P27kip1和Skp2在食管癌中的表达.docx

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1、P27kipl和Skp2在食管癌中的表达P27kipl和Skp2在食管癌中的表达作者：宋旭东李志强朱海燕【摘要】目的：探讨p27KiplfSkp2蛋白在食管癌发生、恶性增殖及转移扩散中的作用及二者间的相互关系.方法：运用免疫组织化学EnVision法检测p27Kipl,Skp2蛋白在97例食管癌、30例食管癌旁组织标本中的表达状况.结果：P27kipl与Skp2蛋白的阳性表达率在癌旁组(93.33%,0%)与食管癌组(45.36%,48.45%),淋巴结转移阳性组(31.71%,63.41%)与阴性组(55.36%,37.50%),高分化组(62.96%,29.63%)与中(42.22%,53

2、.33%)，低分化组(32.00%,60.00%)之间差异有显著性(Pit;0.01),而与食管癌肿瘤的大小、性别、患病年龄和临床分期无关(Pgt;0.05),结论：p27Kipl,Skp2蛋白表达与食管癌的分化程度及淋巴结的转移状况有关，分化程度低者或伴随有淋巴结转移者，p27Kipl蛋白表达明显降低，相反，Skp2蛋白则明显增高，而且二者呈负相关.【关键词】P27kiplSkp2食管肿痛0引言目前的探讨表明恶性肿瘤细胞增殖失控是细胞周期校正点限制紊乱的结果.l,27kipl是细胞周期依靠性蛋白激醒抑制因子(cyclindependentkinaseinhibitor,CKI)家族的成员，S

3、期激酶伴随蛋白2(Sphasekinaseassociatedprotein2,SKP2)是泛素蛋白酶降解途径中Fbox蛋白家族中一员，而P27kipl的水解则主要是通过泛素蛋白旃体途径完成.因而，探讨p27kipl,Skp2蛋白在食管癌中的表达，探讨二者在食管癌细胞增殖、转移中的作用及相互关系，对揭示食管癌发生、发展的机制意义重大.1材料和方法1.1材料1.1.1标原来源标本均源于华北煤炭医学院附属医院200201/200410手术切除标本，全部标本术前均未经任何放化疗和其它抗肿瘤治疗.其中食管癌标本97例，癌旁食管组织30例（距癌组织5cm,经病理证明无癌细胞）.全部病例的临床资料及病理资

4、料完整，包括病灶的大小、组织学分型与分级、淋巴结转移、TNM分期等内容.食管癌的临床分期依照1976年全国拟定的食管癌临床病理分期标准，组织分型与分级标准采纳1990年WHO食管癌的分型及分级标准.其中高分化27例，中分化45例，低分化25例.组织学分型食管鳞癌91例，腺癌6例.1.1.2主要试剂鼠抗人p27kipl单克隆抗体、鼠抗人Skp2单克隆抗体及即用型EnVision免疫组化试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司.1.2方法组织切片经脱蜡至水后，参照说明书内容行EnVision免疫组化染色.采纳试剂盒内已知阳性的食管癌切片做阳性比照，以PBS代替一抗做空白比照.结果参照Tanaka等

5、的判定标准，以免疫组织化学记分值作为阳性的评判标准.记分值的算式为H=N1.N代表随机视察的10个高倍镜视野中平均阳性细胞数记分.平均阳性细胞数10%为O分，l%29%为1分，30%、59%为2分，60k74%为3分，75%为4分.I代表着色强度记分值，1分:弱（+,淡黄色），2分，中等（，棕黄色），3分：强（，深棕黄色）.显色强度与背景无明显差别者为阴性.若Hl为阳性，若Hl则为阴性.统计学处理：试验结果采纳SPSS12.O统计学软件进行分析处理，采纳方差分析组间差异、卡方检验二者之间的相关性PVO.05为差别有统计学意义.2结果2.lP27kipl,Skp2蛋白在食管癌及癌旁食管上皮中的表

6、达P27kipl,Skp2蛋白染色主要位于细胞核，部分胞质Skp2染色阳性，极少部分胞质P27kipl染色阳性，染色呈粗细不一的黄色至深棕黄色颗粒（图1,2）.97例食管癌中，P27kipl蛋白阳性者44例，Skp2蛋白阳性者47例;30例癌旁食管组织中，有28例P27kipl蛋白阳性表达，而Skp2蛋白均为阴性.统计分析显示P27kipl蛋白在食管癌中阳性率明显低于在癌旁食管组织的阳性率（Pit:0.01）,Skp2蛋白在食管癌组织中阳性率则明显高于癌旁食管组织（P】t;0.01）.2.2P27kipl,Skp2蛋白在各临床病理视察组中的表达P27kipl蛋白在有淋巴结转移的食管癌组织中的阳

7、性率为31.71%（13/41）,在无淋巴结转移组的食管癌组织中的阳性率为55.36%（31/56）.P27kipl蛋白表达阳性率在淋巴结转移阴性组中明显高于淋巴结转移阳性组（表D.P27kipl蛋白在高、中、低三组分化程度不同的食管癌组织中的阳性率呈依次降低，其中低等分化和中等分化组的阳性率较高等分化组显著降低（表D.在各年龄组、临床分期组、性别和瘤体大小组间，P27kipl蛋白和Skp2蛋白阳性表达率差异无统计学意义（Pgt:0.05）.表lP27kipl,Skp2蛋白在各临床病理视察组中的表达（略）2.3P27kipl与Skp2蛋白在食管癌中表达的相关性47例Skp2阳性的食管癌患者中有

