肾脏病理.ppt

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1、a a1,3,5(Col-IV)1,3,5(Col-IV)免疫荧光染色及其应用免疫荧光染色及其应用IV胶原合成胶原合成或降解障碍或降解障碍 ColCol-IVIV型胶原的分子结构与分布型胶原的分子结构与分布Type IV collagen chains form 3 forms of heterotrimeric units in basement membranes:a1a1a2,a3a4a5 a1a1a2,a3a4a5 and a5a5a6 a5a5a6 Col-Col-IVIV型胶原的分子结构与分布型胶原的分子结构与分布333COL4A6COL4A1COL4A4COL4A3COL4A2C

2、OL4A5555555130 pb450 pb333Xq222q3513q34Schematic representation of the distribution of type IV collagen gene on chromosomes 13,2 and XType IV collagen family comprises six distinct chains a1a1(IV)to a6a6(IV)encoded by six genes(COL4A1COL4A6)Type IV collagen chains form 3 forms of heterotrimeric unit

3、s in basement membranes:a1a1a2,a3a4a5 a1a1a2,a3a4a5 and a5a5a6 a5a5a6 a3a4a5 a3a4a5 type IV collagen network predominates in GBM 1、2 链链 TBM、肾球囊壁、肾球囊壁BM、小球、小球MeS和和GBM 3、4、5 链链 GBM、DTBM 6 链链 肾球囊壁肾球囊壁 BM、CTBMa a1,3,5(Col-IV)1,3,5(Col-IV)在肾组织表达在肾组织表达 a a1,3,5(IV)1,3,5(IV)荧光染色方法荧光染色方法荧光素：1、异硫氢酸荧光素（黄绿色荧光）

4、fluoresceinisothiocyanate,FITC,495nm 2、罗丹明（红色荧光）Lissamine rhodamine B,RB200,3、R藻红蛋白 R-pheoerythin,R-PE直接法：直接法：1，3（）（）免疫荧光技术免疫荧光技术切片滴加一抗抗置于37恒温箱孵育1h 70%甘油（甘油：PBS=7:3）封片。间接法：间接法：5(IV)a5加修复液10mins（0.1MKCL+0.1MHCL等比例混合）滴加一抗孵育过夜，PBS洗约5mins滴加二抗置于37恒温箱孵育1h 70%甘油（甘油：PBS=7:3）封片。135 1 TBM、球囊壁、球囊壁BM、MeR、GBM；3,

5、5 链链 GBM.DTBM3 Euro-Diagnostic Co 的的 Alport S Kit的染色结果评判的染色结果评判 Normal Alport dominant Alport recessive kidney skin kidney skin kidney skin MAB1 +MAB3 +-MAB5 +-+用于遗传性肾小球基膜病的诊断用于遗传性肾小球基膜病的诊断Inherited GBM diseasesInherited podoycte diseasesHematuriaProteinuriaa3b1-integrina-actinin-4agb3-integrinuPARP

6、axilinGlepp1PodocalyxinNherf2EzrinActin cytoskeletona-actinin-4SynaptopodinVinculinTalinILKCD151ab-dystroglycanUtrophinVitronectinAgrinLamininCollagen IV(a3,a4,a5a3,a4,a5)Slit-Diaphragm complexGBM GBMGBM的主要成分是的主要成分是IVIV型胶原型胶原.层连蛋白层连蛋白.蛋白多糖和巢蛋白蛋白多糖和巢蛋白 注：正常人注：正常人:G:GI I中中 2(2(红红)；5 5（绿）（绿）Disorders d

7、ue to mutations in genes encoding GBM proteins Alport syndrome X-linked X-linked+diffuse leiomyomatosis Autosomal recessive Autosomal dominantThin basement membrane nephropathyHANAC(Hereditary angiopathy nephropathy aneurysm muscle cramps)Pierson syndromeLocusCOL4A5COL4A5+COL4A6COL4 A3 or COL4A4COL4

8、A3 or COL4A4COL4A3 or COL4A4Other unidentified lociCOL4A1LAMB2Disorders due to dysregulation of genes encoding GBM proteins Nail-patella syndromeLMX1B遗传性肾小球基膜病遗传性肾小球基膜病TYPE IV COLLAGEN TRIPLE HELIX STRUCTUREMOLECULAR DEFECTPHENOTYPEa5(IV)a3(IV)a4(IV)a3(IV)a4(IV)a5(IV)a3(IV)a4(IV)a5(IV)a4(IV)a5(IV)a3

9、(IV)a5(IV)a3(IV)a4(IV)a5(IV)a3(IV)a4(IV)a5(IV)a3(IV)a4(IV)1 COL4A5 XmY1 COL4A5 XmX2 COL4A3 2 COL4A4 1 COL4A3 1 COL4A4 NONE 1 COL4A31 COL4A4 Normal GBM X-LAS affected maleEarly onset ESRD X-LAS carrier femaleVariable outcome ARAS affectedEarly onset ESRD ADASVariable outcome Torra R et al NDT 2004TBM

10、D常染色体隐性遗传的常染色体隐性遗传的AlportAlport患者患者X-X-连锁的连锁的 Alport Alport患者患者X-X-连锁的连锁的Alport Alport 女性携带者女性携带者常染色体隐性遗传常染色体隐性遗传 AlportAlport S SX-X-染色体连锁染色体连锁-Alport S-Alport S 女性携带者女性携带者X-X-染染色体连锁的色体连锁的Alport S Alport S 一组以一组以GBM病变为病理特征病变为病理特征,临床表现间歇性血尿，进行临床表现间歇性血尿，进行性肾功能减退的遗传性疾病性肾功能减退的遗传性疾病 遗传方式：遗传方式：XLAS ARAS

