非蛋白巯基测定试剂盒说明书.docx

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1、非蛋白硫基测定试剂盒说明书微法100T48S注意r正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定.刑定意义，生物体内筑基主要包括非蛋白质筑基和蛋白质筑基.蔬基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。测定原理：疏基基团与5,5，-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰.自备实嗓用品：天平、研钵、恒温水浴锅、酹标仪、96孔板、乙醇和蒸憎水.试剂组成和配制：提取液：液体IOomLXI瓶，4匕保存.试剂一：液体18ml*l瓶，4C保存.试剂二：液体ImLXl管，4X:避光保存.样品的制备；1.按照组织质量(g):提取液体积

2、(mL)为L510的比例(建议称取约0.1g组织，加入ImL提取液)进行冰浴匀浆，然后800Qg.4e离心IOmin,取上清，置冰上待测.2.血清，培养液：取0.1mL样本，加入0.4mL提取液，混匀，室温静置Iomin,然后8000g.4P离心IOmE取上清，置冰上待测。操作步Oh1、酶标仪预热30min,调节波长至412nme2、操作表在96孔板中加入如下试剂对照管测定管样品(L)4040试剂一(L)15015。试剂二(L)10乙醇(HL)10混匀，25C静置IOmn测定412nm吸光值。A=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。计算公式：非蛋白磕基标准曲线：y=L8111x-0.003

3、7,R2=I,X为标品浓度,单位mol/mL,y为吸光度AA。1.组织；(1)按样本重量计算非蛋白臻基含量(molg鲜重)=(A+0.37)+1.8111V样总W=0.552(AA+0.0037)W2)按样本蛋白浓度计算非蛋白蔬基含量(molmgprot)=(a+0.0037)1.8111V样总+Cpr=0.552(A+0.0037)Cpr2.血清、培养液:非蛋白蔬基含量molL)=(AA+0.0037)1.81115103=2761(AA+0.0037)V样总：加入提取液体积，1mL：W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL：5：血清，培养液等液体样本稀释倍数：IO3：Immol/L=103mol/L注意事项：最低检出限为10mol/Lc