GB_T42470-2023纳米技术基于斑马鱼胚胎的纳米材料毒性评价.docx

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1、ICS07.120CCSC04OB中华人民共和国国家标准GB/T424702023纳米技术基于斑马鱼胚胎的纳米材料毒性评价NanotechnologiesAssessmentofnanomaterialtoxicityusingdechorionatedzebrafishembryo(ISOTS22082:2020,MOD)2023-03T7发布2023To-Ol实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会目次前言I引言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14缩略语25材料25.1 生物体（斑马鱼，Daniorerio）25.2 储备液35.3 阳性对照36设备36.1 技术设备36.2

2、 分析仪器37步骤47.1 养殖47.2 产卵刺激47.3 胚胎破膜57.4 纳米材料储备液的制备67.5 试验浓度67.6 纳米材料的分散67.7 阳性对照化学物：3,4-二氯苯胺67.8 试验方法77.9 数据分析88试验报告88.1 试验步骤88.2 报告中包含的信息8附录A（资料性）机械破膜法10附录B（资料性）斑马鱼胚胎产卵步骤11附录C（资料性）结果验证12参考文献13前言本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件修改采用IS0/TS22082:2020纳米技术基于斑马鱼胚胎的纳米材料毒性评价，文件类型由ISo的技术规范调整

3、为我国的国家标准。本文件与IS0/TS22082:2020的技术差异及其原因如下：一原图1不符合5.1描述中雌鱼大雄鱼小的形态特征，因此更改了图1中雄性及雌性斑马鱼图片（见图1）；在5.2中增加了注释内容，引用国家标准对纯净水的质量做了说明（见5.2）;一一在5.2中增加了对后文储备液配置方法部分的引用（见5.2）;6.1.2中光照周期不符合常规实验及国内惯例，故引用相关国家标准，更改了光照周期的数值（见6.1.2）;一按照国内惯例，在7.3.2增加了“分析纯”来界定化学品的纯度级别（见7.3.2）;7.8.3中试验步骤需顺序进行，因此更改了各步骤前的“一”符号，将其修改为英文字母编号（见7.

4、8.3）ISO/TS80004-2、OECDTG236界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1增溶剂solubilizingagent在溶液中起到分散和稳定纳米材料作用的溶剂或分散剂。3.2产卵spawning将卵排到水中受精。3.3阳性对照positivecontrol通过特定的测试方法进行评价时，可以证明测试系统的适用性，即在测试系统中产生可重复的、适当的阳性或反应性的任何充分表征的材料或物质。来源：ISO10993-10:2010,3.143.4剂探索试验range-findingtest简化的急性试验，将试验生物体暴露在大剂量范围的纳米材料试验溶液中，以确定用于正式试验的浓度范围。

5、注：该试验包括至少5浓度的纳米材料处理组和未经处理的对照组。来源：OECDTG236:2013,有修改3.5半数致死浓度1.C$0有毒物质导致一组试验生物体半数(50%)死亡的浓度。注：通常该物质的暴露水平是连续的，IJCso是根据个特定的暴露期来定义的。来源：ISO6107-3:1993,39,有修改4缩略语下列缩略语适用于本文件：DO:溶解氧(dissolvedoxygen)DPF:受精后天数(daypostfertilization)EM:胚胎培养基(embryomedia)HPF:受精后小时数(hourpostfertilization)NOAE1.:未观察到有害作用水平(noobse

6、rvedadverseeffectlevel)5材料5.1 生物体GS马鱼，Daniorerio)斑马鱼(见图D是鲤科的一种热带淡水硬骨鱼，自然分布在印度、巴基斯坦、孟加拉国、尼泊尔和缅甸。成年斑马鱼的平均体长为2cm3cm,并有蓝色条纹，类似于斑马的身体侧面。成年雄性斑马鱼的身体较瘦，有蓝色和金色条纹。雌性斑马鱼腹部发白，身体比雄性大，有银色而非金色条纹。斑马鱼可以在水族箱中饲养和繁殖，器官发生在5个DPF内完成，约3个月成年，寿命约为2年3年。a）雄性b）雌性图1斑马鱼5.2 储备液使用纯净水现用现配（见7.4）。实验室用水达到GB/T66822008中规定的最低标准。5.3 阳性对照3,

7、4-二氯苯胺（3,4-DCA）（CAS#95-76-1）。6设备6.1 技术设备6.1.1 容器可以使用多孔板（6孔或12孔）进行化学物暴露。为防止水分在暴露过程中蒸发，宜使用生物相容性基材（如封口膜或透明的自粘箔）密封容器。6.1.2 孵化器孵化温度控制在27C1,光照周期控制为14:10（08：暗）（见GB/T396492020）.注：原ISO技术规范中光照周期为10:14（明：暗）,但这一光照周期不符合常规试验及国内惯例，故将光照周期修改为14:10（明：暗）。6.1.3 显微镜体视或倒置显微镜，放大倍数不低于80倍。6.1.4 K三M通常由一个互相匹配的产卵框和一个稍大的收集缸组成，尺寸不限。产卵框底部的网格尺寸为2mm0.5mm,可使排放的卵立刻掉落，以