5、eweightandtheamountoffoodtakeningroupBwerereducedmoredistinct1.y.Thecontentofmot1iningroupBshowed1.itt1.echange,whiIethecontentofCCKwase1.evatedatdays3and14afteroperations(PO.05).TheexpressionofG1.UT5mRNAatduodenumandjejunumdecreasednotab1.yingroupBcomparedwithgroupA(PO.05andPO.01respective1.y).Butt

6、heexpressionofG1.UT5mRNAatduodenumandjejunumshowednostatistica1.deferenceingroupBcomparedwithgroup(PO.05).IngroupC,a1.1theseindiceshadnostatistica1.deferencecomparedwithgroup(PO.05).Conc1.usions.Aftertota1.gastrectomy,theperista1.sisofsma1.1intestineandtheevacuationofthefoodinInterdigestiveperiodcor

7、re1.atedwithmot1inmaynotchange,whi1.etheincreaseofthecontentofCCKmaycausecentra1.feedinginhibitionandanorexia.Aftertota1.gastrectomy,theexpressionofG1.UT5mRNAattheproxima1.partofsma1.1.intestineoftherabbitsisdecreasedbutthatofSG1.T1.mRNAremainsunchanged.Vagotomyshowsnocontributiontoa1.1thesepathophy

8、sio1.ogicchanges.KeywordsTota1.gastrectomy;Vagotomy;Ma1.nutrition;Rabbits全胃切除术是治疗胃癌的重要术式之一。但由于其手术范围广，创伤较大，术后不可避开地会发生一些病理生理上的变更。全胃切除同时也伴随着迷走神经干的切断，手术以后所出现的种种病理生理方面的变更是由于机体失去胃引起的还是迷走神经干切断引起的，也没有明确答案。本试验通过家兔全胃切除和迷走神经十切断模型的建立，视察术后体质品、血浆胆囊收缩素、胃动素含黄、近段小肠上皮单糖转运体:Na+依靠性单糖转运体1（sodiumdependentg1.ucosetranspor

9、ter1,SG1.T1.）和易化性单犍转运体5（faci1.itatedg1.ucosetransporters,G1.UT5）的mRNA表达状况等指标的变更，初步探讨全胃切除术后养分状况低下的缘由。1材料与方法1.1材料1.1.1动物：成年新西兰兔24只，雌雄不限，体质埴2.2-3.2kg,由复旦高校附属中山医院动物试验室代购。1.1.2 仪器:立式压力蒸汽灭菌器（1.SB501.型）购自上海华线医用核子仪器有限公司：低温高速离心机（1.abofUge100R型）购自德国HeraeusInstruments公司；电热恒温水浴锅（H.H.S型）购自上海医疗器械五厂：RNDNCa1.cu1.at

10、or仪（GeneQuantII型）购F1.PharmaciaBiotech公司；PCR仪（PTC150型）购自美国MJResearch.INC.公司：电泳仪购自（DYA型）上海生化所巴斯生物技术开发公司；测趾用电泳条带灰度软件（AIPhaImagerTM2000DocumentationAna1.ysisSystem,A1.phamager3.21软件）购F1.A1.phaInnotechCorporation公司。1.1.3 试剂：SK1361试剂盒、DEPC液、01igo（dT）15、10mmo1./1.4dNTP混合液、RevertAidTMMMu1.V反转录酶、正义及反义引物、TaqP

11、CR催化酶、GcneRu1.erTM50bpDNA1.adder、琼脂糖凝胶，均购自生工生物工程（上海）有限公司。演化乙锭由梵旦高校附属中山医院中心试验室惠赠。1.2动物模型的建立家兔分为3组，每组8只。A组为假手术组（比照组），B组为全胃切除组，C组为迷走神经十切断组。氯胺朋1mg/kg肌肉注射麻醉。组家兔打开腹腔后用生理盐水纱布覆盖内脏，1h后关闭腹腔。B组家兔行全胃切除（切除范围从贲门至幽门近侧约0.5cm处），然后将食管拉下与近段十二指肠行端侧吻合。C组家兔进腹后钝性分别食管下段四周结缔组织，包括筋膜，神经，血管，予切断，结扎。使食管下段贲门四周完全游离，食管肌层光滑，不见任何结缔组织

