WS_T 834—2024 刚地弓形虫试验临床应用.docx

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1、ICS11.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业WS/T834-准2024刚地弓形虫试验临床应用ClinicalapplicationoftestsforToxoplasmagondii2024-04-02发布2024-0901实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布刖S木标准为推荐性标准。本标准在GB/T302242013刚地弓形虫试验临床应用基础上制定。与GB/T302242013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：更改了术语刚地弓形虫（见3.1.2013年版的3.1）和弓形虫病（见3.3,2013年版的3.2）,增加了术语弓形虫感染（见3.2）；将安全预防措施更改为

2、生物安全（见4,2013年版的6）；将标本采集和处理更改为标本采集、转运和处理（见第5章，2013年版的第5章），增加了概述（见5.1）、直接镜检标本（见5.2）、组织培养标本（见5.3）、核酸检测标本（见5.4）和血清学检测标本（见5.5）；在检验方法中增加了概述（见6.1）,将刚地弓形虫病原学检查更改为病原学检查（见6.2,2013年版的4.1）,在直接镜检中增加了概述（见6.2.1.1）、体液标本（见6.2.1.2）、组织活检标本印片（见6.2.1.3）、组织活检标本切片（见6.2.1.4）、GiemSa法染色（见6.2.1.5）、光学显微镜镜检（见6.2.1.6）和结果判断（见6.2.

3、1.7）,将接种和组织培养更改为组织培养（见6.2.2,2013年版的4.1.2）；一在核酸检测中增加了概述（见6.2.4.1）、实时荧光PCR（见6.2.4.2）和二代测序（见6.2.4.3）；将刚地弓形虫抗体检测更改为抗体检测（见6.3,2013年版的4.2）,在抗体检测中增加了抗体检测指标（见6.3.2）和抗体检测方法（见6.3.3）,删除了刚地弓形虫IgG抗体检测（见2013年版的4.2.2）、刚地弓形虫IgM抗体检测（见2013年版的4.2.3）、刚地弓形虫IgA抗体检测（见2013年版的4.2.4）和刚地弓形虫IgE抗体检测（见4.2.5）；将试验选择更改为检验方法的选择，并移入检

4、验方法中（见6.4,见2013年版的A.2）,在检验方法的选择中增加概述（见6.4.1）、初筛实验室（见6.4.2）和确证实验室（见6.4.3）；将质量保证更改为质量控制（见7,2013年版的A.4）,并增加了概述（见7.1）、室内质控（见7.2）、实验室内结果可比性（见7.3）和实验室间结果比对（见7.4）；将免疫诊断试验的临床应用更改为免疫学试验的临床应用（见第8章，2013年版的第7章），增加了概述（见8.1）,将确定抗体状况更改为特殊人群发生感染的风险评估（见8.2,见2013年版的7.1）,将先天性感染的诊断更改为妊娠及孕前感染的诊断（见8.4,见2013年版的7.3）,将新生儿感染

5、的诊断更改为先天性感染的诊断（见8.5,见2013年版的7.4）；一在附录A中新增检验程序性能验证（见A.2）,删除了试验选择（见2013年版的A.2）、假阳性反应（见2013年版的A.3）、质量保证（见2013年版的A.4）和参考实验室（见2013年版的A.5）；增加了附录B。本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法规司负责统筹管理。本标准起草单位：北京大学人民医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、首都医科大学附属北京友谊医院、武汉大学中南医院、四川大学华西医

6、院。本标准主要起草人：赵晓涛、王清涛、张正、苏建荣、李一荣、岳志红、马莹、马立艳、岳育红、夏长胜。刚地弓形虫试验临床应用1范围本标准规定了临床实验室刚地弓形虫试验及其临床应用，主要包括生物安全、标本的采集转运和处理、检验方法、质量控制和免疫学试验的临床应用。本标准适用于临床实验室开展刚地弓形虫的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB19781医学实验室安全要求GB/T38576人类血液样本采集与处理GB/T38735人类尿液

