薄层色谱法在强力脑心康胶囊质量标准分析方法中的应用研究.docx

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1、摘要：为完善强力脑心康胶囊质量检验标准，依据2015版中华人民共和国药典四部通则药品质量标准分析方法验证指导原则要求，采用薄层色谱法，对强力脑心康胶囊的主要成分一一蜜环菌提取物中的多糖和肽进行鉴别分析实验，实验结果表明，薄层色谱法专属性高，重现性、耐用性好。关键词：薄层色谱法；强力脑心康胶囊；蜜环菌提取物；多糖0引言薄层色谱法（T1.C）,是指将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，使其呈一均匀薄层，待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验

2、技术，也常用于跟踪反应进程。依据2015版中华人民共和国药典四部通则药品质量标准分析方法验证指导原则要求，利用薄层色谱法，对强力脑心康胶囊质量标准中所增加的蜜环菌提取物多糖与肽的检测项进行分析方法的研究，以完善该产品的质量检验标准，确保该产品质量满足患者需求。1 实验设备、仪器与试剂1.1 实验设备与仪器DHG202型电热干燥箱、WS2-133-85-2型电热恒温水浴锅、202-0型台式干燥箱、HHBl1-42型电热恒温培养箱；DT-100型带光分析天平、TG-328A电光分析天平、AG135型电子天平、JD-200多功能电子天平；SK3200HP型超声波清洗器、DS10260超声波清洗器；U

3、VT型三用紫外分析仪；QY-20三用紫外分析仪；XS-810生物显微镜；ZH-2自动漩涡混合器、YXQ.SG46.280手提式煤电两用消毒器。1.2 试剂石油酸、醋酸乙酯、苯、磷铝酸；香草醛。2药材标准1.1 丹参本品为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎。春、秋两季采挖，除去泥沙，干燥。本品应符合2015版中华人民共和国药典一部丹参项下的有关规定，并以此作为鉴定依据。1.2 蜜环菌（提取物）本品为白蘑科真菌蜜环菌ArmiIIariamelIea（Vane.ex.Fr.）Quel.经液体发酵培养，分离提取制得的干燥菌粉。本品所含多糖以无水葡萄糖（C6h6）计

4、，不得低于5.0%,所含肽不得低于5.0%o本品应符合国家药品标准（化学药品地方标准上升国家标准）WS-100Ol-（HD-1224）-2002“蜜环菌”项下的有关规定，并以此作为鉴定依据。1.3 蜂王浆（冻干粉）本品为工蜂咽下腺和上腭腺分泌的，主要用于饲喂蜂王和蜂幼虫的乳白色、淡黄色或浅橙色浆状物质。本品应符合中华人民共和国国家标准GB96972008“蜂王浆ROyaljeIIy”和中华人民共和国国家标准GB215322008“蜂王浆冻干粉1.yoPhiIiZedroyaljellyPoWder”项下的有关规定,并以此作为鉴定依据。3 强力脑心康胶囊的制备取丹参75g,粉碎成细粉；剩余丹参粉

5、碎成粗粉，加水煎煮三次，第一、二次各煎煮2h,第三次煎煮3h,合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.301.32(70)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；蜜环菌提取液减压浓缩至相对密度为1.301.32(70)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉，与上述细粉混匀，制成颗粒，干燥；蜂王浆冷冻干燥成细粉后，与上述颗粒混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。4 方法与结果4.1 蜜环菌提取物中多糖的鉴别4.1.1材料(1)对照溶液(蜜环菌提取物)；(2)空白溶液(石油酸)；(3)阴性样品(以蜜环菌提取物为空白制得的样品)；(4)成品：样品1(20170401)、样品2(20170402)、样品3(20170

6、403)；(5)硅胶G薄层板，分别为自制、厂牌1、厂牌2。4.1.2样品制备4.1.2.1对照溶液取蜜环菌提取物1g,加石油酸（6090）10111.,时时振摇，浸渍1h,滤过，滤液浓缩至约1m1.,作为对照溶液。4.1.2.2空白溶液取石油酸（6090）溶液为空白溶液。4.1.2.3阴性样品溶液取阴性样品1.5g,加石油酸（6090）10m1.,时时振摇，浸渍1h,滤过，滤液浓缩至约1m1.,作为阴性样品溶液。4.1.2.4成品样品溶液取3个批号的成品样品颗粒适量，研细，分别精密称取1.5g,加石油酸（6090）10m1.,时时振摇，浸渍1h,滤过，滤液浓缩至约1m1.,作为成品样品溶液。4

7、.1.3结果判定4.1.3.1对照溶液按照2015版中华人民共和国药典四部薄层色谱法试验规定，吸取上述对照溶液51.,点样于竣甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油酸（6090）-醋酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在110、IOnlin条件下，立即检视，应有紫色斑点。4.1.3.2空白溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，无斑点呈现。4.1.3.3阴性样品溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，无斑点呈现。4.1.3.43批成品样品溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，显相同的紫色斑点。4.1.4分析方法研究4.1.4.1专属性4.1.4.1.1定义当存在其他成分，

8、如杂质、降解物、添加物（缓冲液、赋形剂、稳定剂）等时，采用的分析方法能正确测定出被测成分的特性。不含被测成分的供试品均不得干扰检测。在本试验中，采用对照溶液、空白溶液、阴性样品溶液、成品样品溶液，在同一硅胶G薄层板上做斑点颜色对比，其他成分的存在应对其检测结果无干扰。4.1.4.1.2具体方案取“4.1.2样品制备”的各样品溶液各51.,点样于竣甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油酸（6090）-醋酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在110.10Inin条件下，立即检视。4.1.4.1.3判定标准成品样品溶液色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，显相同

