乙肝课题.ppt.ppt

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1、1山西家族性乙肝山西家族性乙肝HLA-DRB1HLA-DRB1和和HBVHBV基因型与临床关系的研究基因型与临床关系的研究2 目前，全球约有目前，全球约有4 4亿人感染乙肝病毒亿人感染乙肝病毒(HBV)(HBV)，我国占，我国占1/31/3，达，达1.21.2亿，其中亿，其中70708080以上具有家庭聚集性，包括家庭内水平传以上具有家庭聚集性，包括家庭内水平传播和垂直感染。临床观察到生活在同一家庭播和垂直感染。临床观察到生活在同一家庭中有血缘关系的家庭成员其感染中有血缘关系的家庭成员其感染HBVHBV与否以与否以及感染及感染HBVHBV后的转归也有所不同。后的转归也有所不同。第一部分第一部分

2、 研究背景和意义研究背景和意义宿主因素宿主因素4一一、宿主因素、宿主因素o 研究发现人类白细胞抗原（研究发现人类白细胞抗原（human human leukocyte antigen leukocyte antigen HLAHLA）是目前所知的最）是目前所知的最具有高度多态性的、与疾病有明确关系的遗具有高度多态性的、与疾病有明确关系的遗传系统。传系统。o HLA-HLA-、和和类基因。类基因。o 研究的报道研究的报道HLA-HLA-类基因（类基因（DRB1DRB1）与）与HBVHBV感感染感染结局有关，且不同地区、不同种族染感染结局有关，且不同地区、不同种族HLA-HLA-（DRB1DRB1

3、）基因型报道不同。）基因型报道不同。5 山西地区山西地区张德梅等报道了该区汉族张德梅等报道了该区汉族正常人正常人群群HLA-DRB1HLA-DRB1位点的等位基因多态性分布以位点的等位基因多态性分布以HLA-DRB1HLA-DRB1*1515、HLA-DRB1HLA-DRB1*0909、HLA-DRB1HLA-DRB1*1212、HLA-DRB1HLA-DRB1*0404、HLA-DRB1HLA-DRB1*0707常见，而乙肝人常见，而乙肝人群的群的HLA-HLA-DRB1DRB1基因多态性分布以及与基因多态性分布以及与HBVHBV易感易感性和抗性如何？尚无研究。性和抗性如何？尚无研究。6乙肝

4、家庭成员中正常人与乙肝家庭成员中正常人与HBVHBV感染者其感染者其HLA-HLA-DRB1DRB1基因型分布是否有差异？家族性乙基因型分布是否有差异？家族性乙肝患者其抗病毒治疗的疗效是否与肝患者其抗病毒治疗的疗效是否与HLA-HLA-DRB1DRB1基因型有关？目前尚未见有关报道。基因型有关？目前尚未见有关报道。7二、病毒因素二、病毒因素o 目前可将HBV分为AH共8个基因型。o 认为HBV基因型与临床疾病谱、疾病的进展以及抗HBV治疗反应等方面可能相关：在B、C型为主的地区，C型与严重肝病相关。o 山西省乙型肝炎的基因型以及占绝大多数乙肝比例的家族性乙肝基因型的分布及其与临床类型关系如何？

5、尚不清楚。8三、抗病毒治疗三、抗病毒治疗 抗病毒是慢乙肝治疗的关键，药物有干扰素和核苷类似物。有学者报道a干扰素治疗慢乙肝无应答与HLA-DRB1*04呈正相关，与HLA-DRB1*0301，HLA-DRB1*0505呈负相关。还有研究发现，HLA-A2，HLA-CW1，HLA-DRB14，HLA-DRB4与慢性乙型肝炎患者服用拉米呋啶疗效可能有关联，同时临床观察发现，同一家族中的不同患者使用相同的抗病毒药物后，其临床疗效也有不同，我们推测抗病毒疗效可能也受免疫因素的影响。本研究以为研究对象，首先进行临床流行病学调查，继之进行了HLA-DRB1基因多态性与山西地区家族性乙肝的预后和抗病毒疗效的

