环境生物学实验.ppt

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1、环境生物学实验种子发芽毒性实验种子发芽毒性实验四季小白菜（小麦）种子在不四季小白菜（小麦）种子在不同浓度铜、铬溶液中萌发率的变化同浓度铜、铬溶液中萌发率的变化一、实验目的一、实验目的 通过本实验掌握测定环境污染对植物有效性的方法，通过本实验掌握测定环境污染对植物有效性的方法，了解测定污染物对种子发芽产生毒性的基本原理，掌握了解测定污染物对种子发芽产生毒性的基本原理，掌握实验操作程序和步骤，能够独立进行实验数据计算和处实验操作程序和步骤，能够独立进行实验数据计算和处理，并对结果进行分析。理，并对结果进行分析。二、实验原理二、实验原理 植物种子在适宜的条件（水分，温度和氧气等）下，植物种子在适宜的

2、条件（水分，温度和氧气等）下，吸水膨胀萌发，在各种酶的催化作用下，发生一系列的吸水膨胀萌发，在各种酶的催化作用下，发生一系列的生理、生化反应。但是当有污染物存在时，污染物会抑生理、生化反应。但是当有污染物存在时，污染物会抑制一些酶的活性，从而使种子萌发受到影响，破坏发芽制一些酶的活性，从而使种子萌发受到影响，破坏发芽过程，因此，通过测定种子发芽情况，可以预测和评价过程，因此，通过测定种子发芽情况，可以预测和评价环境污染物对植物的潜在毒性和生物有效性。环境污染物对植物的潜在毒性和生物有效性。 三、实验材料及药品三、实验材料及药品： 培养皿；发芽床；滤纸培养皿；发芽床；滤纸 ；小白菜；小白菜种子（

3、小麦）；温度计、种子（小麦）；温度计、 标签纸标签纸 ；分析纯氯化铜；分析纯重铬酸钾；蒸分析纯氯化铜；分析纯重铬酸钾；蒸馏水。馏水。四、实验步骤（四、实验步骤（8989人人/ /组）组）1.1.取取5 5只培养皿，铺上只培养皿，铺上2 2层滤纸，分别编号层滤纸，分别编号1 1、2 2、3 3、4 4、5 5。2.2.用蒸馏水将氯化铜原液用蒸馏水将氯化铜原液（500mg/l500mg/l）逐级稀释逐级稀释100mg/l100mg/l、 200mg/l200mg/l、300mg/l300mg/l和和500mg/l500mg/l，将重铬酸钾原液，将重铬酸钾原液（1200mg/l1200mg/l）逐级

4、稀释逐级稀释200mg/l200mg/l、500mg/l500mg/l、800mg/l800mg/l和和1200mg/l1200mg/l。分别获得。分别获得4 4种不同浓度的污染液。种不同浓度的污染液。3.3.向向1 1、2 2、3 3、4 4号培养皿分别加入号培养皿分别加入10ml10ml（15ml15ml）的不同）的不同浓度的氯化铜（或重铬酸钾）染液（浸湿滤纸即可），浓度的氯化铜（或重铬酸钾）染液（浸湿滤纸即可），5 5号培养皿加入等体积的蒸馏水作为对照。号培养皿加入等体积的蒸馏水作为对照。4.4.挑选籽粒饱满、大小一致的小白菜种子，在每只培挑选籽粒饱满、大小一致的小白菜种子，在每只培养皿

5、的滤纸上，均匀放置养皿的滤纸上，均匀放置5050粒小白菜种子。粒小白菜种子。 5.5.将将5 5只培养皿置于只培养皿置于2525、相对湿度、相对湿度75%75%、光照条件下、光照条件下的恒温培养箱中培养；每天各实验组、对照组补充的恒温培养箱中培养；每天各实验组、对照组补充5ml5ml蒸馏水，以保持滤纸的湿润。蒸馏水，以保持滤纸的湿润。6.6.发芽势与发芽率的计算，在第发芽势与发芽率的计算，在第3 3天（对照组发芽良好天（对照组发芽良好时）测定记录小白菜种子发芽情况。时）测定记录小白菜种子发芽情况。 发芽势（发芽势（% %）= =规定天数内已发芽的种子粒数规定天数内已发芽的种子粒数/ /供作发芽

