第3章消毒与灭菌.ppt

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1、1 1灭菌：应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病灭菌：应用物理或化学方法杀灭物体中所有的病原微生物、非病原微生物以及芽胞和霉菌孢子的方原微生物、非病原微生物以及芽胞和霉菌孢子的方法。法。2 2消毒：应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微消毒：应用物理或化学方法杀灭物体中的病原微生物，而对非病原微生物及芽胞，孢子不要求全部生物，而对非病原微生物及芽胞，孢子不要求全部杀死。杀死。3 3防腐：应用物理或化学方法阻止和抑制微生物的防腐：应用物理或化学方法阻止和抑制微生物的生长繁殖的方法。生长繁殖的方法。4 4无菌操作法：防止或杜绝一切细菌进入动物体或无菌操作法：防止或杜绝一切细菌进入动物体或其他物体的方

2、法。其他物体的方法。5 5滤过除菌：液体或气体通过滤过作用除去其中所滤过除菌：液体或气体通过滤过作用除去其中所存在的细菌。一般用存在的细菌。一般用0.220.22微米滤膜，但不能除去病微米滤膜，但不能除去病毒，霉形体及毒，霉形体及L L型细菌。型细菌。a a比干热更易使菌体蛋白凝固。比干热更易使菌体蛋白凝固。b b湿热穿透力强；湿热穿透力强；c c湿热可以释放大量潜热。湿热可以释放大量潜热。紫外线紫外线：杀菌机理：波长200300m的紫外线具有杀菌作用干扰DNA的复制与转录紫外线穿透力较弱不耐热物品的表面消毒应用范围：特点：杀菌机理：应用范围：电离辐射电离辐射：包括高速电子、x射线和 射线。产

3、生游离基,破坏DNA。一次性医用塑料制品的消毒，食品的消毒不破坏其营养成分。滤菌器消毒剂类别消毒剂类别名称名称浓度浓度(%)用途用途重金属盐重金属盐红汞红汞2皮肤、粘膜、小创面消毒皮肤、粘膜、小创面消毒硫柳汞硫柳汞0.01生物制品防腐生物制品防腐氧化剂氧化剂高锰酸钾高锰酸钾0.1皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒过氧化氢过氧化氢3皮肤、粘膜、创伤消毒皮肤、粘膜、创伤消毒过氧乙酸过氧乙酸0.20.5塑料、玻璃、人造纤维消毒塑料、玻璃、人造纤维消毒卤素类卤素类碘液碘液2.5皮肤消毒皮肤消毒醇类醇类乙醇乙醇7075皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消毒酚类酚类石炭酸石炭酸35地面、器皿表

4、面和排泄物消毒地面、器皿表面和排泄物消毒来苏尔来苏尔35同上、也常用于手及皮肤消毒同上、也常用于手及皮肤消毒表面活性剂表面活性剂新洁尔灭新洁尔灭0.1手术器械消毒手术器械消毒酸碱类酸碱类生石灰生石灰1020排泄物、地面消毒排泄物、地面消毒染料染料龙胆紫龙胆紫24表浅创伤消毒表浅创伤消毒1928年A.Fleming发现青霉素澳大利亚病理学家霍华德.弗罗里与弗莱明1940提纯出青霉素。共同获得1945年诺贝尔生理学和医学奖.三、三、噬菌体噬菌体病毒种类很多，根据病毒寄生的对象来分，有植病毒种类很多，根据病毒寄生的对象来分，有植物病毒、动物病毒和微生物病毒。物病毒、动物病毒和微生物病毒。噬菌体：噬菌

5、体：是病毒中的一种，一般把侵染细菌、放是病毒中的一种，一般把侵染细菌、放线菌的病毒叫噬菌体。（把侵染真菌的病毒叫噬线菌的病毒叫噬菌体。（把侵染真菌的病毒叫噬真菌体）真菌体）噬菌体在自然界广泛存在，在噬菌体在自然界广泛存在，在19951995年发表的年发表的ICTVICTV的病毒分类与命名第六次报告中共报道了的病毒分类与命名第六次报告中共报道了40004000余种，分别划归为余种，分别划归为4949个病毒科个病毒科.据据Bradley(1967)Bradley(1967)归纳，噬菌体共有六类形态。归纳，噬菌体共有六类形态。1 1、组成：、组成：主要由蛋白质和核酸组成。主要由蛋白质和核酸组成。2

