原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培养上清液中几种细胞因子水平的测定.docx

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1、原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因子水平的测定原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因r水平的测定原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因子水平的测定作者：王少敏孙建徐丽娅作者单位：吉林高校第一医院检验科，吉林长春1300211长春市民政局军休中心南岭干休所【摘要】目的探讨几种细胞因子(白细胞介素(I1.)2、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)、I1.4)水平变更对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断价值。方法醇联免疫吸附(E1.ISA)法检测经植物血凝素(PHA)刺激后淋巴细胞培育上清液中I1.2、TNF、IFN及I1.4水平。结果PBC患者淋巴

2、细胞培育上清液中I1.2、TNF水平与正常比照组比较均明显上升；IFN水平与正常比照组比较轻度上升；I1.4水平与正常比照组比较无明显变更。结论Th1.亚群占优势，Th1.细胞被激活，介导了自身免疫性损害，导致PBC的发病，推想细胞因子在肝损害中可能起着重要作用。【关键词】原发性胆汁性肝硬化细胞因子外周血淋巴细胞上清液酶联免疫吸附法目前认为原发性胆汁性肝硬化(PBC)是由自身免疫机制介导的以肝内小胆管进行性非化脓性破坏性炎症为特征的慢性胆汁淤积性疾病，并可进展为肝纤维化与肝硬化(I)0临床上90%见于女性,且多见于中老年妇女（2）。检测肝组织中T细胞生成的细胞因子，发觉同时存在Th1.和Th2

3、两组生成不同细胞因子的协助性T细胞（Th）亚群,以Th1.细胞因子为主（3）,但有关外周血中T细胞生成的细胞因子水平的探讨报道较罕见。本文通过测定PBC外周血淋巴细胞上清液（PBMC）中细胞因子（白细胞介素（I1.）2、肿病坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）、I1.4）水平，探讨PBC患者体内T细胞亚群比例失调状况及由其引起的机体免疫功能失调、免疫系统紊乱，为进一步探究PBC的发病机制供应新的依据。1材料与方法1.1对象2002年9月至2004年3月在本院住院的PBC患者30例，均为女性，年龄3862岁。均符合临床上PBC的诊断标准：临床表现符合PBC,除外其他肝内或肝外胆汁淤积，淤胆性肝功

4、能试验异样，病理学检查符合PBC的组织学变更。正常比照组20例，为长春血站健康献血者，男4例，女16例，年龄2546岁。1.2材料Hanks液、淋巴细胞分层液（比重1.077）（TBD公司）；植物血凝素（PHA）（上海医学化验所）；白细胞计数液（2%冰醋酸）；培育液IMDM（含10%小牛血清）；肝素（丽珠集团苏州新宝制药厂）；E1.1.SA试剂盒（TPI1.NC,UG1.G）;酶标仪（MOde1.1550BIORAD,日本）。1.3方法1.3.1淋巴细胞分别无菌静脉采血IOm1.,加肝素抗凝（每m1.血含12U肝素），将抗凝血缓慢滴入加有淋巴细胞分层液的试管中（二者比例为1：2）,使血液重叠于

5、分层液之上，采纳水平离心机，2000r/min离心15min。可见离心管分出明显两段，吸取上层血浆弃去，当心吸取分层液与血浆之间的淋巴细胞层，置于试管中，加入肯定量Hanks液，混匀后离心15000r/min,IOmin,弃上清，反复洗3次，分装备用。1.3.2淋巴细胞培育上清液收集加入含10%小牛血清的IMDM培育液将细胞悬浮，用白细胞稀释液显微镜下计数细胞数,调整细胞浓度为5106m1.,备用。将待测样品按不同稀释度加于96孔培育板中，设三复孔，每孔1001,加入已稀释的PHA100U将培育板置5%C02.37C、95%湿度轲箱中，培育3072h,随时视察细胞转化状况，在细胞转化最相宜时间