6、的种子总供作发芽的种子总粒数粒数100100发芽率发芽率(%)(%) = =全部发芽的种子粒数全部发芽的种子粒数/ /供作发芽的种子总粒数供作发芽的种子总粒数100%100%发芽势与发芽率的区别发芽势与发芽率的区别v种子的发芽率是指在足够的时间内，正常发芽的种子占全部供试种子的百分数。v发芽势则是在规定的时间内，发芽种子占供试种子的百分数。发芽势能表示种子发芽能力的强弱和种子发芽的整齐度。 所以，发芽势是鉴定种子生活力的重要指标。五、注意事项：五、注意事项：1.1.种子发芽后应具备的特征：幼芽长度不短种子发芽后应具备的特征：幼芽长度不短于种子长度的于种子长度的1/21/2，为具有发芽能力的种子

7、，为具有发芽能力的种子，以此标准进行观察，计数。以此标准进行观察，计数。2.2.发芽势与发芽率的计算，于第发芽势与发芽率的计算，于第3 3天测定记录天测定记录小白菜种子发芽的情况，将感染霉菌的种小白菜种子发芽的情况，将感染霉菌的种子要及时除去。子要及时除去。六、实验报告要求六、实验报告要求1.1.根据实验要求，在实验时间内到实验室记根据实验要求，在实验时间内到实验室记录实验数据。报告要求准确、美观。录实验数据。报告要求准确、美观。2.2.实验报告：种子名称，每种浓度处理的种实验报告：种子名称，每种浓度处理的种子数，培养条件污染物的每种浓度处理制子数，培养条件污染物的每种浓度处理制组和对照组的发

8、芽率和发芽势的平均值。组和对照组的发芽率和发芽势的平均值。3.3.对试验结果进行分析讨论。对试验结果进行分析讨论。 温度胁迫对生物（植物）的影响温度胁迫对生物（植物）的影响 一、实验目的和意义一、实验目的和意义 不良环境（如高温或低温）对生物的正不良环境（如高温或低温）对生物的正常生存会产生不良的影响。植物在遭遇高温、常生存会产生不良的影响。植物在遭遇高温、低温时，原生质膜的半透性消失，对物质的低温时，原生质膜的半透性消失，对物质的透性发生改变，有机质或盐类从细胞中渗出，透性发生改变，有机质或盐类从细胞中渗出，进入周围环境中。通过进入周围环境中。通过电导度的测量和糖的电导度的测量和糖的显色反应

9、，显色反应，可以测知物质的外渗程度，以了可以测知物质的外渗程度，以了解植物受害的情况，并可对不同植物对高、解植物受害的情况，并可对不同植物对高、低温的耐性程度做出判断。低温的耐性程度做出判断。二、仪器以及材料二、仪器以及材料 电导仪，分光光度仪，冰箱，恒温培电导仪，分光光度仪，冰箱，恒温培养箱，移液管，试管，烧杯，电热板，叶养箱，移液管，试管，烧杯，电热板，叶片，蒽酮试剂，葡萄糖片，蒽酮试剂，葡萄糖三、实验方法及步骤三、实验方法及步骤1 1、样品的制备、样品的制备 将植物叶片清洗干净，再用蒸馏水漂洗将植物叶片清洗干净，再用蒸馏水漂洗干净后，用打孔器打取叶片。然后以干净后，用打孔器打取叶片。然后

10、以1010片为片为一组，共三组，分别放在盛有一组，共三组，分别放在盛有20ml20ml蒸馏水的蒸馏水的烧杯中，将叶片浸入蒸馏水中，分别放在烧杯中，将叶片浸入蒸馏水中，分别放在 4545温箱和温箱和00的冰箱中培养的冰箱中培养. .2 2、标准曲线的绘制、标准曲线的绘制 取标准葡萄糖溶液稀释成浓度为取标准葡萄糖溶液稀释成浓度为0 0、5 5、1010、2020、4040、6060、8080、100ug/ml100ug/ml。在波长。在波长625nm625nm处处测其吸光度。得出测其吸光度。得出吸光度吸光度 糖浓度糖浓度曲线。曲线。3 3、样品的测定、样品的测定 培养培养2h2h后取出，达到室温后

