葡聚糖凝胶层析脱盐.ppt

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1、生化实验六生化实验六目目 的的原原 理理原原 理理原原 理理O 原原 理理原原 理理原原 理理原原 理理原原 理理操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤5、上样与收集、上样与收集 打开出口排水，当打开出口排水，当胶床与上方水层的弯月面相切胶床与上方水层的弯月面相切时，时，加入加入0.6mL混合样液。上样完毕，开始收集一号管。每管混合样液。上样完毕，开始收集一号管。每管收集洗脱液收集洗脱液2mL。当样液进入胶床，其弯月面与胶平面相切时，暂停排当样液进入胶床，其弯月面与胶平面相切时，暂停排液，用滴管将洗脱剂沿柱内壁旋转着加入液，用滴管将洗脱剂沿柱内壁旋转着加入1cm高水位

2、，然高水位，然后排液，至其弯月面与胶平面相切，再缓缓注入后排液，至其弯月面与胶平面相切，再缓缓注入35cm高的洗脱剂。高的洗脱剂。6、洗脱、洗脱 不断向柱内加洗脱剂，保持胶床上水位不断向柱内加洗脱剂，保持胶床上水位35cm。出。出口流速控制在每口流速控制在每6秒秒1滴，直至收集到滴，直至收集到6号管达号管达2mL。操作步骤操作步骤7、鉴定、鉴定 另取另取6只干净试管，按收集顺序将洗脱液一分为二。只干净试管，按收集顺序将洗脱液一分为二。第一排每管加第一排每管加2滴滴BaCl2，根据白色沉淀多少，判断，根据白色沉淀多少，判断SO42-在各管中的浓度。在各管中的浓度。第二排每管加第二排每管加1mL考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250试剂，根据蓝色试剂，根据蓝色情况，判断蛋白质在各管中的浓度。将结果记录于下表中。情况，判断蛋白质在各管中的浓度。将结果记录于下表中。若鉴定的第若鉴定的第6号管中，仍有样品，表明洗脱和收集不号管中，仍有样品，表明洗脱和收集不够，需增加够，需增加7号、号、8号号操作步骤操作步骤 管号管号项目项目1234567891011白色沉淀量白色沉淀量+蓝色深浅蓝色深浅+结果处理结果处理 注意事项注意事项思考题思考题 思考题思考题 思考题思考题 思考题思考题 相关知识相关知识