防龋DNA疫苗pVAX1-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究.docx

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1、I防弱DNA疫苗pVAXl-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究I邹潇龙I王月月2,吴砧冰3,犹然淞4,周民希陈彬(1.遵义医科大学口腔疾病研究特色重点实般室,贵州遵义5630062.遵义医科大学附属口腔医院,贵州遵义5630)I摘要I目的:本研究在SD大鼠不同生理阶段以及免疫条件下分析乳腺FCRn基因mRNA表达量的变化,探索防隔DNA疫苗 PVAXlSG对大鼠乳腺FCRn表达的影响,方法:将40只雌性受孕SD大鼠随机分成四蛆(防般DNAI5苗组,空戟质粒蛆,生理 盐水组,空白对照组),在其分娩后第I天及第1周分别用对应试剂进行注射,第2周处死SD大鼠并取乳腺迸行mRNA检测.结 果:经防踽

2、DNA疫苗pVAXlSG免疫后的大鼠乳腺FCRn基因表达量较正常组大鼠乳腺FCRn基因表达量显著上升(p Bin I*. (I. Key Laboratory Of Oral Disease Resean h, Zunyi Medical University, Zunyi 563006, China: 2. Affiliated Stomatological Hospital of Zunyi Medical University, Znnyi 563000, China )Abstract Objectives Herein, in order to vxplrc the effects

3、of anti-caries DNA vaccine pVAXl-SG on the expression of nits批注IAW请补充:第一作者:姓名(年份),性别, 职称,主要研究方肉通讯作者;姓名(年份),性别,职称,主要研究方 向t E-mail TTt投稿论文的题目、摘要、关健词、图题、表题、图注、 表注以及中文参考文献必须有中英文对照(中文汇献、二; 娈翻译的(本身就有英文翻译的再翻译,本身无英文翻 译的保留中文就可),请先列出英文同译后是中文批注A2:知网13.4%万方37.82%.文章现制率较高请修改至20以下,引用他人文字 部分可换种表达方法,或者正文相应增加些内容,复 制

4、率均可下降,如要自行查受制率请剔除摘要和文献. 只杏正文部分breastFcRn,thechangesofmRNAexpressionobreastFcRngeneinSDratsWereanalyzedatdiferentphysiologicalstagesandunderimmuneconditions.Methods40fcmalc-conceivedSDratxwererandomlydividedintofourgroupswhichwereIabclsanti-VariesDNAvaccine,emptyplasmid,physiologicalsaiincwandblankco

5、ntrolgroups.Atthefirstday.thestudiedrateswereimmunizedwithcorrespondingreagents,respectively.Subsequently9afterthedeliver)forIweek,theSI)ratswereexecutedandthemammaryglandwastakeninthesecondweekfordetection.ResultssTheexpressionofFcRngeneinthemammaryglandsafterimmunizationwiththeanti-cariesDNAvaccin

6、epVAXl-SGassignificantlyhhcrthanthatofthenormalg)pofrats(p0.05).ConclusionsTheanti-cariesDNAvaccinepVAXl-SGcanincreasetheexpressionofFcRninratsInHInmaryglands.Keywords)nti-cariesDNAvaccine;BreastFcRnzImmuneexpression;FcRn是一种位于细胞膜表面的IgG抗体受体,其蛋白结构和MHC-I分子类似,主要在内皮细胞中表达,其结构包含由链和。2微球蛋白组成的异二聚体FcRn可以和IgG的F

7、c部分结合,阻止IgG分子被溶酶体裂解,可以起到增长IgG体内半衰期的作用,参与到IgG的体内转运、维持和分布代谢过程中ULFCRn作为将IgG从母体传递到幼崽体内的特异性载体,WallaCe和ReeS在啮齿类动物刚出生的幼崽小肠上皮细胞刷状缘上首次分离得到。FCRn在许多成年哺乳动物的呼吸道、消化道和生阳道的黏膜上皮细胞及肺脏、肝脏、肾脏、胎盘及乳腺等组织都有表达a”FCRll与IgG在酸性环境中结合,在中性环境解离,其相互作用具有PH值依赖性二因此,IgG从组织间隙液中流经乳腺上皮细胞过程中,在腺泡上皮细胞的基底侧与酸性环境中的FcRn结合,经胞吞转运释放到腺胞腔中。防僦DNA疫苗免疫后产

8、生的抗体在许多哺乳动物比如小鼠的肾脏、肝脏、血管内皮细胞等组织器官都有表达网。FCRn在不同动物中传递母体IgG的途径不同。比如:在人和兔子中主要通过胎盘内转运母体的IgG分子,在乳汁中则几乎不含IgG;在啮齿类动物中一部分可以通过胎盘中的FcRn转运母体IgG分子,部分可以通过乳腺中的FcRn转运IgG.FCRn可以调控血清中IgG的浓度,当IgG少的时候,与IgG结合可以保护其不被体内溶菌满降解,延长IgG的半衰期I。L益金项目I步州有普通ItJi等学校青年科技人才成长项目(髀科鲁KY字20221276号九贵州省普通四等学校为年科技人才成长项目黔科合KY字2O22289号L费州省卫生做康委

9、科学技术珞金项目iUKngul)14J837XM62QI7Q9J61.3 RNA提取、测序、分析一每个样本编号,按照RNA提取试剂盒说明书分别提取总RNA。使用Agilent公司21型生物分析仪配试剂盒(AgiIenlRNA6000NanoKit)检测总RNA的浓度、28S/18S值、RNA完整值(RlN)以及片断大小。每个样本总RNA单独建麻,构建好的文库用Agilcnt21Bioanalyzcr和ABIStcpOnePlusReal-TimePCRSyStem质检合格后进行ReSeqUenCingIlluminaHiSeq2000测序。过滤掉低质JR、接头污染以及未知碱基N含量过高read

10、s(SOAPnuke-V1.5.2).获得高质量数据后,比对到人参考基因组上(HISAT2-v2.04),然后用StringTie对每个样品分别进行转录本的重构,用Cuffmerge将所有样品的重构信息整合在一起,对整合后的数据再使用CUffcOmPare采集、比较和整合。2.1 pVAXI-SCi质粒提取及测序殴证将提取的质粒送SangOnBi。IeCh测序,结果如图1所示,序列峰图清晰有序,主峰明显,由于一个测序反应只能测到IooObP左右,pVAXl-SG的两个重要毒力功能区SpaP/A-CAT基因大小为1.8kb。对于PCR样品测序结果测到PCR终止末端的A减基,显示测序结果正常100%,真实可信(如图1)。图1pVAXI-SG质粒测序结果Fig.1SequencingresultsofpVAXl-SGPlaSmid2.2 实险样本的采集在免疫后7天采集乳腺(乳头周围ICm的范围,包埋于皮下组织中)后生理盐水冲洗,装入无菌、无醉EP管,并放入液缸速冻后80CC保存(图2和图3)。图2经肌肉注射DNA疫苗免疫SD大鼠Fig.2ImmunizationofSDratsbyintramuscularinjectionofDNAvacc

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