微生物培养方法.ppt

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1、选修一选修一 专题专题2微生物的培养与应用微生物的培养与应用微生物的种类微生物的种类 非细胞：病毒；非细胞：病毒； 原核细胞：细菌、蓝藻、放线菌、支原体等。原核细胞：细菌、蓝藻、放线菌、支原体等。 真核细胞：真菌、原生生物、藻类等。真核细胞：真菌、原生生物、藻类等。 细菌：细菌：大肠杆菌大肠杆菌、乳酸菌乳酸菌等等 真菌：真菌：酵母菌酵母菌、霉菌；、霉菌； 原生生物：草履虫、变形虫等。原生生物：草履虫、变形虫等。微生物的特点微生物的特点 体积小，面积大体积小，面积大 吸收多，转化快吸收多，转化快 生长旺，繁殖快；生长旺，繁殖快； 适应强，易变异适应强，易变异; 分布广，种类多。分布广，种类多。

2、微生物的营养微生物的营养 培养基：培养基：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐等。等。 适宜的环境条件：温度、适宜的环境条件：温度、pH、氧气等。、氧气等。 自养型：自养型：无机碳源无机碳源；异养型：；异养型：有机碳源有机碳源。细菌 (1)结构：单细胞的原核生物，有结构：单细胞的原核生物，有球球形，形，杆杆形，形，螺旋螺旋形。形。 基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核。拟核。 特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞。 (3)繁殖繁殖: 二分裂。二分裂。 菌落菌落 菌落：菌落： 单个细菌用肉眼是看不见的，当单个细菌用肉眼是看

3、不见的，当单单个个或少数细菌在或少数细菌在固体培养基固体培养基上大量繁殖时，上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的，具有一定形态便会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群落。结构的子细胞群落。 菌落是菌种鉴定的重要依据菌落是菌种鉴定的重要依据。不同种。不同种类的细菌菌落的大小，形状光泽度颜色硬类的细菌菌落的大小，形状光泽度颜色硬度透明度都不同。度透明度都不同。 培养基的种类及应用按物理状态不同划分按物理状态不同划分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基按化学组成不同划分：合成培养基按化学组成不同划分：合成培养基/天然培养基天然培养基按用途不同划分按用途不同划分鉴

4、别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基无菌技术无菌技术 消毒消毒：不能杀死芽孢和孢子。：不能杀死芽孢和孢子。 煮沸、紫外线、化学药剂煮沸、紫外线、化学药剂 灭菌灭菌：能杀死芽孢和孢子。：能杀死芽孢和孢子。 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌、灼烧、干热、过滤。、灼烧、干热、过滤。配制培养基配制培养基包器材包器材灭菌灭菌菌种扩增菌种扩增倒平板倒平板接种接种培养培养观察记录观察记录实验操作实验操作微生物的培养微生物的培养包器材高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 ： 通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。条件：压力条件：压力100 kPa 100 kPa 温

5、度温度121 121 时间时间15-30 min15-30 min菌种扩增摇床震荡培养摇床震荡培养12h（于（于LB液体培养基中）液体培养基中）本图来自十一学校实验用具 LB固体培养基固体培养基 大肠杆菌菌液（大肠杆菌菌液（LB液液体培养基）体培养基） 培养皿培养皿 接种环接种环 酒精棉酒精棉 酒精灯酒精灯 镊子、火柴、记号笔镊子、火柴、记号笔接种前准备 用肥皂洗手并使用酒精消毒。用肥皂洗手并使用酒精消毒。 顺序：顺序： 点燃酒精灯点燃酒精灯酒精棉擦拭双手酒精棉擦拭双手酒精棉擦拭桌面酒精棉擦拭桌面倒平板接种、划线 灼烧接种环 取菌液 划线分离烧至暗红烧至暗红接种、划线 灼烧接种环 取菌液 划线

6、分离菌液膜菌液膜接种、划线 灼烧接种环 取菌液 划线分离接种、划线划线分离为什么通过划线分离可得到单菌落？倒置后做好标记，写在培养皿侧面倒置后做好标记，写在培养皿侧面划线分离我们的实验结果我们的实验结果培养培养为什么要倒置培养？为什么要倒置培养？恒温恒温37培养培养配制菌悬液1个个99ml无菌水无菌水 2个个9ml无菌水无菌水得得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液的菌悬液1g土壤土壤稀释菌悬液 （10-4）高浓度高浓度低浓度，换枪头低浓度，换枪头接种 取200ul菌悬液(10-4)涂布分离低浓度低浓度高浓度，可不用换枪头高浓度，可不用换枪头涂布分离涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？涂布前后三角

7、刮刀需要灼烧吗？37倒置培养按浓度捆成一摞按浓度捆成一摞恒温恒温37培养培养10-4 、 10-3,、 10-2常见接种方法常见接种方法 平板划线法：平板划线法： 主要用于主要用于分离分离、纯化纯化培养培养 稀释涂布平扳法稀释涂布平扳法： 主要用于主要用于分离分离菌种并菌种并计数计数 常用方法常用方法 微生物培养和组培中的微生物培养和组培中的应用应用消消毒毒煮沸煮沸玻璃仪器玻璃仪器紫外线紫外线实验室、操作台实验室、操作台、衣物等、衣物等酒精溶液酒精溶液手、外植体手、外植体等等次氯酸钠溶液等次氯酸钠溶液等外植体外植体灭灭菌菌高压蒸汽高压蒸汽培养基培养基、玻璃仪器、棉塞、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等牛皮纸等灼烧灼烧接种环、涂布器接种环、涂布器干热干热玻璃仪器玻璃仪器