11、ADAS a发病年龄发病年龄 约约 5岁起病，偶在婴儿期岁起病，偶在婴儿期 b症状症状 间歇性血尿，（镜下为主）间歇性血尿，（镜下为主）时有发作性肉眼血尿时有发作性肉眼血尿 时有脓尿时有脓尿 少有少有 NS 晚期肾功能降低晚期肾功能降低 c伴随症状伴随症状：神经性耳聋多见（神经性耳聋多见（50%）病病 例例 示示 范范 病例病例1.K 13-105(E-1047)袭俊杰袭俊杰,男男,8y,病史病史:反复肉眼血尿反复肉眼血尿5y余余,拟诊拟诊“MsPGN”;荧光荧光：各指标均：各指标均(-);ColIV1(+)，ColIV3(-)，ColIV5(-).诊断诊断：局灶节段硬化性肾炎，结合临床，：局

12、灶节段硬化性肾炎，结合临床，考虑考虑Alport S.135PASEM:EM:GBMGBM厚薄不均、致密层呈分裂状厚薄不均、致密层呈分裂状EM:EM:GBM GBM 增厚、致密层呈稀疏空泡状增厚、致密层呈稀疏空泡状 EM:EM:GBM GBM 内有少量致蜜物（内有少量致蜜物（D D）沉积）沉积D D最后诊断最后诊断:符合符合 Alport S Alport S 病例病例2.K15-15(E0068).张宗能张宗能,男男,3岁岁,病史病史:尿色异常尿色异常2w,尿检异常近尿检异常近1w,有有血尿血尿 家族史家族史;荧光荧光:Fb(),余余(-）;ColIV1(+)，ColIV3(-)，ColIV

13、5(-)诊断诊断:考虑考虑Alport 综合征综合征135EM:EM:GBM GBM 厚薄不均厚薄不均,部分甚薄，伴足突消失部分甚薄，伴足突消失EM:EM:GBM GBM 局部增厚局部增厚,致密层结构紊乱、略呈空泡状致密层结构紊乱、略呈空泡状 EM:EM:GBM GBM 厚薄不均、致密层结构疏松、多层状厚薄不均、致密层结构疏松、多层状最后诊断最后诊断:Alport S 又名又名:薄基膜综合征（薄基膜综合征（thin basement membrane syndrome）良性家族性血尿（良性家族性血尿（benign familial hematuria）(1966年报道年报道)病因和发病机制病因

14、和发病机制 原发性者病因不明原发性者病因不明，多数为父子间传递的常染色体显性遗传多数为父子间传递的常染色体显性遗传;少数为常染色体隐性遗传（少数为常染色体隐性遗传（Col4A4 基因突变）基因突变）Alport 病病 的杂合子的杂合子;也可能是不伴耳聋的遗传性肾炎或经典的也可能是不伴耳聋的遗传性肾炎或经典的Alport 综合征综合征;部分儿童或女性散发性血尿者部分儿童或女性散发性血尿者,可能是可能是 Alport 综合征的综合征的早早 期表现。期表现。临床特征临床特征持续性无症状血尿，镜下型多见持续性无症状血尿，镜下型多见可伴轻度蛋白尿可伴轻度蛋白尿病病 例例 示示 范范病例病例3.K 13-

15、75(E-0844)韩天韩天,男男,8y，病史病史：镜下血尿：镜下血尿11d.荧光荧光：各指标均：各指标均(-);诊断诊断：肾小球：肾小球ML，待电镜证实是否为，待电镜证实是否为 TBMD。PASTBMD(x3000)MCD(x2000)最后诊断最后诊断:TBMDTBMD 病例病例4.K14-82,钱奕晗钱奕晗,男男,8y,病史病史：血尿待查：血尿待查 ,Alport S？荧光荧光:各指标均各指标均(-);ColIV1(+)，ColIV3(+)，ColIV5(+)诊断诊断:肾小球肾小球轻微病变，待电镜证实轻微病变，待电镜证实是否是否 为为TBMD.135PASEM:EM:GBM GBM 弥漫性

16、变薄弥漫性变薄(2(2m)m)，足突未见消失足突未见消失 EM:EM:GBM GBM 弥漫性变薄弥漫性变薄(2(2m)m)，足突少量消失、假足突少量消失、假 绒毛形成绒毛形成 最后诊断最后诊断:TBMDTBMD病例病例5。K14-105(0814)郑嘉睿郑嘉睿,女女,7岁岁,无锡市儿童医院无锡市儿童医院 病史病史：拟诊：拟诊“血尿血尿”待查待查;荧光荧光:各指标均各指标均(-);ColIV1(+)，ColIV3(+)，ColIV5(+)诊断诊断:肾小球轻微病变，待电镜证实是否肾小球轻微病变，待电镜证实是否为为 TBMD135MassonEM:EM:GBM GBM 变薄，足突结构细长，未见消变薄，足突结构细长，未见消失失 最后诊断最后诊断:TBMDTBMDa a(Col-IV)有着不同的遗传方式和性别特征性分布规律有着不同的遗传方式和性别特征性分布规律a 1a 1,3,a a 5(IV)荧光免疫检查是诊断荧光免疫检查是诊断AS的重要指标的重要指标a 1a 1,3,a a 5(IV)荧光免疫检查可以协助判断荧光免疫检查可以协助判断AS的遗传方式的遗传方式皮肤皮肤a5a5(IV)免疫荧光检查