PCR实验室院感防控管理制度.docx

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1、PCR实验室院感防控管理制度一、定义PCR试验，即临床基因扩增试验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。二、建设及人员要求2.1 建设要求PCR实验室的建设需要设置标准的四区：试剂准备区、标本制备区、PCR扩增检测区和扩增产物检测区。每个独立实验区设置有缓冲区，各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染，并降低扩增产物对人员和环境的污染。2.2 人员要求进入PCR实验室，需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训，并

2、获取PCR上岗证。三、污染来源收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。2.3 实验试剂污染主要是在PCR组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中，因为PCR试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0,但这个过程也充满污染风险。2.4 扩增产物污染大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是PCR反应中最主要、最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，

3、远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。2.5 克隆质粒污染作为阳性质控品的克隆质粒外溢。四、防控措施从事新型冠状病毒检测标本采集的技术人员及实验室工作人员应采用生物安全三级实验室级别的个人防护。严格岗前培训，人人熟练掌握穿脱防护用品流程。4.2 标本管理4.2.1 接收实验室接收人员用1000mgL含氯消毒液对转运箱消毒后方可打开，再用1000mgL含氯消毒液对自封袋进行消毒，自封袋在生物安全柜内打开，取出标本，详细核对标本信息，做好交接登记。4.2.2 检测1）标本的离心需在通风橱内进行，离心后静置15min方可打开离心机盖。注意：离心机要用具有密封盖

4、的钻头，严防离心管意外破碎形成气溶胶。2）标本的开盖要在生物安全柜内操作。注意：生物安全柜需要有CMA资质的第三方检测机构出具的检测合格证明，每次开机要用烟雾法或丝线检测操作口的气流方向；试验前用75%酒精对生物安全柜进行擦拭消毒（禁止喷洒），作用30min后，紫外线消毒3060min,生物安全柜风机运行至少5min后方可开始操作；操作结束后风机运行5min,用75%酒精对生物安全柜进行擦拭消毒（禁止喷洒），作用30min后,紫外线消毒30-60min,方可关机。3）专机专用检测，在上机操作时应避免溢洒，检测结束后及时加盖封闭。4.3 环境物表消毒4.3.1 空气消毒D临床基因扩增检验实验室的

5、空气流向应按：试剂准备区一标本制备区一扩增区-产物检测区，应时刻防止扩增产物顺空气气流进入扩增前区域。可按照上述顺序区域空气压力递减的方式进行，也可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行方式实现。2）PCR室内的消毒应防止扬尘（减少人员走动）、杀灭DNA或RNA的基因片段。实验室应配备充足的空气消毒机或紫外线灯，每天试验前后常规消毒（空气消毒机Ih/次，紫外线灯60min次）。3）当出现实验室污染时，应按要求立即撤出相关人员，在无人情况下可使用化学消毒剂进行终末消毒，如熏蒸法：过氧乙酸lgm3加热熏蒸（湿度70-90%）,密闭24小时;气溶胶喷雾：3%过氧化氢：20mlm3气溶胶喷雾；5%过氧

6、乙酸2.5mlm3气溶胶喷雾（湿度20-40%）。4.3.2物表消毒D基本原则：由清洁区向污染区进行，洁具不可交叉。2）清洁消毒方向：准备区一标本制备区一扩增区一产物检测区3）每天试验前后使用100Omg/L有效氯的消毒液进行桌面、台面及地面消毒。4）所用门把手、电话等公共设施每天使用100Omg/L有效氯的消毒液消毒3次（有个案报道，门把手2019-nCoV核酸检测呈阳性）。5）每天用1000mgL的含氯消毒液对医疗废物暂存间地面进行消毒2次。6）核酸提取仪去污染：每天多批次检测时，在每一批次检测完以后必须用75%的乙醇和核酸去除剂对仪器进行去污染。7）生物安全柜的消毒： 每天试验前后用75

7、%酒精对生物安全柜进行擦拭消毒，禁止喷洒。 工作结束：柜内物品全部消毒后移出。消毒剂擦拭台面四周、以及玻璃内侧等部位。 消毒剂应选择能够杀死生物安全柜里可能发生的任何微生物（75%乙醇、含氯消毒剂）。在使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还应用无菌水再次进行擦拭。 停用生物安全柜前，运行5min以净化内部空气。8 ）PCR扩增区去污染：PCR反应管必须盖紧，避免扩增后的核酸对环境的污染。9 ）医疗废物运送结束后，用1000mgL的含氯消毒液对运送工具进行清洁和消毒。10 ）转运及存放标本的容器使用前后用1000mgL的含氯消毒液进行擦拭消毒。11）防护用品消毒 防护用品均为一次性使用，使用后需经压力蒸

8、汽灭菌处理后方可按照感染性医疗废物处理。 清洁消毒工具（抹布、拖布、消毒湿巾等）按照颜色分区配备，使用过程中禁止跨区域使用，防止交叉污染。4.4 手卫生严格落实手卫生，配备完善的手卫生设施。正确佩戴手套：手套未紧密贴合拇指、食指和中指，在进行开盖操作时容易发生交叉污染。摘脱手套前后应进行手卫生。医疗废物处置4.5 废弃物处置4.5.1 废弃物处置医疗废物专用包装袋、利器盒的外表面应当有警示标识，在盛装医疗废物前，应当进行认真检查，确保其无破损、无渗漏。医疗废物收集桶应为带盖脚踏式。每个包装袋、利器盒应当系有或粘贴中文标签，标签内容包括：医疗废物产生单位、产生部门、产生日期、类别，并在特别说明中

9、标注新型冠状病毒感染的肺炎。医疗废物分类收集。咽拭子等呼吸道标本检测后置于含有2000mgL含氯消毒液的容器中，其他感染性废物弃置于带有双层黄色医疗垃圾袋的专用医疗垃圾桶，3/4满时双层黄色医疗垃圾袋鹅颈包扎后，用1000mgL含氯消毒液喷洒医疗垃圾袋表面，实验过程中如使用锐器（包括针头、小刀、金属和玻片等）直接弃置于锐器盒内，以上所有医疗废物经压力蒸汽灭菌处理后方可离开实验室。压力蒸汽灭菌效果需监测并记录。严格对压力蒸汽灭菌处理后的医疗废物进行登记。登记内容包括医疗废物的来源、种类、重量或者数量、交接时间，最终去向以及经办人签名，特别注明新型冠状病毒感染的肺炎或新冠，登记资料保存3年。应当由

10、经过适当培训的人员使用适当的个人防护装备和设备处理危险废弃物。4.5.2 废液处理标本检测后产生的废液用含2000mgL的有效氯消毒液彻底灭活后，应经过污水处理系统处理后倒入医院污水处理通道。新型冠状病毒毒株或其它潜在感染性材料污染生物安全柜的操作台造成局限感染：使用5000mgL的有效氯消毒液，消毒液需要现用现配，24小时内使用。含病毒培养皿碎裂或倾覆造成实验室污染：保持实验室空间密闭，避免污染物扩散，使用5000mgL的有效氯消毒液的毛巾覆盖污染区。必要时（大量溢洒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为2gm3,熏蒸过夜或20gL过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾用量8mlm3,作用l2h;或用高镒酸钾-甲醛熏蒸：高镒酸钾8gm3,放入耐热耐腐蚀容器（陶罐或玻璃容器），然后加入甲醛（40%）10mlm3,熏蒸4h以上。熏蒸时室内湿度60%80%.