6、，100Ormin离心10min,收集上清分装标记，置-30C保存。1. 3.3的联免疫吸附（E1.ISA）法检测淋巴细胞培育上清液（PHA刺激前后）中I1.2、TNF、IFN及I1.4水平，操作严格依据试剂盒说明书进行。1.4统计学处理数据用xs表示，并用t检验。2结果PBC患者I1.2与正常比照组比较明显上升，差异有显著性（P005）;TNF水平与正常比照组比较显著上升,差异有显著性(P001);PBC患者IFN水平与正常比照组比较轻度上升，I1.4水平较正常比照组比较无明显变更，差异无显著性(P0.05)(见表Do表IPBC患者淋巴细胞培育上清I1.2、TNFUFN及I1.4水平(略)3

7、讨论PBC是自身免疫性胆汁淤积性疾病，抗线粒体抗体(AvA)为其特征性免疫学标记(4)oPBC病人的胆管壁及其四周有大量的T淋巴细胞浸润，旦体外试验表明PBC病人的淋巴细胞可导致自体胆管上皮细胞坏死，因此有理由推想T淋巴细胞参加了PBC的发病过程，但CD4+与CD8+T淋巴细胞谁占主导地位却存在争议，PBC时细胞因子的变更在不同的探讨中报道不一样。有探讨证明Th1.生成的IFN和I1.2在PBC病人的肝组织和分别的抗原特异性T细胞中均显著增高，而I1.4却较低，提示Th1.亚群占优势(5)Berg(6)等通过探讨PBC病人细胞因子基础表达和未被激活的肝脏浸润细胞或PBC病人细胞因子基因表达和未

8、被激活的肝脏浸润细胞或PBMC细胞因子类型，发觉PBC病人Th1.Th2型因子比率为1：1.并认为PBC主要是Th1.细胞被激活，其介导了H身免疫性损害。VandeWater(7)等从PBC患者肝脏中分别出PDCE2等2或IFN,或二者都分特异性T细胞克隆，测得其分泌I1.泌，但不产生I1.4。也有探讨表明PBC病人肝脏浸润细胞或PBMC主要分泌Th2型细胞因子。鉴于上述报道得出的不同结果，本探讨经PHA刺激后，检测PBC病人外周血淋巴细胞转化的上清液中的细胞因子(I1.2、TNF、IFN、I1.4)水平，发觉PBC患者体内I1.2分泌明显增高,I1.2主要由活化的T细胞,尤其是CD4+T细胞

9、及MK细胞分泌，属于Th1.细胞因子，可以诱导T淋巴细胞的增殖，淋巴细胞过度活化，NK细胞与CT1.杀伤活性下降，推想PBC的发病是Th1.占优势。TNF分泌明显高于比照组，TNF分泌增高，可激活巨噬细胞,导致炎症介质产生，这些炎症介质始终参加免疫调整过程，故认为PBC的发病是可能是由H型超敏反应所致。本探讨中通过测定外周血I1.4水平无明显变更，但I1.2、TNF、IFN分泌增高，提示Th1.亚群占优势，Th1.细胞被激活，其介导了自身免疫性损害，导致PBC的发病，推想细胞因子在肝损害中可能起着重要作用。由于PBC女性患者多发，且无少儿患者，推想PBC的发病除免疫因素外，可能还与内分泌或环境

10、因素有关(8)细胞因子在PBC发病机制中的准确作用机制尚无统一相识，找寻有效方法调整患者体内上述细胞因子水平，从而调整体内Th1.Th2平衡状态，将为上述自身免疫性疾病治疗开拓一条新途径。【参考文献】1NeubergerJ.Primarybi1.iarycirrhosis(J).1.ancet,1997;350(9081)：8759.2仲人前，孔宪涛.自身免疫性肝病(M).上海：科学技术出版社，1996：94105.3DienesHP,1.ohseAW,GerkenGeta1.BiIeductepithe1.iaastargetce1.1.sinprimarybi1.iarycirrhosis

