3.霉菌、放线菌的形态观察-4学时.docx

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1、试验三霉菌、放线菌的形态视察一、试验目的1 .学习并驾驭视察放线菌、霉菌形态的基本方法。2 .初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形态特征。二、试验原理1 .霉菌（真核微生物霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透亮，菌落与培育基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一样，有霉味。霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到肯定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生抱子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及包子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。菌丝的抱子较大，在低倍镜下即可清楚视察到有隔或无隔菌丝和袍子及巨大的抱子囊。霉菌菌

2、丝和抱子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且抱子很简单飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片特点是：（八）细胞不变形；（b）具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；（C）溶液本身呈蓝色，有肯定染色效果。霉菌的菌丝、分生袍子梗和分生袍子的形态常作为分类的重要依据。曲霉形态特征：表面灰绿色，菌体有很多困难的分枝菌丝构成。养分菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生抱子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生很多小梗，小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生抱子。根霉形态特征：匍匐菌丝弧形，无色，向四周扩

3、散。放线菌形态特征：呈菌丝状生长，以抱子繁殖。显微镜下呈紫红色。青霉形态特征：菌丝初期白色，颜色渐渐由白转变为绿或蓝，菌丝有隔膜。气生菌丝特化成子实体，子实体类型为分生抱子头。霉菌的培育和视察方法：（1）载玻片培育视察法：无菌操作将培育基薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培育，霉菌即在载玻片和盖玻片之间有限的空间内沿盖玻片横向生长。培育肯定时间后，将载玻片上的培育物置于显微镜下视察，这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于视察不同发育期的培育物。（2）玻璃纸培育视察法：与放线菌的玻璃纸培育视察方法相像，这种方法用于视察不同生长阶段霉菌的形态，也可获得良好的效果。（3）干脆制片视察法：用解剖针

4、挑取少量培育物置于预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。2 .放线菌（原核微生物）放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培育基中的养分菌丝（或称基内菌丝，简称基丝）和生长在培育基以上的气生菌丝（简称气丝）。有些气生菌丝分化成袍子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，抱子常呈圆形、椭圆形或杆状。能否产生气生菌丝及袍子的形态和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透亮、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。菌落与培育基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一样，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。放线菌在

5、显微镜下一般气丝在上，基丝在下，气丝色暗，基丝较透亮。有的放线菌只产生基丝而无气丝。放线菌的培育和视察方法：（1）托片法：在放线菌平板上杆上盖玻片后培育，使放线菌菌丝沿着培育基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。视察时用镣子拔出盖玻片，擦去背面培育物，将有菌的一面朝上置于载玻片上，干脆镜检。宜用略暗光线视察，低倍镜一高倍镜；染色后视察效果更好。（2）玻璃纸法：玻璃纸是一种透亮的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在平板表面，接种放线菌，经培育，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。视察时先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。优点：可视察到放线菌自然生长状态下的特征和不同生长期

6、的形态。留意：整过程勿触动菌面培育物。（3）印片法：将要视察的放线菌的菌落或菌苔干脆印在载玻片上，经染色后视察。该方法主要用于视察抱子丝的形态，抱子的排列及其形态等，但形态特征可能有所变更。用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培育基一起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻轻按压菌苔，固定，染色后镜检。三、试验器材1 .菌种放线菌划线平板28,35天后培育物；曲霉（ASPergilhlSSP.）、根霉（R历zop&s5.）和青霉（&汕7“mSP.）划线平板28,23天后培育物。2 .仪器显微镜、培育皿、载玻片、牙签、擦镜纸、吸水纸、染色缸等。3 .试剂乳酸石炭酸棉蓝染色液，石炭酸复红染液，生理

7、盐水。四、试验步骤（一）霉菌视察：1 .霉菌自然生长状态下的视察：将培育3天的霉菌培育皿打开，放在显微镜低倍镜下找寻菌落的边缘，干脆视察菌丝，分生抱子梗和分生抱子。2 .干脆制片染色视察：于干净载玻片上，加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用牙签从霉菌菌落的边缘外（培育基平面下方一点儿）取少量带有孩子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后当心地盖上盖玻片，留意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜视察，必要时再换高倍镜。注：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响视察。3 先将挑取的菌丝置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的抱子，然后置于染液中。（二）放线菌视察：1

8、 .放线菌自然生长状态下的视察将培育34天的放线菌培育皿打开，放在显微镜低倍镜下找寻菌落的边缘,干脆视察菌丝，抱子丝和抱子。2 .印片法染色视察（1）用接种铲或解剖刀（或牙签）将平板上的菌苔连同培育基切下一小块,菌面朝上放在载玻片中心。（2）用另一干净载玻片置火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻垂直按压，将其压碎，使培育物（气丝、抱丝或袍子）粘附在后一块载玻片中心，弃去培育基,制成涂片，将有印迹的一面朝上，通过火焰23次固定。注：不能压碎培育基，也不能将抱子或菌丝压入培育基。（3）用石炭酸复红染液或吕氏碱性美蓝染液覆盖印迹，染色0.5l分钟后水洗。（4）干燥后，用油镜视察养分菌丝,抱子丝及抱子的形态

9、。五、试验结果绘图说明所视察到的青霉和放线菌主要形态特征。六思索题1 .镜检时，如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？2 .显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区分是什么？补充材料：1 .霉菌对人类生活和生产能产生哪些主动作用和消极作用？答：霉菌分布极其广泛，只要存在有机物就有它们的踪迹。它们在自然界扮演者最重要的有机物分解者的角色，从而把其他生物难分解利用的数量巨大的困难有机物如纤维素和木质素彻底分解转化，称为绿色植物可以重新利用的养料，促进了整个地球上生物圈的旺盛发展。主动作用：（1）工业上的柠檬酸、葡萄糖酸、淀粉酶、蛋白酶等酶制剂，青霉素、头抱霉素等抗生素，核黄素等维生素，麦角碱等生

10、物碱，真菌多糖、赤霉素等产物的发酵生产；利用AbSidia（犁头霉）等对兹体化合物的生物转化以生产兹体激素类药物；以及利用霉菌在生物防治、污水处理和生物测定等方面的应用；（2）在食品制造方面，如酱油的酿造和干酪的制造等（3）在基础理论探讨方面,霉菌是良好的试验材料消极作用：（1）大量真菌可引起工农业产品霉变（2）是植物最主要的病原菌，引起各种植物的传染性病害，如马铃薯晚疫病，稻瘟病和小麦锈病等（3）引起动物和人体传染病，如皮肤廨病症等；另有少部分霉菌可产生毒性很强的真菌毒素，如黄曲霉毒素。2 .在自然界和实际应用中放线菌有什么作用？答：实际应用：（1）产生抗生素；（2）近年来筛选到的很多新的生化药物多数是放线菌的次生代谢产物，包括抗癌剂、酶抑制剂、抗寄生虫剂和农药杀虫剂等；（3）放线菌还是很多酶、维生素的产生菌；自然界：放线菌在兹体转化、石油脱蜡和污水处理中也有重要作用。由于很多放线菌有极强的分解纤维素、石蜡、角蛋白、琼脂和橡胶等的实力，故它们在环境爱护、提高土壤活力和自然界物质循环中起着重大作用。