7、样本采集与处理WS/T486弓形虫病的诊断WS/T573感染性疾病免疫测定程序及结果报告WS/T661静脉血液标本采集指南CNAS-C1.02-001医学实验室质量和能力认可准则的应用要求CNAS-G1.037临床化学定量检验程序性能验证指南CNAS-G1.038临床免疫学定性检验程序性能验证指南3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1刚地弓形虫ToxopIasmagondii刚地弓形虫是法国NieOIIe和Manceaux于1908年首先从北非刚地梳趾鼠（6?e。办cOUSgond/）单核细胞内发现的一种原虫，其虫体似弓形或半月形，故被命名为刚地弓形虫，简称弓形虫。弓形虫整个生活史过程

8、包括5个发育期，即速殖子，在假包囊内或外；缓殖子，在组织包囊内：子泡子，在卵囊内；裂殖体，内含裂殖子；配子体，有雌（大）配子体和雄（小）配子体。弓形虫感染ToxopIasmagondi/infection弓形虫能寄生于人体所有有核细胞，猫科动物是其唯一的终末宿主，其它哺乳动物、鸟类和人类都可为其中间宿主。感染后弓形虫经人体消化道黏膜、损伤的皮肤和胎盘等途径随血液或淋巴液扩散到全身有核细胞内，形成包囊后可长期寄生于中枢神经系统或横纹肌内，免疫功能正常情况下可不出现明显临床症状和体征。感染途径包括先天性和获得性两种。先天性感染是指虫体经母体胎盘垂直传染给胎儿。获得性感染方式主要包括食入被弓形虫卵囊

9、污染的食物或水、摄入含有包囊的未熟肉类或乳制品、输血或器官移植，以及实验室工作人员接触污染器材后，不慎经口、鼻和眼或注射器针头刺伤皮肤等途径，亦可造成感染。3.3弓形虫病toxoplasmosis弓形虫寄生于人体并侵犯脑或眼、肝、心、肺等器官，破坏有核细胞引起相应的临床症状和体征。免疫功能低下者或缺陷者易发病，为机会性人兽共患寄生虫病。4生物安全在标本的采集、储存、转运、处理、检测，以及检测后剩余标本的处理等操作过程中，特别是在风险较高的直接镜检和组织培养等操作过程中，存在感染相关人员的风险，应严格按照医学实验室安全要求规范操作。5标本采集、转运和处理5.1 概述标本须按规范要求采集，对疑似病

10、例应多次采集送检；标本应做好标记，可使用粘贴好条形码的标本采集容器盛放标本，标本条形码至少包含唯一随机产生的条形码号、患者标识（包括患者姓名和住院患者住院号或是门诊患者就诊卡号）、检测项目、采集时间和执行科室等信息；标本不能及时送检时，通常可在-20C以下冷冻保存180天。冻存标本如需多次使用，能分装的应分装，避免多次冻融。不同类型和不同检验项目的标本，均应避免细菌污染，按照要求常温或冷链转运。5.2 直接镜检标本用于直接观察弓形虫的标本包括体液标本（脑脊液、支气管肺泡灌洗液、痰、唾液、胎盘渗出液等）和组织活检标本（脑组织、淋巴结、肺组织、骨髓、肝脏组织、脾脏组织等）。骨髓标本应使用EDTA抗

11、凝。将无菌采集的标本放入采样管或采样瓶内，组织活检标本应浸没在无菌生理盐水中保湿，标记待检标本，常温3天内送检。若是多种标本需要同一天平行检测，在预固定后可在-20C以下冷冻保存。对于中枢神经系统有局灶性体征或病灶产生占位效应的患者，慎重行腰椎穿刺，特别是病变位于颅后窝时；如果未见局灶性体征和明显占位效应，可进行脑脊液检查。如果采自尸体，还可取脑、肝、脾、肺、心、肾、眼球、肌肉和肠道等相应病变部位的组织。5.3 组织培养标本用于组织培养的标本包括脑组织、淋巴结、骨髓等。将无菌采集的标本放入采样管或采样瓶内，组织标本应浸没在无菌生理盐水中保湿，标记待检标本，常温立即送检。5.4 核酸检测标本核酸