6、2、基本形态：、基本形态：蝌蚪形、微球形和纤丝形。蝌蚪形、微球形和纤丝形。（一）噬菌体的形态结构与组成（一）噬菌体的形态结构与组成以以大肠杆菌大肠杆菌T4T4噬菌体噬菌体为例为例头部：头部：廿面体对称结构，由蛋白廿面体对称结构，由蛋白质衣壳构成，内含一条质衣壳构成，内含一条DNADNA。颈部：颈部：薄盘状，附颈须。薄盘状，附颈须。尾鞘：尾鞘：长长95nm,95nm,衣壳粒螺旋对称；衣壳粒螺旋对称；可伸缩。可伸缩。尾髓尾髓:中空，中空，DNADNA可由此进入细胞。可由此进入细胞。基板基板:六角形盘状物，其上有刺六角形盘状物，其上有刺突、尾丝。突、尾丝。刺突刺突:有吸附功能。有吸附功能。尾丝尾丝:

7、有识别吸附功能。有识别吸附功能。大肠杆菌大肠杆菌T4T4噬菌体构造噬菌体构造3 3、蝌蚪形噬菌体的构造、蝌蚪形噬菌体的构造（二）、噬菌体（二）、噬菌体(phage)(phage)的繁殖的繁殖噬菌体并没有个体的生长过程，而只有其基本成噬菌体并没有个体的生长过程，而只有其基本成分的合成和装配，即首先将各个部件合成出来，分的合成和装配，即首先将各个部件合成出来，然后装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。然后装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。根据噬菌体与宿主的关系：根据噬菌体与宿主的关系：烈性噬菌体：烈性噬菌体：指感染宿主细胞后，能够使宿主细指感染宿主细胞后，能够使宿主细胞裂解的噬菌体胞裂解的噬菌

8、体.温和噬菌体（或溶源性噬菌体）：温和噬菌体（或溶源性噬菌体）：噬菌体感染细噬菌体感染细胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核DNADNA上，上，并且可以随宿主并且可以随宿主DNADNA的复制而进行同步复制，在的复制而进行同步复制，在一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段：烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段：即即吸附、侵入、复制、装配和释放吸附、侵入、复制、装配和释放。1 1、烈性噬菌体的繁殖、烈性噬菌体的繁殖吸附：吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异噬菌体和宿主细胞上的特异性吸附部位进

9、行特异性结合，噬菌体性吸附部位进行特异性结合，噬菌体以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突“钉钉”在细胞表面上。在细胞表面上。侵入：侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外壳留在细胞外。质外壳留在细胞外。复制复制 ：包括核酸的复制和蛋白质包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以会控制宿

10、主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质。的核酸和蛋白质。装配：装配：主要步骤有：主要步骤有：DNADNA分子的缩合分子的缩合通过衣壳包裹通过衣壳包裹DNADNA而形成头部而形成头部尾丝及尾部的其它部件独立装配完成尾丝及尾部的其它部件独立装配完成头部与尾部头部与尾部相结合相结合最后装上尾丝，至此，一个个成熟的形状、最后装上尾丝，至此，一个个成熟的形状、大小相同的噬菌体装配完成。大小相同的噬菌体装配完成。释放：释放：方式：方式：裂解：多以裂解细胞的裂解：多以裂解细胞的方式释放。方式释放。分泌：噬菌体穿出细胞，分泌：噬菌体穿出细胞，细胞

11、并不裂解。细胞并不裂解。通常情况下，一个噬菌通常情况下，一个噬菌体通过上述五个过程能体通过上述五个过程能合成合成100100300300个噬菌个噬菌体。烈性噬菌体的这种体。烈性噬菌体的这种生长繁殖方式也称为一生长繁殖方式也称为一步生长，步生长，一步生长曲线1.1.实验设计依据：实验设计依据：1 1个菌体被个菌体被1 1个噬菌体感染个噬菌体感染,避免二避免二次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。2.2.实验过程实验过程:敏感菌10ml Phage 1ml 混匀，5min,使之吸附 离心或用抗phage血清处理,去除过量phage 高倍稀释,吸附phage的菌悬液(避

12、免多次吸附)37培养,定时取样 取样人为裂解处理（每5min）样品中加入氯仿裂解细胞 24-48h 裂解液加入敏感菌液中 适当稀释混合液 涂布于琼脂培养基上 计数噬菌斑噬菌斑噬菌斑:概念：概念：将少量噬菌体与大量敏将少量噬菌体与大量敏感菌混合培养在营养琼脂中，感菌混合培养在营养琼脂中，在平板表面布满宿主细胞的在平板表面布满宿主细胞的菌苔上菌苔上,可以用肉眼看到一可以用肉眼看到一个个透明的不长菌的小圆斑，个个透明的不长菌的小圆斑，称为噬菌斑。称为噬菌斑。(每个噬菌斑每个噬菌斑一般是由一个噬菌体粒子形一般是由一个噬菌体粒子形成的。成的。)应用应用:噬菌斑可用于检出、噬菌斑可用于检出、分离、纯化噬菌

