精液的稀释保存.ppt

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1、第一章：精液的稀释、保存、运输主要内容1.明确优质精液2.采精前的准备3.精液的检测4.精液的稀释5.精液的分装6.精液的保存7.精液的运输什么样的精液是优质精液？最低成本生产出能配上种并产仔数高的精液称为优质精液指标指标1.每瓶精液量：80ml2.每瓶精液精子数：30亿3.精子的活力：70%4.精子畸形率：15%为什么？为什么？一、输精剂量对产仔数的影响 输精剂量在80CC，30亿。二、每瓶精液的密度对繁殖性能的影响每瓶精液的有效精子数每瓶精液的有效精子数受胎率受胎率总产仔数总产仔数活产仔数活产仔数20亿86.4%11.710.640亿86.3%11.510.4数据来源与PIC猪场，母猪为康

2、贝尔母猪，公猪为PIC402公猪，胎次选取2-5胎的猪为实验，差异不显著。每瓶精液的有效精子数每瓶精液的有效精子数受胎率受胎率活产仔数活产仔数20亿91.6%1240亿92.0%11.7数据来源丹麦国家人工授精中心三、精液活力对产仔数的影响差异不显著为什么？精液的稀释、保存与运输为什么要稀释？稀释的目的保存精子较长的活力稀释的关键因素了解精子生命特性：稀释的关键因素1.温度：精子对温度相当敏感2.时间：过快，过慢都会导致死精过度3.PH值：酸碱度4.渗透压：水中矿物质5.杂质：细菌、微生物等了解化验室操作流程处理卫生检查记录采精前准备选择采精公猪运输保存清洗仪器稀释液制备分装进入化验室安全检查

3、出生产区合格稀释不合格废弃繁殖场接收检查不合格废弃反馈至公猪站合格输精消毒与烘干备用了解采精前化验室的准备流程图选采精公猪环境温度调控稀释杯准备采精杯准备稀释液制备蒸馏水制备温度计准备密度片校正载、盖玻片升温37-38度精液瓶升温37-38度水是第一位：蒸馏水的制备 PH、渗透压和细菌 提前1天制备：蒸馏的速度比较慢，1天大约蒸馏20L 不能放置超过3天，与CO2反应生成H2CO3，PH值变 小，呈酸性，导致微生物增加。什么是三级蒸馏？水经过一次蒸馏，不挥发的组分残留在容器中被除去，挥发的组分进入蒸馏水的初始馏分中。一级蒸馏水一级水位器三级蒸馏水二级蒸馏水冷却水三级蒸馏水成品为什么水要经过蒸馏

4、？天然水，纯净水，矿泉水都不符合要求 杂 质：细菌，微生物等 矿物质：重金属 必须经过3次蒸馏，把（盐类）这些不挥发的组分出去掉。稀释液的配置 选择稀释粉 选择稀释粉：选择一种稀释粉能满足绝大部分猪的稀释粉表表1 商品稀释剂的商品稀释剂的pH值和渗透测定结果值和渗透测定结果稀释剂名称稀释剂名称规规 格格包装标识包装标识保存时间保存时间生产或生产或销售单位销售单位pH值值平均值平均值渗透压均值渗透压均值（mOsm）韩国韩国Passion50g/包3-5d青岛东晋6.64336.0韩国韩国Prime50g/包3-5d青岛东晋6.66334.7韩国韩国LT50g/包5-7d青岛东晋7.11338.0

5、韩国韩国Harmony50g/包3-5d青岛东晋6.36313.7韩国韩国NAVI100ml/包-NAVI生物科技6.67283.3比利时比利时Cxm-zhl50g/包3-5d济南洛克6.47296.3丹麦丹麦Active(洛克洛克)50g/包3-5d济南洛克6.46288.3丹麦丹麦Active(富特富特)50g/包3-5d青岛富特6.50305.0英国英国Energy50g/包3-5d青岛富特6.50278.3西班牙西班牙Diltec50g/包5-10d青岛富特7.09338.3日本力之源长效日本力之源长效50g/包7-14d青岛富特7.06337.0日本力之源中效日本力之源中效50g/包