12、检测标本的采集应严格遵守无菌原则，标本应直接从患者感染部位的体液或组织中进行采集。当患者存在感染表现但病情危重或不能耐受有创操作时，宜考虑采集患者的血液标本.对于有菌部位的标本，在标本采集过程中应尽量避免引入该部位的正常菌群。所有采集的标本均应及时送检，如不能及时检测，应于-20C以下冷冻保存。标本远距离运输应采用冷链运输。核酸检测标本类型包括血液标本、体液标本（如尿液、脑脊液、房水、支气管肺泡灌洗液、胸腔积液、胎盘渗出液等）和组织标本（如脑组织、淋巴结、肺组织、骨髓、肝脏组织、脾脏组织等）。血液和骨髓标本应使用EDTA抗凝。5.5 血清学检测标本应采用体外诊断试剂盒说明书标明的标本类型进行检

13、测。抗体和抗原检测使用的标本类型包括血清、血浆、脑脊液和房水。脑脊液和房水应与同一时间采集的血清或血浆标本平行检测。但目前国内尚无适用于脑脊液和房水标本检测的试剂盒。标本可在常温下过夜运送，如果运送需数天，则应冷链运送。标本在4可储存7天，也可于-20C以下冷冻保存。6检验方法6-1概述弓形虫感染和弓形虫病的实验室检验方法主要包括病原学检查和抗体检测，根据实验室开展的检验项目，可将实验室分为弓形虫病初筛实验室和确证实验室。6.2病原学检查6. 2.1直接镜检6.1 .1.1概述直接镜检简便，特异性高，灵敏度低，要求检测人员具备丰富的形态学识别经验。此外，该法阴性不能排除，必须做进一步检查。6.

14、2 .1,2体液标本500g离心10min,取沉淀滴在洁净玻片上制成涂片，GiemSa法染色后镜检。6.2.1.3组织活检标本印片将组织标本置于两张洁净玻片之间，轻压，再将玻片打开，印片即可制成。室温干燥，无水乙醇固定，GienlSa法染色后镜检。6.2.1.4组织活检标本切片用10%甲醛溶液固定，水冲洗，依次经70%、80%、90%乙醇溶液脱水，各30min,再浸入95%、100%乙醇溶液各2次，每次20min,浸蜡、石蜡包埋后连续切片，厚度7IlnlK）m,贴片、二甲苯脱蜡后备用。6.2.1.5GienlSa法染色将染液覆盖涂片、印片或是切片表面，染色Ilnin3min,滴加等量的磷酸盐缓

15、冲液至玻片上，轻吹混匀，4min-8min后用缓冲液冲洗，晾干。6.2.1.6光学显微镜镜检在IoXlOO倍油镜下，位于组织细胞内的弓形虫速殖子呈新月形，一端较尖、一端钝圆，大小约3PIn7m2Hln4m,经GiemSa法染色后胞浆呈蓝色，胞核呈紫红色位于虫体中央偏后，速殖子既可独立存在，也可在组织细胞内不断增殖，达数个至十几个，虫体被组织细胞膜包绕形成假包囊。弓形虫缓殖子大小约5Hnl100m,数个至数千个虫体位于圆形的包囊内，囊壁坚韧。6.2.1.7结果判断镜检发现假包囊或包囊判为病原学阳性。6.2.2组织培养组织培养操作复杂、成功率低、质量控制困难，实验室不常规开展。组织培养通常将患者体液如脑脊液、支气管肺泡灌洗液或羊水离心沉淀，用培养基将沉淀物重悬后与组织细胞(猴肾或猪肾细胞等)共孵育以分离、鉴定虫体。6.2.3抗原检测一酶联免疫吸附试验(enzymeIinkedimmunosorbentassay,E1.ISA)血清或体液中的循环抗原比特异性抗体出现早，是筛查病原体存在的重要依据，可使用E1.ISA双抗体夹心法检测，但可能存在假阳性和假阴性结果。有关弓形虫检测试剂盒和检验程序性能验证的要求见附录A。目前国内尚无通过国家药品监督管理局注册的弓形虫抗原检测试剂盒。如果实验