13、体和进行噬分离、纯化噬菌体和进行噬菌体的计数。菌体的计数。噬菌斑噬菌斑以培养时间为横坐标以培养时间为横坐标,以以噬菌斑数为纵坐标噬菌斑数为纵坐标,绘绘制成的曲线为一步生制成的曲线为一步生长曲线。长曲线。可分以下阶段：可分以下阶段：潜伏期潜伏期裂解期裂解期稳定期稳定期 一步生长曲线潜伏期：潜伏期：从噬菌体吸附细菌到细菌细胞释放从噬菌体吸附细菌到细菌细胞释放 新的噬菌体之前的这段时期新的噬菌体之前的这段时期.曲线平行于曲线平行于横轴，噬菌体数无变化横轴，噬菌体数无变化.样品中无游离的样品中无游离的噬菌体。噬菌体。(潜伏期前的噬菌斑数是噬菌体潜伏期前的噬菌斑数是噬菌体数数,也就是感染噬菌体的细菌数也

14、就是感染噬菌体的细菌数).).裂解期：裂解期：曲线直线上升曲线直线上升,子代噬菌体不断释放子代噬菌体不断释放到培养基中到培养基中,直到达到一个极限直到达到一个极限.稳定期稳定期:感染细胞后复制的子代噬菌体全部释感染细胞后复制的子代噬菌体全部释放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。放，噬菌斑数稳定，一次感染结束。裂解量裂解量:每一受感染细胞所释放的新的噬菌体的每一受感染细胞所释放的新的噬菌体的 平均数。平均数。稳定期噬菌斑数稳定期噬菌斑数 裂解量裂解量 =潜伏期噬菌斑数潜伏期噬菌斑数不同的噬菌体或同不同的噬菌体或同种噬菌体感染敏感菌后所释种噬菌体感染敏感菌后所释放的噬菌体数不同放的噬菌体数不同,与噬菌

15、体种类、宿主细胞与噬菌体种类、宿主细胞菌龄以及环境因数有关。菌龄以及环境因数有关。2 2、温和噬菌体与溶源性细菌、温和噬菌体与溶源性细菌温和噬菌体：温和噬菌体：噬菌体感染细胞后，将其核噬菌体感染细胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核酸整合（附着）到宿主的核DNADNA上，并且可上，并且可以随宿主以随宿主DNADNA的复制而进行同步复制，在一的复制而进行同步复制，在一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。原噬菌体（或前噬菌体）：原噬菌体（或前噬菌体）：即整合在宿主即整合在宿主核核DNADNA上的噬菌体的核酸。上的噬菌体的核酸。溶原性细菌：溶原性细菌：指在核染

16、色体上整合有原噬指在核染色体上整合有原噬菌体的细菌。可进行正常生长繁殖菌体的细菌。可进行正常生长繁殖,而不被而不被裂解。裂解。溶原性细菌的特点：溶原性细菌的特点：可稳定遗传：可稳定遗传：子代细菌都含有子代细菌都含有原噬菌体，均具有溶原性。原噬菌体，均具有溶原性。可自发裂解：可自发裂解：温和噬菌体的核酸也可从宿主温和噬菌体的核酸也可从宿主DNADNA上脱落下来，上脱落下来，恢复原来的状态，进行大量的复制，变成烈性噬菌体，自发恢复原来的状态，进行大量的复制，变成烈性噬菌体，自发裂解几率裂解几率1010-2-21010-5-5。可诱导裂解：可诱导裂解：用化学、物理方法诱导用化学、物理方法诱导具有具有“免疫性免疫性”：溶原菌对其本身产生的噬菌体或外来的同溶原菌对其本身产生的噬菌体或外来的同源的噬菌体不敏感，对同源噬菌体具免疫性，对非同源噬菌源的噬菌体不敏感，对同源噬菌体具免疫性，对非同源噬菌体没有免疫性。体没有免疫性。可复愈：可复愈：自然遗失前噬菌体，但不发生自发裂解和诱导裂解自然遗失前噬菌体，但不发生自发裂解和诱导裂解 溶源转变：溶源转变：由于溶原菌整合了温和噬菌体的核酸而使自己由于溶原菌整