6、3-5d青岛富特7.12317.7荷兰荷兰MS50g/包3-5d青岛瑞顺通7.07311.0德国米尼图德国米尼图(瑞顺通瑞顺通)47g/包-青岛瑞顺通7.04329.3德国米尼图长效德国米尼图长效60g/包4d佛山多乐7.26295.3德国米尼图短效德国米尼图短效50g/包3d佛山多乐7.06315.3法国卡苏法国卡苏37g/包-佛山多乐7.08322.0法国法国BTS50g/包-佛山多乐7.11357.0美国美国ESB25g/包3-5d佛山多乐7.42295.3美国多多福美国多多福46g/包短效上海多福仔6.45270.7美国金多福美国金多福50g/包长效上海多福仔7.12321.3荷兰银多

7、福荷兰银多福52g/包中效上海多福仔7.07358.0北京浩邦北京浩邦50g/包3-5d北京浩邦7.05338.7四川精宫四川精宫(猪场专用猪场专用)52g/包3-4d四川莱恩6.72302.7四川精宫四川精宫(普通型普通型)52g/包3-4d四川莱恩6.95293.3四川精宫四川精宫(Active)52g/包3-5d四川莱恩7.15319.0小结 由表1可知，测定的26种稀释剂中pH最高的为7.42，最低的为6.36，其中20种稀释剂pH值在6.507.20，占全部稀释剂74%；11种稀释剂pH值低于7.00，占全部稀释剂的41%。渗透压最高的为357.0mOsm，最低的为270.7mOsm

8、，其中23种稀释剂的渗透压值在280.0330.0mOsm，占全部稀释剂的85%。稀释剂稀释剂编号编号稀释剂名称稀释剂名称精子活力精子活力保存时间保存时间(d)生存指数生存指数保存0d保存3d1韩国Passion0.850.040.820.054.640.27Cc5.560.28Ccd2韩国Prime0.860.070.700.093.360.26Ffg3.890.31DEef3韩国Harmony0.840.060.650.024.080.26BCDEde5.180.61Cd4比利时CXM-ZHL0.850.050.820.064.350.36CDcd5.910.34BCbc5丹麦Active

9、(洛克)0.840.080.480.062.480.24Gi3.210.06Ef6丹麦Active(富特)0.840.040.630.063.110.29FGg3.660.35DEf7英国Energy0.840.050.740.033.770.28DEFef4.330.19De8日本力之源中效0.850.030.700.083.500.31EFfg3.250.27Ef9美国EBS0.860.100.810.056.020.30Bb6.430.40ABab10法国BTS0.840.070.560.052.580.26Ghi2.370.35Fg11德国米尼图短效0.850.040.720.054.

10、700.19Cc3.740.24DEf12荷兰银多福0.840.050.700.047.520.32Aa6.720.26Aa13荷兰MS0.840.040.610.044.660.34Cc4.230.43Def14四川精宫(Active)0.850.060.630.053.510.54EFfg5.430.37Ccd15四川精宫(猪场专用)0.860.040.220.071.250.39Hj1.450.43Gh表2 商品稀释剂对精子活力、精液保存时间及生存指数比较注：表中数字肩部相同字母表示差异不显著(P0.05)；不同大写字母表示差异极显著(P0.01)，不同小写字母表示差异显著(P0.05)

11、。小结 由表2可见，精液保存时间为3d时，除5号、10号和15号稀释剂保存的精液精子活力下降至0.60以下外，其余稀释剂均在0.60以上，其中1号、4号和9号稀释剂精子活力仍维持在0.80以上。15种稀释剂对精液保存时间在1.257.52d，生存指数在1.456.72。其中12号稀释剂对精液保存时间达到7.52d，生存指数也为最高的6.72，除生存指数与9号稀释剂差异不显著外(P0.05)，极显著高于其他稀释剂(P0.01)；9号稀释剂保存时间为6.02d，除低于12号稀释剂外，极显著高于其他稀释剂(P0.01)。表表3 商品稀释剂对精子畸形率与精子顶体完整率的比较商品稀释剂对精子畸形率与精子