12、、神经组织。手术后均肌肉注射庆大霉素针4万U。3组家兔术前均禁食12h（不禁水），B组家兔术后第1、2天静脉输液。A、C组术后不必输液。3组家兔均于术后第2天饮5%葡萄牺生理盐水，第35天喂食青菜叶，第6天过渡到正常兔饲料饮食。1.3 体质成的测定及体质Q比的定义3组家兔分别于手术日（术前）、术后第5、10、15、20、25、30天上午8点喂食前测量体质量。B组家兔手术后即刻测心切下的胃质用，术后测得体质让加上胃质量即为当日体质量数据1因3组家兔术前可能存在着体质吊:上的不均衡（为提高手术存活率，B组家兔一般采纳较健壮，体质量偏重的家兔），故采纳体质品比作为计算指标，即每只家兔体质品以手术日（

13、术前）为基准，计算当日体质量测量数值与手术日（术前）体质量测量数值的比值,定义为体质显比。1.4 进食量的测定3组家兔分别于术后第10、15、20、25、30天测定24h的进食敬（计算当天上午8时至第2天上午8时的进食量）。1.5 血浆胃动素、胆囊收缩素含晶的测定3组家兔分别于术后第1、3、7、14天上午8点从耳缘:动脉采血3.54m1.采血前禁食（不禁水）12ho然后制成血浆。用放免法测定血浆胃动素和胆囊收缩素的含M:（由其次军医高校神经生物学教研室代测）。1.6 近段小肠上皮G1.UT5和SG1.T1.mRN的检测1.6.1黏膜标本的采集：3组家兔小肠黏膜标本均在术后第30天采集。采集时间

14、为16：00-17：00。采集前禁食24h（不禁水）。家兔麻醉后切开腹腔，分别距离幽门10cm和100cm向远侧取下约10cm的肠段，作为十二指肠段和空肠段。将取下的肠段沿对系膜缘纵向剪开，放入无菌冰生理盐水震荡漂洗3次，最大限度的清洗掉黏附在黏膜上皮的小肠内容物，包括食物残渣、黏液、杂质。用经过消毒、1：1000DEPC液脱酶后的玻璃片将黏膜组织刮下。RTPCR方法检测小肠黏膜SG1.T1.和G1.1.T5mRNA的表达。PCR过程中全部离心管、移液管都要经过灭菌。1.6.2PCR扩增步骤：94C变性5min,然后进行30个循环，每个循环包括94C变性30s,60C退火30s,72C延长1I

15、nino扩增结束后PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶（加入溟化乙锭51/100慨1）中电泳。所获条带用灰度测易软件进行灰度分析，测定目的基因产物灰度和内参照（actin）基因产物灰度的比率（PCR率），半定吊:测定目的基因的表达。见表Io1.7 统计学分析3组数据均数差别检验采纳t检验。PO.05表示差异有统计学意义。2结果2.1术后3组家兔体质量变更、进食量变更、血浆胃动素和胆囊收缩素的值(表25)表1用物序列及其在基因组中的位置核酸序列位置产物大小SG1.T1：Sence5TCATGATGGTGGGCTCTGTG3652671Antisence5GCCGCGCGGCACTTTG31065-10

16、46414bpG1.UT5:Sence5,TGACGGAGTTCTACAACGAC3161-180ntisence5CAGTCTAGGGCCCGT3474-455313bpactin：Sence5CCTGTACGCCTCTGGCCGTACCACT32088-2112ntisence5CTGTGCCGCGCTCGGTGGGTCT322612237174bp表23组家兔体质黄比变更表33组家兔术后进食吊:对比表43组家兔血浆胃动素含让对比(单位：pgm1.)表53组家兔血浆胆囊收缩素含后对比2.2十二指肠、空肠上皮G1.UT5和SG1.T1.mRN的表达十二指肠上皮G1.UT5mRNA的表达,B组