六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎疗效和机制探究.docx

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1、六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎疗效和机制探究1六君/汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十：指肠炎疗效和机制探究六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性卜二指肠炎疗效和机制探究摘要目的：评估六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性卜二指肠炎的疗效，与临床常规抑酸联合黏膜爱护制剂对比，探讨其产生疗效的机制。方法：依据文献探讨，参考放射性肠炎模型建模标准结合十.指肠特征，首创小鼠放射性卜二指肠损伤模型。将模型小鼠随机分为比照组5=26）、中药干侦组（n=16）,西药干预组（每只法莫替悬液05m1.+铝镁加混悬液0.3m1.灌胃，每日1次，n=16）0标准给药后通过小鼠一般状况、体重、健康评分变更、病理学

2、、炎性因于表达等客观指标评价疗效。结果：选取12Gy胜利建立小鼠放射性十:指肠炎模型。比照组小鼠出现体重下降，厌食、少饮、稀便，偶有黏液血便，精神差，皮毛不光整、少动、弓背等式现。药物干预组小鼠一般状况较单纯照耀组好转。中、西药干侦组脾、肠系膜淋巴结组织I1.-6,I1.-1.TM-的表达与比照组相较有卜.降趋势，外周血中三者浓度变更亦有所体现，中药组在降低炎性因子方面优势显著。镜下视察可见中、西药干预组较单纯照耀组黏膜有所修复，改良Chiu氏法评分中西药组间差异有统计学意义（P1.4造模及分组试验用SP级2Ba1.b/c小鼠适应性喂养3d,禁食12h,E1.制麻醉复合制剂（速眠新-氯胺酮2：

3、1.5）腹腔注射麻醉后固定于特制模具，依据0,4.5,6.0,9,12,13.5,15Gy递增剂量分组，采纳体部伽马刀同源60Co射线摸索小鼠放射性肠炎建模剂量，胜利建立放射性十二指肠炎模型后，将模型小鼠随机分为比照组5=26）、中药干预组5=16）、西药干预组（n=16）连续灌胃给药7d（照耀及照耀前4d,照耀后3d）,中药组给药方法：每只2m1.中药液犍胃（依据六君子汤合左金丸中药配方配伍颗粒剂型，以50m1.灭菌注射用水37C水浴制成匀浆），每日1次:西药组给药方法：法莫替丁胶囊20mg加入50m1.灭菌注射用水，每只0.5m1.灌胃，每口1次：铝镁加混悬液每只0.3m1.灌胃,每口1次

4、，比照组采纳生理盐水每只0.8m【，灌胃。药物用量的换算参照医药试验动物模型制作与应用中人与小鼠口服用药量换算方法，本试验采纳的给药方法相当于同等体重条件下成人给药量的30倍。末次给药后12h处死小鼠并采集标本。1.5检测指标视察小鼠一般状况，评估体重及健康评分变更1，13O病理学视察大体标本及镜下变更：取小鼠十二指肠组织，大体标本视察有无水肿、充血、溃疡、出血、狭窄等变更，福尔马林固定，生理盐水冲洗，包埋、切片、HE染色，镜下视察，改良Chui氏评分法评分。3炎性因子检测：Rea1.-timePCR测量脾及肠系膜淋巴结组织匀浆I1.-6,I1.-1.TNF-炎性因子的表达，E1.ISA双抗夹

5、心法测量外周血I1.-6,I1.-1.TNF-炎性因子含量。1.6统计学处理采纳SPSS13.0进行统计分析，计量资料以S表示，多组间比较采纳单因素方差分析，2组间比较采纳t检验，必要时采纳Mann-Whitney检验，计数资料比较采纳卡方检验。P值为双侧，检验水准=0.05o2结果2.160Co-RE模型的建立各组小鼠受照耀后一般状态及生存状况：4.5,6.0,9Gy照耀组未见稀便，照耀后2d出现不同程度的精神差，食欲降低，饮水量下降，照耀约57d即可第原正常，12,13.5,15Gy照耀组照耀后2d均有程度不一的稀便，偶有小鼠出现血便，至照耀后7d仍不能好转，其中13.5,15Gy照耀组出

6、现小鼠死亡，13.5Gy组死亡率约25%,15Gy照耀组死亡率约40%各组小鼠体重均有下降（图1）,4.5,6.0Gy组在照耀后5d出现体重回升，余组持续下降，以12,15Gy组下降最为显著。各组健康评分随照耀后时间延长均有下降，以12,13.5,15Gy照耀组最为明显，三者与9Gy组之间的差异有统计学意义（P图5放射性肠损伤诱导机体分泌I1.-6Fig.5Radioactiveintestina1.injurycausesthebodysecreteI1.-642.460Co-ARE小肠初射损伤后病理学变更60Co-ARE模型组较比照组出现肠黏膜变薄、萎缩，上皮细胞脱落，肠绒变短，隐窝结构不

7、清，或有炎性细胞浸润，细胞有丝分裂象削减，固有层炎性细胞浸涧，林膜淋巴管扩张，黏膜下血管充血扩张，肠腺存活率下降等现象。满意Guzman-SteinG等2制定的放射性肠炎模型标准。综上所述，4.5,6,9Gy照耀损伤较轻，无法很好模拟放射性肠损伤临床症状，12,13.5,15Gy照耀组体重下降、健康评分下降、稀便、食水量削减等状况与临床较为吻合，病理学变更与临床放射性肠炎相像，但13.5,15Gy组存活差，且炎性因子释放与12Gy组相比并无优势，不能为药物干预试验供应更大帮助，故予舍弃，选择12Gy照耀组作为60Co-ARE模型优选照耀剂量较为符合探讨要求。2.560Co-RE模型运用六君子汤

8、合左金丸加减方干预疗效分析胜利建立60C。-ARE小鼠模型的基础上赐予中药六君子汤合左金丸干预，同时设置西药组（法莫替丁胶囊+铝镁加混悬液）形成干预比照。图79可见脾和肠系膜淋巴结细胞中I1.-6,I1.-1,TNF-的表达,干预组与单纯照耀组相较均有下降趋势，图10为外周血提取血清中三者的浓度变更，亦体现了同等效果，但并非全部比照均产生差异，这可能与目前样本量不大有关。病理切片镜下视察可见干预组较单纯照耀组黏膜有所修复(图IDo运用改良的Chiu氏5法对组间评分，差异有统计学意义(P图8Rca1.-timcPCR检测60Co-ARE模型组与药物干预组小鼠脾、肠系膜淋巴结中TNF-mRNA的表

9、达变更Fig.8Thesp1.eenandmesenteric1.ymphnodesinthreegroupsmicewereexaminedformRNexpressionofTNF-byrea1.-timePCR图9Rea1-timePCR检测60Co-ARE模型组与药物干预组小鼠脾、肠系膜淋巴结中I1.-ImRN的表达变更Fig.9Thesp1.eenandmesenteric1ymphnodesinthreegroupsmicewereexaminedformRNAexpressionofI1.-Ibyrea1.-timePCR图1060Co-RE模型组与对应干预组小鼠血清I1.-6I

10、1.-1.TNF-水平Fig.IOCytokine1.eve1.sinthreegroups图11小鼠十二指肠病理切片(HE,100)Fig.11Miceduodena1.patho1.ogica1.section(HE100)参考文献1HiniamsJP,BrownS1.,GeorgesGE,eta1.Anima1.mode1sformedica1.countermeasurestoradiationexposureJ.RadRes,2010,173(4)：557.2GUZman-SteinGBonsackM,1.ibertyJ,eta1.6Abdomina1.radiationcauses

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