电击杯使用注意事项.docx

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1、电击杯使用注意事项电击杯有3种不同的电极间距0.4、0.2和（HCm,针对不同的细胞类型选择最理想的场强。0.4cm间距电击杯:宽间距、低场强、应用于哺乳动物细胞和其它真核细胞。02cm间距电击杯:窄间距、高场强、应用于酵母、细菌和其它真核细胞。0.1cm间距电击杯:最窄间距、极高的场强,浅底用于小体积样品（40-80l）应用于酵母和细菌转化。电击杯重复使用,内腔体容易吸附细胞膜碎片,造成电压不稳,转化效率降低。尽量使用新的电击杯,在电击杯内腔产生污垢后及时清洗或丢弃,不可多次重复使用。每次用完电击杯清洗时,应大力冲洗。使用前,从乙醇中取出电击杯应放吸水纸去除乙醇后方可使用。电击感受态,制备时

2、所有的离心管、烧杯、量筒都要用milipor的水润洗,LB要低盐的,总之要尽量降低离子浓度。电击杯使用前要用超声波处理20min,然后浸在无水乙醇中,用镜子取出,倒置在干净的吸水纸上晾干。超声是为了打碎上次残留的dna,防止污染,乙醇是为了除去离子和水。电击杯我们也是冰上预冷的,在电击前用餐巾纸迅速（一定要迅速）地擦净杯壁上的水,特别是金属的那两面,因为冰是自来水制成的,肯定有很多离子吧。电击时出火花不一定是杯子的问题,还可能是加菌液的时候打了气泡进去电击的时候,电压数以及电击时间可以摸索一下,适当增加电压或者延长电击时间都可以。电击条件比如L5kv,放电4.85.5mso电击所有过程都要尽量在冰上进行,电击时间可以减少一点,设置为5ms左右,电击之后马上加入预冷的山梨醇溶液,转移至EP管,30度静止培养Iho