6、相关性研究，从宿主方面宿主方面阐述了HLA-DRB1基因位点分布与家族性乙肝的相关性；然后进行了HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性以及家族性乙型肝炎抗病毒近期疗效关系的研究，从病毒方面病毒方面阐述了HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性，为家族性乙型肝炎预后以及抗病毒的疗效的判断提供分子生物学水平的理论依据。10家家族族性性乙乙肝肝人人群群HLA-DRB1HLA-DRB1多态性多态性 HBVHBV基因型基因型分布情况分布情况与临床转归关系与临床转归关系与抗病毒疗效的关系与抗病毒疗效的关系临床流行病学调查临床流行病学调查第二部分第二部分 研究内容研究内容11 诊断标准诊断标准病毒性肝炎：病毒性肝炎：

7、病毒性肝炎防治方案家族性乙肝：家族性乙肝：指HBV感染者的母亲或（和）父亲HBV标志物阳性以及同胞中至少有一人为HBV标志物阳性者。排除标准：排除标准：家族性乙肝家庭中的所有成员均排除经输血或血制品途径引起的HBV感染，排除合并有其它肝炎病毒感染。12抗病毒疗效判断标准抗病毒疗效判断标准:有效无效13o HLA-DRB1基因多态性检测PCR-RFLPPCR-RFLP）14静脉抗凝血静脉抗凝血提取基因组提取基因组DNADNA PCRPCR扩增扩增 与包被有不同系列探针的磁珠杂交与包被有不同系列探针的磁珠杂交ACCUMatchACCUMatch软件分析软件分析流式仪检测流式仪检测 SAPESAPE

8、标记标记15包被探针的磁珠包被探针的磁珠每个样本每个样本DNA与磁珠上探与磁珠上探针杂交情况不同，可以有针杂交情况不同，可以有不同的荧光信号值，当磁不同的荧光信号值，当磁珠通过珠通过Luminex200流式流式仪时，磁珠表面上的荧光仪时，磁珠表面上的荧光特征被扫描、识别，测定特征被扫描、识别，测定磁珠的荧光信号，用相应磁珠的荧光信号，用相应的软件进行分析，得出的软件进行分析，得出HLA分型结果。分型结果。PCR-RFLPPCR-RFLP）第一次扩增第一次扩增第二次扩增第二次扩增HBV DNAHBV DNA提取提取HBV HBV 前前S S区区DNA PCRDNA PCR扩增扩增 酶切酶切 PC

9、RPCR扩增扩增 HBV HBV 前前S S区区DNA PCRDNA PCR扩增扩增 紫外灯下观察扩增产物电泳图紫外灯下观察扩增产物电泳图 标本血清标本血清17 筛选符合家族性乙肝的家庭77个进行流行病学，其中母亲单方HBsAg阳性的家庭55个，父亲单方HBsAg阳性的家庭22个；检测的子女数共计159人，男性106人，女性53人。年龄最小者3岁，最大者62岁，平均年龄31岁。一、山西地区家族性乙肝临床流行病学调查第三部分第三部分 研究结果研究结果18子女HBsAg检测结果父母HBsAg检测结果地域 性别父父(-)(-)母母(+)(+)父父(+)(+)母母(-)(-)农村农村 城市城市 男男女

10、女阳性9143 102 32 9242阴性1114 7 18 1411 表1 父母不同HBsAg携带情况、不同地域及不同性别的子女HBsAg检测结果临床转归父母HBsAg检测结果合计构成比（%）父(-)母(+)父(+)母(-)正常者HBV携带者慢乙肝肝硬化合 计 表2 父亲HBsAg阳性与母亲HBsAg阳性其子女不同转归的比较20二、HLA-DRB1基因多态性与家族性乙肝预后及阿德福韦酯抗乙肝病毒近期疗效相关性研究研究对象研究对象分组：健康对照（CON）组41例慢性无症状携带（ASC）组80例慢性乙型肝炎（CHB）组107例肝硬化（LC）组65例肝癌（HCC）组2例（略去）表表1 1 ASCA

