高效液相色谱法测定槐花米提取物中芦丁含量.ppt

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1、高效液相色谱法测定槐花米提取物中芦丁含量芦丁（Rutin C27H30O16）n豆科植物槐树花蕾-槐米的主要有效成份n具有维生素P样作用，有助于保护和恢复毛细血管的弹性，调节毛细血管的渗透性，可作为高血压和脑溢血的辅助治疗n已报道的芦丁HPLC测定方法采用的流动相有多种，本次实验的目的是针对这些不同的流动相进行考察，并对芦丁样品的含量进行测定。n本实验采用的槐米提取物来自浙江大学药学院天然药化实验室本科生实验产物OOHOHOHHOOOGlcRha中国药典n色谱条件 q固定相：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱q流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（32:68）q检测波长：257nmn对照品溶液的制备 精密称取

2、在120减压干燥至恒重的芦丁对照品适量 甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液n供试品溶液的制备 精密称取本品适量 置具塞锥形瓶中 精密加入甲醇50ml 称定重量 超声处理 再称定重量 甲醇补足减失的重量 滤过 精密量取续液2ml 置10ml量瓶中 甲醇稀释至刻度 摇匀即得n测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即得。文献一n色谱条件 q固定相：Nova-PakC18柱（150mm4.6mm）q流动相：甲醇-水（35:65）q流速：1.0mlmin-1q进样量：10lq柱温：30q检测波长：261nmn样品处理 精密称取本品适量 70%乙醇20ml浸泡 超声提取 离心取上清

3、反复提取至提取液无色 合并上清至100ml的容量瓶 定容n样品测定 适量提取液 0.45m滤膜过滤 直接进样 外标法测定文献二n色谱条件 q固定相：Luna 5 C18柱（150 x 4.6mm）q流动相：甲醇-水-乙酸（45:53:2）q进样量：5lq柱温：30q检测波长：355nmn对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品5.4mg 置于5ml容量瓶 甲醇稀释至刻度n供试品溶液的制备 精密称取本品适量 置于索氏提取器 甲醇提取至无色 提取液转移至250 ml容量瓶 甲醇稀释至刻度文献三n色谱条件q固定相：Spherisorb ODS Cl8（150mm4.6mm，5m）色谱柱q流动相：甲醇-乙

4、腈-冰醋酸-水（22:10:3:65）q流速：1.0 ml/minq进样量：20lq柱温：45q检测波长：257nmn供试品溶液制备 精密称取本品适量 30ml甲醇浸泡 超声提取 滤过 适量甲醇洗残渣 23次 洗液并入滤液 甲醇定容至100ml 摇匀即得n样品测定 供试品溶液 微孔滤膜(0.45m)滤过 直接进样 外标法测定项目项目文献一文献一文献二文献二文献三文献三固定相Nova-pakC18Nova-pakC18Luna 5 C18Luna 5 C18Spherisorb Spherisorb ODSODSC C1818柱柱流动相甲醇甲醇-水（水（35:6535:65）甲醇甲醇-水水-乙酸

5、乙酸（45:53:245:53:2）甲醇甲醇-乙腈乙腈-冰醋酸冰醋酸-水（水（22:10:3:6522:10:3:65）柱温()303045检测波长(nm)261355257精密度(%)1.431.441.5重复性(%)1.073.41.63回收率(%)96.3298.299.5设计方案n色谱条件q固定相：ODS色谱柱q流动相：甲醇-1%冰醋酸溶液（40:60）q流速：1.0 ml/minq进样量：10lq柱温：30q检测波长：257nmn标准曲线的绘制 对照品溶液分别配制成梯度溶液 进样 测定峰面积 以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，做标准曲线。n样品测定 供试品溶液 微孔滤膜过滤 直接进样

6、外标法测定n仪器精密度 同一对照品溶液 重复进样6次 测定其峰面积 计算RSD讨论n芦丁易溶于甲醇，在水中微溶，降低流动相中甲醇的含量将提高芦丁的分离效果，但同时也将延长保留时间，实验中需根据实际情况调节流动相配比以获得良好的分离效果。n芦丁在水溶液中呈酸性，为防止其水解，药典及许多文献报道的流动相中都加入了无机酸，但含量较高的酸容易对分析柱造成损伤。文献一的流动相中仅用了甲醇和水，也获得了满意的效果。而文献方案三认为加入乙酸可有效防止脱尾，实验中可根据实际情况决定是否加酸。n芦丁在204nm、257nm、355nm处有3个吸收峰，药典中芦丁的检测波长为257nm，文献二用了355nm作为检测

7、波长，也获得了较好的检测结果。另一个芦丁的吸收峰204nm干扰因素较多，使用较少。n据文献报道，柱温对分离的影响较小。随着柱温的增加，保留时间有所缩短，峰的扩散有所改善，但对分离度影响较小，故30较为适宜。参考文献n国家药典委员会，中华人民共和国药典(一部).北京：化学工业出版社，2005.1n邓富良，陈本美等.高效液相色谱法测定槐米中的芦丁含量J.湖南医科大学学报，2000，25(6)：598-599n梁南熙，彭永芳.槐花中芦丁的高效液相色谱测定J.昆明师范高等专科学校学报，2002，24(4)：51-52n李培凡，张颧慧等.RP-HPLC法测定不同产地槐米中芦丁J.中草药，2006，37(9)：1419-1420