11、andprimarysc1.erosingcho1.angitis(J).VirchowsArch,1997;431(2)：11924.4MackayIR1GershwinME.Thenatureofautoimmunedisease(J).Semin1.iverDis,1997;17:312.5潘淑荣.原发性胆汁性肝硬化患者免疫学探讨(J).临床肝胆病杂志,1989;5(3):145.6BcrgP,K1.einR,RockenM.CytokinesinprimarybiIiarycirrhosis(J).Semin1.iverDis,1997;17:11523.7VandeWaterJnsa

12、riA,Prindive1.1.eT,eta1.HeterogeneityofautoreactiveTce1.1.c1.onesspecificfortheE2componentofthepyruvatedehydrogenasecomp1.exinprimarybi1.iarycirrhosis(J).JExpMed,1995:181:72333.8KimWR,1.indorKU,1.ocIcosGReta1.Epidemio1.ogyandnatura1.historyofprimarybi1.iarycirrhosisinUScommunity(J).Gastroenteso1.ogy

13、，2000;119(6):1631.测论文查重检测三严三实开展以来，我仔细学习了习近平总书记系列讲话，研读了中心、区、市、县关于党的群众路途教化实践活动有关文件和资料。我对个人四风方面存在的问题及缘由进行了仔细的反思、杳摆和剖析，找出了H身存在的诸多差距和不足，理出了问题存在的缘由，明确了今后努力的方向和整改措施。现将比照检查状况报告如下，不妥之处，敬请各位领导和同志们指责指正。一、存在的突出问题一是学习深度广度不够。学习上存在形式主义，学习的全面性和系统性不强，在抽时间和挤时间学习上还不够自觉，致使自己的学习无论从广度和深度上都有些欠缺。学习制度坚持的不好，客观上强调工作忙、压力大和事务多，

14、有时不耐性、不耐烦、不耐久，实则是缺乏学习的钻劲和恒心。学用结合的关系处理的不够好，写文章、搞材料有时上网拼凑，求全求美求好看，结合本单位和实际工作的实质内容少，实用性不强。比如，每天对各级各类报纸很少刚好去阅读。因而，使臼己的学问水平跟不上新形势的须要，工作标准不高，唱功好，做功差，忽视了理论对实际工作的指导作用。二是服务不深化不主动。工作上有时习惯于按部就班，习惯于常规思维，习惯于凭老观念想新问题，在统筹全局、分工协作、围绕中心、协调方方面面上还不够好。存在着为领导服务、为基层服务不够到位的问题，参谋和助手作用发挥得不够充分。比如，到乡镇、部门、企业了解状况，有时浮皮潦草，不够全面系统。与

15、基层群众谈心沟通少，没有真正深化到群众当中了解一线状况，驾驭的第一手资料不全不深，书到用时方恨少，不能为领导决策供应更好的服务。三是工作执行力不强。口常工作中与办公室同志谈心谈话少，对干部思想状态了解不深，疏于管理。办公室虽然制定出台了公文办理、工作守则等规章制度，但执行的意识不强，有时流于形式。比如，办公场所禁止吸烟，这一点我没有严格执行，有时还在办公室吸烟。四是工作创新力不高。有时工作上习惯于照猫画虎，工作只求过得去、不求过得硬，存在着求稳怕乱的思想和患得患失心理，导致工作上不能完全放开手脚、甩开膀子去干，缺少一种敢于负责的担当和气魄。比如，做协调工作，有时真成了传话筒和二传手，只传达领导交办的事项，缺乏与有关领导和同志共同商讨如何把事情做得更好，创建性地开展工作。五是深化基层调查探讨不够。工作中，有时忙于详细事务，到基层一线调研不多，针对性不强,有时为了完成任务而调研，多了一些官气、少了一些士气。往往是听汇报的多，干脆倾听群众看法的少：了解面上状况多，发觉深层次问题少。比如，对县委提出的用三分之一时间下基层搞调研活动，在实际工作中却没有做到。即使下基层，有时也是走马观花，蜡蜓点水，让看什么看什么，让听什么听什么。在基层帮扶工作上，有时只注意出谋划策，抓落实、抓详细的少,对群众身边的一些小事情、小问题关切少、关注不够。