24、第24章 病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

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1、医学微生物学医学微生物学病毒感染的检查方法与防治原则重点及难点重点及难点标本的采集和送检标本的采集和送检病毒分离培养方法病毒分离培养方法病毒感染的血清学诊断方法病毒感染的血清学诊断方法人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法l标本的采集与送检标本的采集与送检l病毒的分离与鉴定病毒的分离与鉴定l病毒感染的诊断病毒感染的诊断一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检采集急性期标本采集急性期标本使用抗生素使用抗生素冷藏保存，快速送检冷藏保存，快速送检采集双份血清采集双份血清二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的

2、分离培养（一）病毒的分离培养u动物接种动物接种u鸡胚培养鸡胚培养u细胞培养细胞培养动物接种动物接种p应用：无敏感细胞培养的病毒应用：无敏感细胞培养的病毒p优点：结果易观察，可建立动物模型优点：结果易观察，可建立动物模型p缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒，缺点：要有饲养条件，费用高，有潜伏病毒，对许多人类病毒不敏感对许多人类病毒不敏感动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养p优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作优点：对多种病毒敏感，条件易控制，操作 简单，成本较低简单，成本较低p缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚缺点：无病毒增殖指标；有些病毒可致鸡胚死亡死亡鸡鸡胚胚接接种种部部位位示示意意图

3、图 单层细胞单层细胞 悬浮细胞悬浮细胞根据细胞生根据细胞生长情况长情况 原代细胞原代细胞 二倍体细胞二倍体细胞 传代细胞系传代细胞系根据细胞来源、根据细胞来源、染色体特征及染色体特征及传代次数传代次数细胞培养细胞培养1.原代细胞原代细胞 primary cells对多种病毒敏感对多种病毒敏感来源困难来源困难,获取成本高获取成本高可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒 2.二倍体细胞二倍体细胞 diploid cells对多种病毒敏感对多种病毒敏感不带病毒，无致癌潜能不带病毒，无致癌潜能用于病毒疫苗生产用于病毒疫苗生产 3.传代细胞传代细胞 continuous cell对多种病毒敏感对多种病毒敏感繁殖能

4、力高，传代时间长繁殖能力高，传代时间长不能用于病毒疫苗生产不能用于病毒疫苗生产病毒在培养细胞中的增殖指征病毒在培养细胞中的增殖指征:p细胞病变细胞病变p红细胞吸附红细胞吸附p病毒干扰作用病毒干扰作用p细胞代谢的改变细胞代谢的改变细胞病变效应细胞病变效应 cytopathic effect,CPE 正常细胞正常细胞细胞病变早期细胞病变早期细胞病变晚期细胞病变晚期 红细胞吸附红细胞吸附 hemadsorption 带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊带有血凝素的病毒感染细胞后，能与脊椎动物红细胞结合椎动物红细胞结合鸡红细胞吸附于流感病毒感染的细胞鸡红细胞吸附于流感病毒感染的细胞 风疹病毒风疹病毒 人

5、胚肾细胞人胚肾细胞CPE()埃可病毒埃可病毒 人胚肾细胞人胚肾细胞CPE()人胚肾细胞人胚肾细胞埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(+)待检标本待检标本风疹病毒风疹病毒(-)风疹病毒风疹病毒(+)病毒干扰作用病毒干扰作用 viral interference 某些病毒不引起某些病毒不引起CPE,但可干扰感染同一但可干扰感染同一细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的细胞另一病毒增殖，抑制该病毒的CPE。（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 形态学鉴定形态学鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 分子生物学鉴定分子生物学鉴定1.形态学鉴定形态学鉴定 光学显微镜光学显微镜 巨细胞病毒包涵体巨细胞病毒包涵体透射电镜透射电镜

6、SARS病毒病毒Ab 方方法法包包括括Ag 2.血清学鉴定血清学鉴定用已知特异性抗体对病毒进行种用已知特异性抗体对病毒进行种、型型和亚型的鉴定和亚型的鉴定ELISA中和试验中和试验血凝抑制试验血凝抑制试验补体结合试验补体结合试验 方方法法包包括括3.分子生物学方法鉴定分子生物学方法鉴定 对病毒的蛋白抗原、核算进行检测对病毒的蛋白抗原、核算进行检测蛋白印迹技术蛋白印迹技术核酸扩增核酸扩增核酸杂交核酸杂交基因芯片基因芯片基因测序基因测序新病毒的鉴定新病毒的鉴定 l核酸类型的测定核酸类型的测定l理化性状的检测理化性状的检测l基因测序和生物对比基因测序和生物对比（三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量

7、与感染性测定u50%组织细胞感染量组织细胞感染量u红细胞凝集实验红细胞凝集实验u空斑形成试验空斑形成试验 1.50组织细胞感染量组织细胞感染量 50 tissue culture infectious dose,TCID50原理：测定原理：测定50%细胞出现细胞出现CPE的最小病的最小病毒量毒量以以CPE作指标，判断病毒感染性和毒力作指标，判断病毒感染性和毒力测定活病毒数量测定活病毒数量 +-2.红细胞凝集实验红细胞凝集实验 red cell agglutination test 原理：测定使红细胞发生凝集的最小原理：测定使红细胞发生凝集的最小病毒量病毒量测定病毒总量（活病毒测定病毒总量（活病