11、SC、CHBCHB、LCLC和和CONCON组组HLA-DRB1HLA-DRB1基因频率比较基因频率比较HLA-DRB1CON组（组（41例）例）ASC组（组（80例）例）CHB组（组（107例）例）LC组（组（65例）例）PNAF（%）PNAF（%）PNAF（%）PNAF（%）01030407080910111213141516131341133107381601.23.715.94.91.215.93.712.28.53.79.819.50441117528613210163322.52.5 6.9 10.63.117.53.88.113.1 010 20.61.3361728123871

12、8330183131.42.8 7.9 13.15.617.83.38.415.4 0 8.414.51.454102082139162151523.83.17.7 15.4 6.216.22.36.912.31.511.5 11.51.5注：、注：、均代表其、均代表其p0.05HLA-DRB1*07等位基因频率在CHB组及LC组(13.1%,15.4%)明显高于正常对照组（4.9%），而ASC组、CHB组及LC组之间两两比较无统计学差异22表表2 ASC2 ASC、CHBCHB及及LCLC组间年龄比较组间年龄比较组别组别例数例数(n)年龄年龄F值值P值值ASCCHBLC801076531.5

13、11.2735.213.8447.49.90 33.380.01进一步进行两两比较，ASC组及CHB组与LC组间差异有统计学意义。（t值分别为-8.931和-6.208，P0.01）23HLA-DRB1ADV有效组（有效组（30）ADV无效组（无效组（26）2PORPNAF（%）PNAF（%）030407080910111213141551113626132658.318.31.75103.31021.73.3108.3228492290593.93.915.47.717.33.93.917.309.617.30.3455.6995.3590.0381.28300.7980.3350.0052

14、.0510.5570.0170.0210.8450.2571.0000.3720.5630.4980.9460.1522.2735.61210.7270.6320.5310.8622.7781.3220.0440.434表表3 HLA-DRB13 HLA-DRB1等位基因频率与阿德福韦酯等位基因频率与阿德福韦酯疗效相关性分析疗效相关性分析附：资料完整的56例患者，基因型为C,阿德福韦酯治疗半年24三、HBV基因型与家族性乙型肝炎相关性及抗病毒近期疗效研究25136136例家族性乙型肝例家族性乙型肝炎感染者进行炎感染者进行HBVHBV基基因型检测，其中因型检测，其中C C型型为为122122例，

15、例，B B型为型为1010例，例，B+CB+C混合型为混合型为2 2例例,另有另有2 2例未检测例未检测出基因型。出基因型。基因型的分布情况基因型的分布情况26 对其中对其中3636对父或母与子、女基因型进行比较，有对父或母与子、女基因型进行比较，有3434对对皆为皆为C C型，一对父为型，一对父为B+CB+C型，子为型，子为B B型，一对母为型，一对母为B B型，子为型，子为B+CB+C型。型。家族中连续二代基因型的变化家族中连续二代基因型的变化表表3 3HBVHBV基因型在基因型在ASCASC、CHBCHB、LCLC、HCCHCC中的分布中的分布 例（例（%）组别组别例数例数B B型型C

16、C型型B+CB+C未确定型未确定型无症状携带者无症状携带者（ASCASC）21212 2（9.59.5）1414（66.766.7）5 5（23.823.8）0 0（0 0）慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎（CHBCHB）98988 8（8.68.6）8282（88.288.2）*2 2（2.12.1）1 1（1.11.1）肝硬化（肝硬化（LCLC）25250 0（0 0）2424（96.096.0）0 0（0 0）1 1（4.04.0）肝癌（肝癌（HCCHCC）4 40 0（0 0）4 4（100100）0 0（0 0）0 0（0 0）注：基因型注：基因型C C中中 ASCASC分别与分别与CHBCHB、LCLC、HCCHCC比较，比较，*x x2 2=15.054=15.054；P P0.050.05，x x2 2=6.835=6.835；P P0.050.05；x x2 2=1.852=1.852，P P0.050.05；CHBCHB、LCLC、HCCHCC三组比较三组比较x x2 2=0.208=0.208，P P0.050.05。HBVHBV基因型与临床转归基因型与临床转归28将研究