8、32例P27kipl阳性表达（3性47）,阳性率为68.08%,在50例Skp2阴性的食管癌患者中P27kipl阳性表达者12例（12/50）,阳性率为24.00%,列联表交互作用检验2=19.00,Pit;0.01,两变量有交互作用.3探讨P27kipl是在1994年由Polyak等1发觉的一种细胞周期负性调控因子.P27kipl主要是通过其N端的两个丝氨酸化位点与细胞周期蛋白cyclinECDK2和/或cycli11DCDK4紧密结合，抑制CDK激酶的活性，发挥抑制细胞周期的作用，使细胞阻滞于Gl期2.现已证明3P27kipl存在于大多数的哺乳动物细胞中，在真核细胞周期调控中起至关重要的作

9、用.Skp2是新发觉的SKPlCullinFbox（SCF）多功能E3前复合体中的一种Fbox蛋白，在很多细胞周期调控因子的泛素依竟性蛋白水解途径中起到特异性识别底物的作用，从而参加细胞周期的调控4.本探讨结果显示正常食管上皮细胞P27kipl蛋白的阳性表达率（93.33%）明显高于食管癌细胞（45.36%）,与Kuo等5的试验结果一样，说明P27kipl蛋白的表达活性降低可促进食管上皮细胞的恶性增值.此外，在淋巴结转移阴性组的食管癌组织中，P27kipl蛋白的阳性率（55.36%）明显高于淋巴结转移阳性的食管癌组织中的阳性率（31.71%),高分化组中P27kipl蛋白的阳性率也显著高于中、

10、低分化组，但与各年龄、临床分期、性别和瘤体大小无关.该结果与Catzovelos等6报道的一样，提示P27kipl表达下降与食管癌的转移及侵袭实力有关.因此，临床上可通过检测P27kipl蛋白的表达，预料正常食管上皮癌变的风险、评判食管癌的恶性程度和患者的预后状况.本组资料表明，Skp2在30例癌旁食管组织阴性表达与食管癌中48.45%的阳性率比较差异有统计学意义(Pit;0.01),说明Skp2与食管癌的恶性进程关系亲密.Dowen等7在探讨42例浸润型宫颈癌标本时发觉，Skp2表达在高分化标本中呈低水平，随分化程度降低而表达增高.Hershko等8也检测到Skp2在分化良好的结肠直肠癌标本

11、中几乎缺如，随分化程度的降低其表达渐渐增高.本文的结论与此一样.此外，Skp2在淋巴结转移组的阳性率明显高于无淋巴结转移组，而与患病年龄、性别、临床分期及肿瘤大小无相关性.因此，检测Skp2也布.助于预料食道上皮增殖、癌变的发展趋势及瘤体分化程度的凹凸.Nagner等9在对苍老的纤维母细胞探讨中发觉，Skp2削减p27kipl则相对增多，细胞则被阻挡在Gl期，而不能进入S合成期.Kudo等10小组用免疫组化法检测37例口腔上皮鳞状细胞癌标本的Skp2表达，18口腔上皮鳞状细胞癌Skp2表达增高，伴p27kipl低表达.本文的探讨结果与上述报道相像，两变量间具有交互作用.说明Skp2和p27ki

12、pl二者在肿瘤发生、发展中关系亲密，若Skp2与p27kipl同时出现异样表达，Skp2表达增高，p27kipl表达降低，且二者呈负相关联时，该肿瘤细胞增殖旺盛、恶性程度高，淋巴结转移的可能性大，预后也较差.此外，针对Skp2和p27kipl的作用机制，采纳抑制Skp2表达和/或p27kipl的降解，可作为一个新的基因治疗的作用靶点.【参考文献】1PolyakK,KatoJY,SolomonMJ,etal.p27kipl,acyclinCDKinhibitor:1.inkstransforminggrowthfactorandcontactinhibitiontocellcyclearrest

13、J.GenesDev,1994,8(1):922.2NakayamaKI,HatakeyamaS,NakayamaK.Regulationofthecel1cycleattheGlStransitionbyproteolysisofcyclinEandp27kiplJ.BiochemBiIphysResCommun,2001,282(4):853-860.3Hengst1.,ReedSI.Translationcontralofp27kiplaccumulationduringthecellcyclej.Science,1996,271(5257):1861-1864.4PaganoM,Tam

14、SW,TheodorasM,etal.RoleoftheubiquitinproteasomepathwayinregulatingabunlanceofthecyclindependentkinaseinhibitorP27J.Science,1995,269(5224):682-685.5KuoMY,HsuHY,KokSH,etal.Prognosticroleofp27(kipl)expressioninoralsqusmouscellcareinomainTaiwanJ.OralOncol,2002,38(2):172-178.6CatzavelosC,BhattabharyaN,Un

15、gYC,etal.DecreasedlevelsofthecellcycleinhibitorP27kiplprotein:PrognosticimplicationsinprimarybreastcancerJ.NatMed,1997,3(2):227-230.7DowenSE,Scott,MukherjeeG,etal.OverexpressionofSkp2incarcinomaofthecervixdoesnotcorrelateinverselywithp27expressionJ.IntJCancer,2003,105(3):326-330.8HershkoD,BornsteinG

16、,BenIzhak0,etal.Inverserelationbetweenlevelsofp27(Kipl)andofitsubiquitinligasesubunitSkp2incolorectalcarcinomasJ.Cancer,2001,91(9):1745-1751.9WagnerM1HampelB,HutterE,etal.Metabolicstabilizationofp27insenescentfibroblastscorrelateswithreducedexpressionoftheFboxproteinSkp2J.ExpGerontol,2001,37(1):41-45.10KudoY,KitajimaS,SatoS,etal.Highe