8、毒+死病毒）死病毒）凝集效价：能使红细胞呈凝集效价：能使红细胞呈+凝集的病毒最高稀释凝集的病毒最高稀释度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位度为凝集效价，该稀释度记为一个血凝单位3.空斑形成试验空斑形成试验 plaque formation test原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使原理：将适量病毒接种单层细胞，病毒增殖使感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑感染的细胞脱落，形成肉眼可见的空斑空斑形成单位（空斑形成单位（plaque formatting unit，PFU）：由一个感染病毒增殖所致）：由一个感染病毒增殖所致测定活病毒数量测定活病毒数量三、病毒感染的诊断三、病毒感染的诊断u形态

9、学检查形态学检查u病毒成分检测病毒成分检测u血清学诊断血清学诊断（一）形态学检查（一）形态学检查u电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查u光学显微镜检查光学显微镜检查（二）病毒成分检测（二）病毒成分检测u病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 EIA、FIA、Wbu病毒核酸检测病毒核酸检测l核酸扩增技术核酸扩增技术l核酸杂交技术核酸杂交技术l基因芯片技术基因芯片技术l基因测序技术基因测序技术（三）血清学诊断（三）血清学诊断u中和试验中和试验u血凝抑制试验血凝抑制试验u补体结合试验补体结合试验u凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验u特异性特异性IgM 抗体检测抗体检测血清学诊断的用途血清学诊断的用途u分离病

10、毒为时已晚分离病毒为时已晚u无法分离或难以分离的病毒无法分离或难以分离的病毒u证实分离病毒的临床意义证实分离病毒的临床意义u血清流行病学调查血清流行病学调查原理：原理：病毒中和抗体病毒中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性1.中和试验中和试验 neutralizing testl检测血清中抗体的水平检测血清中抗体的水平l鉴定未知病毒鉴定未知病毒l对病毒进行半定量对病毒进行半定量l较少用于临床诊断，用于人群较少用于临床诊断，用于人群l免疫情况的调查免疫情况的调查原理：病毒特异性抗体鸡红细胞原理：病毒特异性抗体鸡红细胞 不凝不凝集集l带血凝素病毒感染辅助诊断带血凝素病毒感染辅助诊断l鉴定病毒型和亚

11、型鉴定病毒型和亚型2.血凝抑制试验血凝抑制试验Hemagglutination inhibition test 353.补体结合试验补体结合试验Complement fixation test原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人原理：用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体血清中相应的补体抗体特异性低，抗体出现早，消失快近期感染指特异性低，抗体出现早，消失快近期感染指标标第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防l人工主动免疫人工主动免疫l人工被动免疫人工被动免疫1.人工主动免疫人工主动免疫l灭活疫苗灭活疫苗l减毒活疫苗减毒活疫苗l亚单位疫苗亚单位疫苗l基因工程疫苗基

12、因工程疫苗l重组载体疫苗重组载体疫苗l核酸疫苗核酸疫苗2.人工被动免疫人工被动免疫l免疫球蛋白免疫球蛋白血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白l细胞免疫制剂细胞免疫制剂细胞因子细胞因子逆逆转转录录病病毒毒复复制制示示意意图图第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗l抗病毒化制剂抗病毒化制剂l干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂l中草药中草药l新抗生素类新抗生素类l治疗性疫苗治疗性疫苗l治疗性抗体治疗性抗体l基因治疗剂基因治疗剂抗病毒化学制剂抗病毒化学制剂l核苷类药物核苷类药物阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等阿昔洛韦、利巴韦林、拉米夫定等l非核苷类反转录酶抑制

13、剂非核苷类反转录酶抑制剂奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素奈韦拉平、吡啶酮、甲酸磷霉素l蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦塞科纳瓦、英迪纳瓦、瑞托纳瓦l其他抗病毒药物其他抗病毒药物金刚烷胺、甲酸磷霉素金刚烷胺、甲酸磷霉素42干扰素和干扰素诱生剂干扰素和干扰素诱生剂l干扰素干扰素l干扰素诱生剂干扰素诱生剂Poly I:C、甘草甜素、芸芝多糖、甘草甜素、芸芝多糖431.以流感病毒为例，试述病毒分离培养的一般程序。以流感病毒为例，试述病毒分离培养的一般程序。2.病毒感染血清学诊断常用的方法及原理？病毒感染血清学诊断常用的方法及原理？3.病毒感染早期的实验室快速诊断有哪些方法？病毒感染早期

14、的实验室快速诊断有哪些方法？4.病毒分离培养时对临床标本的采集和送检有哪些要病毒分离培养时对临床标本的采集和送检有哪些要求？求？5.病毒检测和细菌检测有什么区别？病毒检测和细菌检测有什么区别？复习思考题复习思考题中英文关键词中英文关键词红细胞吸附红细胞吸附 hemadsorption血清学检测血清学检测 serological diagnosis细胞病变效应细胞病变效应 cytopathic effect,CPE 血凝抑制试验血凝抑制试验 hemagglutination inhibition test50%组织细胞感染量组织细胞感染量 50%tissue culture infectious

15、 dose,TCID50 1 Neal Nathanson.Viral Pathogenesis and Immunity.(second edition)，北京：北京：科学出版社，科学出版社，2008。2 Martn-Carbonero L,Poveda E.Hepatitis B Virus and HIV Infection.Semin Liver Dis.,2012,32(2):114-9.3 LaRussa P.Pandemic novel 2009 H1N1 influenza:what have we learned?Semin Respir Crit Care Med.,2011,32(4):393-9.课外阅读资料课外阅读资料