11、后取出，达到室温后（可用常温水浴）。（可用常温水浴）。（1 1）电导度的测定）电导度的测定：用电导仪分别测量每一用电导仪分别测量每一小杯中溶液的电导度，记录。小杯中溶液的电导度，记录。（2 2）蒽酮反应：）蒽酮反应：另吸取溶液另吸取溶液1mL1mL于干净的试管于干净的试管中，再加蒽酮试剂中，再加蒽酮试剂5mL5mL，摇匀，于沸水中煮，摇匀，于沸水中煮15min15min，将试管取出冷却，将试管中溶液用分，将试管取出冷却，将试管中溶液用分光光度仪在波长光光度仪在波长625nm625nm处测定，并从标准曲线处测定，并从标准曲线上查得滤液中的糖含量。同时以蒸馏水作同样上查得滤液中的糖含量。同时以蒸馏

12、水作同样测定进行比较。测定进行比较。处理处理电导度电导度蒽酮反应蒽酮反应45450 20 2室温室温 1.学习水中细菌总数测定的方法； 2.了解水源水的平板菌落计数的原则。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经培养，由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落代表样品中一个单细胞。据形成的菌落数计数，换算出水中细菌总数（近似值）。 优点：传统计数方法，对设备要求不高。是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。 缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 1 1、水样

13、的采取、水样的采取（1 1）自来水：将水龙头洗净，并开放水龙头）自来水：将水龙头洗净，并开放水龙头使水流使水流2min2min后，以灭菌的三角瓶接取水样，后，以灭菌的三角瓶接取水样，以待分析。以待分析。（2 2）待测水样（池水、河水或湖水）：应取）待测水样（池水、河水或湖水）：应取距水面距水面10-15cm10-15cm的深层水样的深层水样. .2 2、细菌总数的培养、细菌总数的培养（1 1）自来水）自来水：用灭菌吸管吸取用灭菌吸管吸取lmllml水样，注入灭菌培养皿中水样，注入灭菌培养皿中( (共做两皿共做两皿) ) 分别倾注约分别倾注约15mL15mL己溶化并冷却到己溶化并冷却到4545左

14、右的牛肉膏蛋白左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上摇匀，使水样与培养基充胨琼脂培养基，并立即在桌上摇匀，使水样与培养基充分混匀。分混匀。待培养基凝固后，倒置于待培养基凝固后，倒置于37 37 温箱中，培养温箱中，培养24h24h，进行，进行菌落计数。菌落计数。 两个平板的平均菌落数即为两个平板的平均菌落数即为lmllml自来水水样的细菌总数。自来水水样的细菌总数。 (2) (2) 池水、河水或湖水等池水、河水或湖水等 稀释水样稀释水样: :取取3 3支灭菌的空试管（支灭菌的空试管（1 1号、号、2 2号、号、3 3号）号）分别加入分别加入9ml9ml灭菌水。取灭菌水。取1ml1ml水样注

15、入水样注入1 1号管内，摇号管内，摇匀，再自匀，再自1 1号管取号管取1ml1ml移至移至2 2号管灭菌水内，以此类号管灭菌水内，以此类推，则稀释度分别为推，则稀释度分别为1010-1-1 、1010-2-2 、1010-3-3，每个稀释，每个稀释度做度做2 2皿。皿。 稀释倍数要看水样污浊程度而定以培养后平皿稀释倍数要看水样污浊程度而定以培养后平皿的菌落数在的菌落数在3030300300个之间的稀释度最为合适，若个之间的稀释度最为合适，若3 3个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。则需继续稀释或减小稀释倍数。 自最

16、后3个稀释度的试管中各用灭菌吸管吸取lml稀释水，注入灭菌培养皿中。每一稀释度做两个平皿。 分别倾注约15mL己溶化并冷却到45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上摇匀。 培养基凝固后，倒置于37温箱中，培养24h，进行菌落计数。 3、计数： 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度2个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度2次重复的菌落平均数稀释倍数注意事项:1.样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无菌移液管（放菌液时，吸管尖不要碰到液面） 2.由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应尽快倒培养基，立即摇匀；3.倾注平板时的培养基温度冷却至45左右。4.计数时，30300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。菌落平均数稀释倍数即为细菌总数。5.同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊6.国家生活饮用水卫生标准GB5749-85： 细菌数（个/ml）100 总大肠菌群（个L） 3 鱼类急性毒理实验鱼类急性毒理实验一、实验目的一、实验目的 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验