12、顶体完整率的比较稀释剂稀释剂编号编号精子畸形率精子畸形率(%)精子顶体完整率精子顶体完整率(%)保存0d保存3d保存0d保存3d17.101.62a9.253.89a96.252.71a95.223.40a25.721.50a7.322.83a98.621.43a98.001.16a35.832.23a11.553.92a98.651.57a95.452.80a45.951.94a7.672.06a98.522.32a98.181.59a55.851.35a7.143.12a98.521.77a97.981.53a65.752.37a9.301.75a98.482.14a97.451.83a7

13、6.710.60a11.391.73b98.432.21a96.082.75a86.772.57a11.321.94a97.992.37a95.163.28a96.532.21a8.312.42a97.872.52a97.081.89a107.522.45a8.272.23a98.392.06a95.083.42a116.473.12a8.712.59a98.532.17a97.961.90a128.290.91a12.572.83b97.802.23a95.244.31a136.533.32a9.333.27a98.621.60a96.442.46a147.462.41a10.802.08a

14、95.754.23a93.455.34a159.120.96a15.292.37b95.114.37a90.372.88a小结 由表3可见，在0d和3d时，15种稀释剂保存精液的精子畸形率分别在5.72%9.12%和7.35%15.29%，精子顶体完整率分别在95.11%98.65%和90.37%98.18%；7号、12号和15号稀释剂保存精液精子畸形率均差异显著(P0.05)，其余差异均不显著(P0.05)；15种稀释剂保存精液精子精子顶体完整率差异均不显著(P0.05)。精液稀释剂的种类精液稀释剂的种类 1、稀释剂分三类：短效稀释剂：一般呈弱碱性，保存13天中效稀释剂：一般呈中性，保存35

15、天长效稀释剂：一般呈弱酸性，保存58天 2、稀释剂原理：弱酸性环境抑制精子活动，弱碱性环境促进精子活动，所以稀释液要求弱酸性才能抑制精子活动，延长精子寿命（一般稀释剂中常加有酸性物质如柠檬酸等）；3、正常精液的pH一般为6.87.8，呈中性或弱碱性。稀释粉类型 短效稀释剂一般要在3天内使用，如BTS，Kiev（MERCKIII）、修饰Kiev；中效一般可保存46天，如VSP，Modena；长效一般可保存79天，如Androhep、AndrohepPlus，X-CELl.MR-A，ACROMAX，修饰Modena，VITAL等。无论何种稀释粉配方稀释的精液，应尽快输精，除非迫不得已。不同公猪的精

16、液对稀释液有一定选择性，如果一头公猪精液用某种稀释液保存时，要考虑改变稀释液配方。当然某一固定的稀释液配方应满足多数公猪精液的保存。市场上常见的稀释剂市场上常见的稀释剂 1、法国卡苏公司（IMV）稀释剂质量最好，但溶解性很差（需磁力搅拌器搅拌或用玻璃棒人工搅拌，也可简单用手不断摇晃）,保存精液可达35天；2、丹麦授权台湾生产的稀释剂质量可以，但溶解性很好，不需搅拌即可溶解,保存精液可达13天，在生产实际操作方面，为了保证生产成绩，一般超过2天不再使用；3、其它国内外生产的稀释剂等。保存稀释剂应注意的事项保存稀释剂应注意的事项 稀释剂平时要放在低温冰箱中（5-20度）配制前提前放到室温（实验室）使其升温到室温（2025）；尤其是夏季炎热高温，一定要注意稀释剂的存放。稀释液的配置过程1.提前2小时配置，至少提前1小时配置：稳定要求PH：6.8-7.42.48小时必须用完。3.充分溶解搅拌。4.使用前30分钟放置37度的恒温水浴锅中5.按要求准确配置否则，会遭成渗透压得变化 一般情况：1包（50g）配1000毫升去皮重慢慢倒入三级蒸馏水准确称取5000g用前加安多福10ML缓慢加入5包稀释粉