[医学]第10章甾体激素类药物的分析.ppt

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1、第十章第十章 甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析第一节第一节 甾体激素药物的分类、甾体激素药物的分类、化学结构及理化性质化学结构及理化性质第二节第二节 鉴别试验与特殊杂质检查鉴别试验与特殊杂质检查第三节第三节 含量测定含量测定基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819基本骨架基本骨架分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋白雄性激素及蛋白同化激素同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素一、结构与性质一、结构与性质 1.1.肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团

2、性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 C C1717 醇酮基醇酮基还还 原原 性性OHOOHOCH2OHHHH氢化可的松氢化可的松OOHHHHOCH32.2.雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应 C17 C17 羟基羟基可成酯可成酯丙酸睾酮丙酸睾酮3.3.孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试剂反应、与羰基试剂反应C17 C17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应与亚硝基铁氰化钠反应COHHHCH3O黄体酮黄体酮4.

3、4.雌激素雌激素主要活性基团主要活性基团性性 质质A A环为环为3 3OH OH 苯环苯环UVUV、与重氮苯磺酸盐反应、与重氮苯磺酸盐反应C17 C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3AgNO3反应反应C17 C17 羟基羟基可成酯可成酯CHOHHHOHCH炔雌醇炔雌醇第二节第二节 鉴别试验及特殊杂质检查鉴别试验及特殊杂质检查1.1.呈色反应呈色反应甾体激素类药物甾体激素类药物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl一、鉴别试验一、鉴别试验（1 1）与强酸的呈色反应）与强酸的呈色反应甾酮类激素药物甾酮类激素药物呈色呈色羰基试剂羰基试剂 C C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的

4、羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼（2 2）官能团的反应官能团的反应肾上腺皮质肾上腺皮质激素药物激素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OHOH C C1717 醇酮基醇酮基 还原性还原性具有甲酮基或具有甲酮基或活泼亚甲基的活泼亚甲基的甾体激素类药甾体激素类药物物呈色呈色 亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚间二硝基酚 芳香醛芳香醛 甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色有机氟有机氟FF有机破坏有机破坏有机氯有机氯ClCl 有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸

5、亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl AgCl 呈色呈色 肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物CuCu2 2OO橙红色橙红色 碱性碱性 酒石酸铜酒石酸铜2.2.沉淀反应沉淀反应AgAg黑色黑色氨制硝酸银氨制硝酸银含炔基的甾体激素含炔基的甾体激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银RCCHAgNO3RCCAg 3.3.制备衍生物测定制备衍生物测定m.p.m.p.4.4.水解产物的反应水解产物的反应-3-3-酮酮 240nm240nm苯环苯环 280nm280nmOCCCCCCCCC5.UV5.UV法法6.IR6.IR法法7.TLC7.TLC法法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

6、8.HPLC8.HPLC法法1.1.游离磷酸盐游离磷酸盐地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查方法：方法：对照液对照液供试液供试液对对样样还原还原钼酸铵钼酸铵AAnm7407402.2.甲醇和丙酮甲醇和丙酮（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限=3.1ng=3.1ng丙酮丙酮 5.0%5.0%内标法内标法 +校正因子校正因子GC法法3.3.雌酮雌酮原理原理 Zimmermann反应反应碱性碱性KOHKOH乙醇乙醇OCCH2高纯度高纯度OHO

7、NO2NO2紫红色紫红色间二硝基苯间二硝基苯4.4.硒硒来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2)脱氢脱氢剧毒剧毒方法方法+4 4+6 6SeSe盐酸羟胺盐酸羟胺氧瓶燃烧氧瓶燃烧5.5.其他甾体其他甾体 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体其他甾体”方法方法 （具有一定分离能力）（具有一定分离能力）（1 1）TLCTLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）判定方法：判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色（2 2）HPLCHPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）判定方法

8、：判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰数目 规定杂质峰面积规定杂质峰面积 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类 C C17 17-醇酮基有强还原性醇酮基有强还原性1.1.原理原理一、四氮唑比色法一、四氮唑比色法第三节第三节 含量测定含量测定OH-还原还原 有色甲瓒有色甲瓒四氮唑盐四氮唑盐醇酮基醇酮基 a a 1717C2.2.方法方法 对照品法对照品法4045暗暗 2525氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC3.3.讨论讨论（1 1）基团对反应速度的影响）基团对反应速度的影响C C1111=O=O C C1111OHOHC C2121OHOH C C2121-酯酯C C161

9、6无论何种取代基反应速度无论何种取代基反应速度（2 2）溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%5%含水含水10%10%A10%A10%含水含水30%30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 AA 无水乙醇无水乙醇（3 3）O O2 2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O O2 2影响颜色强度影响颜色强度和稳定性和稳定性隔绝空气、隔绝空气、快速、充快速、充N N2 2（4 4）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（反应应在强碱性（pHpH13.75）条件下进行）条件下进行以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结

10、果最佳的结果最佳加入顺序：加入顺序：碱试液碱试液四氮唑盐四氮唑盐皮质激素溶液皮质激素溶液（5 5）温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解%ChP 25 4045BP 30 1hC C3 3酮基酮基 肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素同化激素、孕激素1.1.原理原理二、异烟肼比色法二、异烟肼比色法HCl（缩合）（缩合）异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基异烟肼异烟肼 3 3CCONHNOHN异烟腙（黄色异烟腙（黄色）2.2.方法方法 对照品法对照品法3 3CHCl暗暗45 5555异烟肼异烟肼挥去乙醇挥去乙醇对照液对照液供试液供试液A3.3.讨论讨论（1 1

11、）反应速度）反应速度C C3 3=O=O C C1717=O=O、C C2020=O=O C C1111=O=O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C C3 3酮基酮基（2 2）溶剂的选择）溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇（3 3）水分、）水分、O O2 2与光线的影响与光线的影响含水量含水量腙水解腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响与光线无影响（4 4）酸、异烟肼的量酸、异烟肼的量盐酸盐酸 :异烟肼异烟肼 =2:1=2:1样品样品 :异烟肼异烟肼 =1:8 =1:8 酸度酸度 异烟肼盐异烟肼盐酸度酸度 AA1.1.原理原理三、三、KoberKober反应比色法反应比色法max=465max=515桃红桃红黄色黄色雌激素雌激素H H2 2SOSO4 4-乙醇乙醇H H2 2O O四、四、UVUV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素五、五、HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC（大多内标法）（大多内标法）