9、的斑点；空白溶液与阴性样品溶液色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，则无上述斑点呈现。4.1.4.2重复性4.1.4.2.1定义分析方法的重复性是指在同样的操作条件下，检测结果在较短时间间隔的精密度。本试验中的重复性是对不同批号的样品进行连续多次测定，比较测定结果的精密度。4.1.4.2.2具体方案取“4.1.2样品制备”的对照溶液、3批成品样品溶液各51.,分别点样于同一硅胶G薄层板上，以石油酸（6090）-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在110、10min条件下，立即检视，应有相同斑点。以此法，对3批强力脑心康胶囊样品连续重复测定3次，比较3次结果，

10、考察该检测方法的重复性。4.1.4.2.3判定标准对3个批号的强力脑心康胶囊样品连续重复测定3次，测定结果应一致，无明显差异。4.1.4.3耐用性4.1.4.3.1定义在测定条件有较小变动时，测定结果不受影响的承受程度，为该检测方法用于常规检验提供依据。本实验中的耐用性是对不同厂家的硅胶G薄层板进行连续多次测定，比较测定结果的耐用性。4.1.4.3.2具体方案取“4.1.2样品制备”的对照溶液、3批成品样品溶液各51.,分别点样于同一个不同厂牌的竣甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油酸（60-90）-醋酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在110。、IO

11、nlin条件下，立即检视，比较3个厂牌的结果，考察该检测方法的耐用性。4.1.4.3.3判定标准对3个批号的强力脑心康胶囊样品，采用3个厂牌的硅胶G薄层板重复测定3次，测定结果应一致，无明显差异。4.1.5结果4.1.5.1专属性实验在本试验中，采用对照溶液、空白溶液、阴性样品溶液、成品样品溶液，在同一硅胶G薄层板上做斑点颜色对比，其他成分的存在对其检测结果无干扰，空白样品与阴性样品没有相同斑点呈现，其专属性较高。4.1.5.2重复性实验对3批强力脑心康胶囊样品连续重复测定3次，比较3次测定的结果。结果表明，3次测定结果一致，无明显差异。4. 1.5.3耐用性实验对3批强力脑心康胶囊样品，采用

12、3个厂牌的硅胶G薄层板连续重复测定3次，比较3次测定的结果。结果表明，采用3个厂牌的硅胶G薄层板的测定结果无明显差异。4.2蜜环菌提取物中肽的鉴别4.2.1材料（1）对照溶液（蜜环菌提取物）；（2）空白溶液（甲醇）；(3)阴性样品(以蜜环菌提取物为空白制得的样品)；(4)成品：样品1(20170401)、样品2(20170402)、样品3(20170403)；(5)硅胶G薄层板，分别为自制、厂牌1、厂牌2。4.2.2样品制备4.2.2.1对照溶液取蜜环菌提取物1g,加甲醇10m1.,时时振摇，浸渍1h,滤过,滤液浓缩至约1m1.,作为对照溶液。4.2.2.2空白溶液取甲醇溶液为空白溶液。4.2

13、.2.3阴性样品溶液取阴性样品1.5g,加甲醇10m1.,时时振摇，浸渍1h,滤过，滤液浓缩至约1m1.,作为阴性样品溶液。4.2.2.4成品样品溶液取3个批号的成品样品颗粒适量，研细，分别精密称取1.5g,加甲醇10m1.,时时振摇，浸渍1h,滤过，滤液浓缩至约1m1.,作为成品样品溶液。4.2.3结果判定4.2.3.1对照溶液按照2015版中华人民共和国药典四部薄层色谱法试验规定，吸取上述对照溶液51.,点样于竣甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%磷铝酸乙醇溶液，在110C、10min条件下，立即检视，应有蓝色斑点。4.2.3.

14、2空白溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，无斑点呈现。4.2.3.3阴性样品溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，无相同的斑点。4.2.3.43批成品样品溶液在与对照溶液色谱相应的位置上，显相同的斑点。4.2.4分析方法研究4.2.4.1专属性4.2.4.1.1定义当存在其他成分，如杂质、降解物、添加物（缓冲液、赋形剂、稳定剂）等时，采用的分析方法能正确测定出被测成分的特性。不含被测成分的供试品均不得干扰检测。在本试验中，采用对照溶液、空白溶液、阴性样品溶液、成品样品溶液，在同一硅胶G薄层板上做斑点颜色对比，其他成分的存在应对其检测结果无干扰。4.2.4.1.2具体方案取“4.2.2样品制备”的各样

15、品溶液各51.,点样于竣甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%磷铝酸乙醇溶液，在IlOC、IOiTIin条件下，立即检视。成品样品溶液色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；空白溶液与阴性样品溶液色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，则无上述斑点呈现。4.2.4.2重复性4.2.4.2.1定义分析方法的重复性是指在同样的操作条件下，检测结果在较短时间间隔的精密度。本试验中的重复性是对不同批号的样品进行连续多次测定，比较测定结果的精密度。4.2.4.2.2具体方案取“4.2.2样品制备”的对照溶液、3批成品样品溶液各51.,分别点样于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%磷铝酸乙醇溶液，在IlOC、IOiTIin条件下，立即检视，应有蓝色斑点。以此法，对3批强力脑心康胶囊样品连续重复测定3次，比较3次的测定结果，考察该检测方法的重复性。4.2.4.2.3判定标准对3个批号的强力脑心康胶囊样品连续重复测定3次，测定结果应一致，无明显差异。4.2.4.3耐用性