自身抗体的应用及研究进展.ppt

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1、自身抗体的应用及研究进展自身抗体的应用及研究进展 2酶联免疫吸附法（ELISA）1间接免疫荧光法（IFA Indirect Fluorescent Assay）3免疫印迹法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自动自身抗体分析仪全自动自身抗体分析仪u自动化检测自动化检测u检测定量化检测定量化u单个项目随时检测单个项目随时检测u多个项目同时检测多个项目同时检测u45-90分钟报告结果分钟报告结果u原厂质控和校正血清原厂质控和校正血清u精确温度调控系统精确温度调控系统u五点定标、三重检测五点定标、三重检测25wash 2wash 3read 3wash 1read 1rea

2、d 2disp15101520风湿病的实验室诊断u血清学检查血清学检查 自身抗体自身抗体特异性特异性 非特异的免疫相关指标非特异的免疫相关指标u滑液分析滑液分析u一般的实验室检查项目一般的实验室检查项目项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光

3、抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧

4、光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法抗Ku抗体（Ku)抗Mi抗体（Mi-2）抗PM-Scl抗体抗JO-1抗体（JO-1）多发性肌炎、皮肌炎抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）原发性胆汁性肝硬化抗nRNP抗体（U1-snRNP）混合性结缔组织病（MCTD）抗Scl-70抗体（Scl-70）抗着丝点B抗体（CENP-B）系统性硬化抗SSB/La抗体抗SSA/R052抗

5、体抗SS-A/R060抗体干燥综合征/系统性红斑狼疮抗核糖体P蛋白（PO）抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA)抗Sm抗体抗组蛋白抗体抗核小体抗体抗双链DNA抗体IgG抗体系统性红斑狼疮项项 目目 名名 称称 疾疾 病病ANA谱谱17项（免疫印迹法）项（免疫印迹法）(3)常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(一一)类风湿关节炎（类风湿关节炎（RARA）u类风湿因子（RF）u早期诊断的系列指标抗RA33/36抗体抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）抗角蛋白抗体（抗角蛋白抗体（AKA）抗角蛋白抗体(AKA)，1979年Young等发现类风湿性关节

6、炎(RA)血清中有一种能与鼠食管角质层角质层反应的抗体，并对类风湿性关节炎(RA)具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角抗角质层抗体质层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。AKA检测方法：取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原，做冰冻切片，厚4 m5 m-70 保存备用。加1 20稀释血清，湿盒内37孵育30分钟，PBS漂洗，吹干，加1 20稀释的荧光素标记羊抗人IgG，37孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。判定标准：以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光角质层出现典型的规则的线状或板

7、层状荧光为阳性。gene Filaggrin类风湿因子（类风湿因子（RFRF）u抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型uRF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一uRF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。类风湿因子（RF）uRF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性 SLE 30%SS 70%90%SSc 20%30%MCTD 50%60%非风湿性疾病 5%以下的正常人uRF阳性不等于一定就是RAuRF阴性也不等于一定就不是RARF常用检

8、测方法uRF 1：40阳性 乳胶凝集法（测IgM-RF）uRF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）uRF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法-IgM 200IU/mlRARA早期诊断的系列指标早期诊断的系列指标 敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8%99.6%APF 40%-80%70%-90%AKA 40%-55%85%-95%抗Sa抗体 40%-60%98.6%抗CCP 46%-70%96%抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）u瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇u对RA诊断具有高度特异性（98%）u可在RA早期出现u预

9、测早期关节炎发展为RAuRA关节侵蚀破坏的早期识别及预测(二)系统性红斑狼疮（SLE）u是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体u自身抗体（1）抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体抗RBC抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体（4）其它RF、p-ANCA抗核抗体（抗核抗体（ANA）u定义以细胞核内物质为抗原的抗体u临床意义SLE的筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异:风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染

10、、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用某些药物（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）u方法间接免疫荧光法u结果判断:滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同 核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关，多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者 均质型均质型与与AHAAHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNADNA有关，有关，引起引起LELE形成主要见于形成主要见于SLESLE、药物性狼疮、药物性狼疮 斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体有关，应进一步查特异性抗体核仁型核仁型多见于硬皮病多见于硬皮病 着丝点型着

11、丝点型多见于多见于CREST综合征综合征ANA常见五种核型及临床意义u核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者u均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮u斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体u核仁型多见于硬皮病u着丝点型多见于CREST综合征ANA检测方法u间接免疫荧光法u印迹法uELISA法 抗核抗体谱（ANAs）定义：以细胞核内物质为抗原的抗体定义：以细胞核内物质为抗原的抗体u 抗抗DNADNA抗体抗体抗抗ss-DNAss-DNA 抗抗ds-DNAds-DNAu 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体HH1 1，HH2A2A，HH2B2B，H H3 3

12、，H H4 4u 抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体抗抗ENAENA抗体抗体 抗着丝点抗体抗着丝点抗体u 抗核仁抗体抗核仁抗体 u 其它其它线粒体、溶酶体、高尔基体等线粒体、溶酶体、高尔基体等 抗抗ds-DNA抗体抗体u临床意义临床意义 对对SLESLE的诊断有较高特异性的诊断有较高特异性 滴度与滴度与SLESLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与与SLESLE肾损害有关肾损害有关u检测方法检测方法 放免法（放免法（Farr)Farr)敏感，有利于早期预测敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗检测高亲合力的抗ds-DNAds-DNA 间接免疫荧光法间接免

13、疫荧光法(IF)(IF)特异特异 ELISAELISA可检测低亲合力的抗可检测低亲合力的抗ds-DNAds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法金标免疫斑点法抗抗ENAENA抗体抗体u 抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？u 抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在u 抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴

14、儿心脏传导阻滞u 抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS抗抗ENAENA抗体抗体u抗Scl-70 硬皮病标记性抗体u抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体u抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴抗核小体抗体（AnuA）u核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用u对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50

15、%90%特异性98%(三)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）u免疫学检查免疫学检查 ANA ENA抗抗Jo-1阳性阳性u其它检查其它检查肌酶谱肌酶谱 肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌心肌和骨骼肌 MB-心肌心肌 BB-平滑肌和脑内平滑肌和脑内 乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH）谷草转氨酶（谷草转氨酶（AST）谷丙转氨酶（谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALP）(四)干燥综合征（SS）uANA阳性率40%70%uENA抗SSA抗体阳性率70%96%抗SSB抗体阳性率50%87%u抗-Fordrin对于对于pSS或或sSS的诊断有一的诊断有一 定意义，但特异性和敏感

16、性并不理想。定意义，但特异性和敏感性并不理想。uRF阳性率75%100%u高球蛋白血症uWBC下降(五)系统性硬化病（pSS）uANA阳性率阳性率50%55%uENA抗抗Scl-70阳性率阳性率15%40%u抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)阳性阳性(六)混合性结缔组织病（MCTD）uANA阳性uENA抗RNP高滴度阳性（七）血管炎（七）血管炎 抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）荧光图谱分型荧光图谱分型主要抗原成分主要抗原成分胞浆型胞浆型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）非典型型（非典型型（cANCA）不清不清ANCA的临床意义uc-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标up-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关（八）抗磷脂抗体综合征（APS）u是一种非炎症性自身免疫病，临床上