糜蛋白酶Chymotrypsin试剂盒说明书.docx

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1、糜蛋白酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书微量法100T/96S注意X正式测定之前选择2.3个预期差异大的样本做预测定。澜定意义：糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白醉相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。渊定原理：糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237nm有特征光吸收；通过测定237nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。自备仪器和用品：台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿

2、/96孔板（UV板）、冰和蒸储水。试剂组成和配制：试剂一：液体100mLXI瓶，4C保存。试剂二：粉剂Xl瓶，4避光保存。临用前加入20mL蒸储水充分溶解。粗液提取：组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：510的比例（建议称取约0.1g组织，加入ImL试剂一）冰浴匀浆，8000g,4C离心IOmin,取上清，即粗酶液。渊定步骤：1 .分光光度计/函标仪预热30min,调节波长到237nm,蒸储水调零。2 .试剂二置于37水浴中保温30min3 .空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20L试剂一，200L试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为空白管。（从吸光值

3、稳定增加开始计时）4 .测定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20L粗酶液，200L试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为aA测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）注意I空白管只需要测定一次。皮蛋白活性计售公式：a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：25C每亳克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶（Umgpro）=（ZA测定管一ZXA空白管）xV反总（CprxVl）T=2.75（A测定管一ZkA空白管）Cpr（2）按样本质量计算活性单位定义：25C每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶（U/g鲜重）=（ZA测定管

4、一ZXA空白管）xV反总（WxVlV2）T=2.75（A测定管一AA空白管）WW：样品质量（g）；Cpr:粗酶液蛋白质浓度（mgmL）,需要另外测定；VI：加入反应体系中粗醉液体积（mL）,20L=210-2mL;V2：粗醉液总体积（mL）,1mL：V反总：反应总体积，22OL=O.22mL;T：反应时间（min）,4min0b.使用96孔板测定的计算公式如下（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：25C每亳克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶（U/mgprot）=（ZA测定管一ZA空白管）xV反总（CprxVl）T=2.75（A测定管一ZXA空白管）Cpr（2）按样本质量计算活性单位定义：25C每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个醉活单位。糜蛋白酶（U/g鲜重）=（ZA测定管一ZXA空H管）xV反总（WxVlV2）T=2.75（A测定管一ZA空白管）WW：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋H质浓度（mgmL）,需要另外测定；VI：加入反应体系中粗酶液体积（mL）,20L=2102mL；V2：粗醉液总体积（mL）,1mL；V反总：反应总体积，220L=0.22mL;T：反应时间（min）,4min.注意事项I临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。优利科（上海）生科学有限.一X