黄瓜中异丙威的快速检测胶体金免疫层析法.docx

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1、黄瓜中异丙威的快速检测胶体金免疫层析法1范围本文件规定了黄瓜中异丙威的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于黄瓜中异丙威的快速定性测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1快速检测方法rapiddetectionmethod具有能够满足用户适当需求的性能，具有减少分析时间、易于操作或者可以自动

2、操作、小型化、降低检测成本等优势的替代方法。3.2参比方法referencemethod经过系统研究，清楚而严密的描述所需条件和程序，用于对物质一种或多种特征值进行测量的方法。注：该方法已经证明具有与预期用途相称的准确度及其他性能。原则上参比方法应为法定检验方法。3.3定性分析qualitativeanalysis根据物质的化学性质、生物性质或物理性质对其进行鉴定的分析方法。4原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的异丙威经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和试纸条中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线（T线）颜色深浅的变化。通过检测线（T线）与质控线（C线）颜色深浅比较

3、，对样品中异丙威进行定性分析。5试剂与材料5.1试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水的要求。5.1.1氯化钠（NaCl）o5.1.2十二水合磷酸氢二钠（Na2HP0412H20）。5.1.3二水合磷酸二氢钠（NaH2P042H20）。5.1.4丙酮（CH3COCH3）。5.2试剂配制样品提取液（0.2moLL磷酸盐缓冲溶液）：称取9g氯化钠（5.Ll）、6g十二水合磷酸氢二钠（5.1.2）、0.4g二水合磷酸二氢钠（5.1.3）,在烧杯中用水溶解后转移至IoOnIL容量瓶中，定容至100nIL,摇匀。注：也可由胶体金免疫层析试剂盒配套提供，或按照其说明

4、书配制。5.3标准物质异丙威中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度298%。表1标准物质信息表中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量异丙威Isoprocarb2631-40-5C11H15N02193.242注：或等同可溯源物质。5. 4标准溶液配制5.4 .1异丙威标准储备溶液(1000gmL)：准确称取适量经纯度折算后的异丙威标准物质(5.3)10mg(精确至0.01mg),置于小烧杯中,用丙酮(5.1.4)溶解，定量转移至IOmL容量瓶中，再用丙酮(5.1.4)定容，摇匀，制成浓度为1000gmL的异丙威标准储备溶液或可直接购买异丙威标准储备溶液。避光一1

5、8及以下条件保存，有效期6个月。5.5 .2异丙威标准中间溶液(100gmL)：准确量取ImL异丙威标准储备溶液(100OgmL)(5.4.1),置于IOmL容量瓶中，用丙酮（5.L4）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100gmL的异丙威中间工作溶液。28避光保存，有效期3个月。5.4.3异丙威标准工作溶液（10gmL）：准确量取InlL异丙威标准中间溶液（IoogmL）（5.4.2）,置于IOmL容量瓶中，用丙酮（5.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为10gmL的异丙威标准工作溶液。28避光保存，有效期3个月。5.5材料异丙威胶体金快速检测试剂盒。应在阴凉、干燥、避光条件下保存。5.5.1金标

6、微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。5.5.2试纸条或检测卡。6仪器与设备电子天平：感量为0.1mg和0.01go移液器：10L100PL、200L、ImL、5mL0粉碎机或搅拌机。涡旋振荡器。离心机：转速24000rmin胶体金读数仪（可选）。7环境条件温度15oC-35oC,相对湿度W80%。8分析步骤81试样制备样品测定部位应按照GB2763中附录A的规定执行。称取不少于100g具有代表性的蔬菜或水果样品，剪碎，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记。留样置于一18以下保存。8.2试样提取准确称取2g（精确至0.1g）制备的试样放入15mL离心管中，加入8mL样品提取液（5.2）,涡旋

7、或上下振荡Imin,静置Imin。取上清液，即为待测液。注：试样提取建议按照试剂盒说明书。8.3测定步骤8.3.1测试前，将未开封的检测卡或试纸条恢复至室温。8.3.2吸取待测液200L加入金标微孔中，缓慢抽吸510次至待测液与微孔试剂充分混匀，2030反应3mino8.3.3将试纸条插入到金标微孔中，20C30反应6mino8.3.4从金标微孔中取出试纸条，除去试纸条下端的样品垫，进行结果判定。注1：注1：测定步骤(8.3)也可按照试剂盒说明书进行。注2：结果判定可使用胶体金读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。8.4质控试验质控试验包括空白试验和加标质控试验。8.4.1空白试验称取空

8、白试样，按照8.2和8.3步骤与样品同法操作。8.4.2加标质控试验准确称取2g（精确至0.01g）空白试样置于15mL离心管中，加入100UL异丙威标准工作溶液（10gmL）（5.4.3）,使试样中异丙威终浓度为0.5mgkg,按8.2和8.3步骤操作。注：更换快检试剂品牌、批次时，均应进行空白试验和加标质控试验。9结果判定9.1目视判定通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定，见图1目视判定示意图。注：也可使用胶体金读数仪判读，读数仪的具体操作与判读原则参照读数仪的使用说明书。9.2目视判定示意图9.2.1无效结果质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，判定为

9、无效结果。质控试验结果不符合要求时，同批次所有检测结果判定为无效结果。若出现无效结果，需对同批次样品进行重新检测。9.2.2阴性结果质控线（C线）显色,检测线（T线）颜色深于或等于质控线（C线），判定为阴性结果。9.2.3阳性结果质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色或颜色浅于质控线（C线），判定为阳性结果。图1目视判定示意图9.3质控试验结果空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。10结果确认当检测结果为阳性时，采用参比方法进行确证。11性能指标检出限：0.5mgkg0灵敏度：295%。特异性：285%。假阴性率：5%o假阳性率：15%0注：性能指标计算方法见附录A。12其

10、他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用试剂、试剂盒或操作步骤之前，应对其进行考察，性能指标应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比标准为GB23200.113食品安全国家标准植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法。附录A（规范性）快速检测方法性能指标计算表性能指标计算方法见表A.I0表A.1性能指标计算方法样品情况检测结果总数阳性阴性阳性NllN12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=Nl.+N2.或N.1+N.2显著性差

11、异(X2)X2=(N12-N21-1)2/(N12+N21),自由度(df)=1灵敏度(p+,%)p+=NllNl.特异性(p-,%)p-=N22N2.假阴性率(pf-,%)pf-=N12NL=I00-灵敏度假阳性率(pf+,%)pf+=N21N2.=100-特异性相对准确度，%(Nll+N22)/(N1.+N2.)注：由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：NlI表示第一行，第一列，Nl.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行,第二列。为方法的检测结果相对准确性的结果,与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。