兽医临床中的药敏试验作用和意义.docx

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1、兽医临床中的药敏试验作用和意义目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严峻经济损失，阻碍了养殖业的快速进展，所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害特别严峻，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率上升和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威逼。因此，临床上应合理应用抗菌药,以避开或削减耐药性的产生，而合理应用抗菌药掌握畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导

2、临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能削减其不良影响。一、什么是药敏试验？抗菌药物敏感性试验(antimicrobialsusceptibilitytest,AST),简称药敏试验，是指对敏感性不能猜测的分别菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于阅历性治疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能，也是使用抗菌药物治疗前必不行少的一道环节。二、药敏试验的意义1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临床合理用药。由于试验是在体外对已经分别的细菌进行药敏，不需要生物载体，不需要试验动物，操作相对简洁，

3、成本相对降低。是一种既经济又有效的方法。2、可以对流行病学调查进行监控，掌握和预防耐药菌株的流行。由于随着新型致病菌的不断消失，各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。进行有效的药敏试验可以准时把握各种新型菌种和菌株的耐药性，对流行病学调查建立监控，同时实行相应的措施也就可以掌握和预防耐药菌株的流行。3、为临床用药供应参考依据。由于一个正确的药敏试验结果，可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。长期以来，由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消逝。不能很好的把握药物对细菌的敏感程度，不但造成药物铺张，而且还延误病情,给养殖户造

4、成了很大的经济损失。近十几年，在肉鸡生产中，为了掌握大肠杆菌及某些细菌感染，一些抗菌药物的盲目使用，导致耐药菌株越来越多。依据已进行的大量药敏试验结果,大肠杆菌、沙门氏菌对曾经敏感的氨基糖昔类、氨瞳诺酮类等，均产生了不同程度的耐药性,常常发觉对十几种常用抗菌药都不敏感的菌株。这是一个特别危急的信号。所以在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，应扩大常规抗菌药种类进行药敏试验，依据药敏试验结果，选择敏感药物，且应留意交替用药，按疗程投药，这样才能收到较好的治疗效果。三、常用的药敏试验方法兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种，即集中法和稀释法。其中集中法属手工测试方法,通过测试药物纸片或者牛津

5、杯在固体培育基上的抑菌圈的大小,推断细菌对该种药物是否敏感。稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培育基内的生长状况，推断其最低抑菌浓度(MIC)o由于集中法操作简洁，成本低，已经被大多数试验室和基层单位所采纳。集中法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法，目前牛津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简洁介绍纸片法。1、药敏纸片的制作纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销售。但也可依据需要自制，详细自制的方法如下：取质量较好的定性漉纸，用一般的打孔器打成直径6的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟

6、高压灭菌后，置于37温箱或烘箱中数天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.0Inll计，在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动，使滤纸片将药液匀称吸净，般浸泡30分钟即可。同时在纪录药物名称，于37温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干燥处或家用冰箱中保存，有效期4-6个月。2、药液的制备自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通常用蒸储水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度，按Ig需加多少亳升水或配多少亳克饲料，就相当于配制药液所加蒸储水的毫升数。如IOg药物可配50

7、kg饲料，其换算方法为：Ig本品加500OmI蒸储水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。3、试验操作方法在超净工作台中或酒精灯旁，用无菌棉签或经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培育物，以划线方式将菌液匀称涂布到平皿中的固体培育基表面。然后用无菌银子将纸片放于固体培育基表面并轻压，使纸片与培育基表面完全接触。为了能精确观看结果，要求药敏纸片匀称分布于培育基上，位置支配适中，防止消失抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中心贴一片，外周等距离贴56片。记住每种药敏纸片的名称。贴完纸片的平DIL15分钟后再置于37C温箱中培育1624小时，观看纪录结果。以药敏纸片四周没有肉眼可见生

8、长物区域为抑菌圈，依据抑菌圈直径大小推断细菌对抗菌药的敏感性。药敏试验结果判定标准抑菌圈直径（毫米）敏感性20极敏感15-20高敏感10-14中敏感VIO低敏感0不敏感实践证明，采用自制药敏纸片进行药敏试验，可以敏捷选药，与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区简洁买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量，既能缩短病程，又能避开盲目用药，削减铺张。四、依据药敏试验选药原则完成药敏试验后，应依据结果选择敏感性较高，同时价廉、易得、平安的药物进行治疗，以削减耐药菌株，同时还应留意以下原则：1、在选择高敏药物时还应考虑药物的汲取途径。由于药

9、敏试验是药液直接和细菌接触，而在给畜禽用药时，必需通过机体的汲取才能使药物发挥疗效，所以在给畜禽用药时，高敏药物肯定要协作相宜的给药方法，并予以足够剂量、足够疗程，才会取得好的治疗效果。2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响，药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为7080%,所以也不能过分地依靠药敏试验。如发觉疗效不显著应准时换药。3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断消失,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此，定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性状况是很有必要的。4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素，一

10、种抗生素可达到治疗作用时，不要用两种药物联合应用。必需应用两种抗生素时，应选择联合应用具有协同作用的药物。5、避开已经使用过的药物或其同类药物，发病期间已用过的药物或同类药物般不用。四、影响药敏试验结果的因素在以纸片法进行药敏试验时，以下几方面因素可影响试验的结果：1、培育基：首先应依据试验菌的养分需要选择相宜的培育基。培育基的成分的不同，不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌，如大肠杆菌及葡萄球菌可使用般养分琼脂；做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白陈平板；链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次，倾注平板时，厚度应合适(约5-6mm),不行太薄，一般90Inm直径的培育皿

11、，倾注培育基18-2Onm为宜。培育基内应尽量避开有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖昔类的抗菌活性，胸腺喀喔核昔和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。2、细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。3、药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格依据其推举治疗量配制。4、培育时间：一般细菌培育温度和时间为3712-24小时，有些抗菌药集中慢如多粘菌素，可将已放好药敏纸片的培育基先置4冰箱内2-4小时，使抗菌药预集中，然后再放37C温箱中培育，可以推迟细菌的生长，而得到较明显的抑菌圈。五、药敏试验存

12、在的问题当前进行药敏试验仍旧存在一些问题，主要包括以下几方面：1、方法学不统一，没有标准化。2、市场供应的药敏试验的培育基、药敏纸片等缺乏严格质控，质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。3、因需要先进行细菌的分别培育，所以药敏试验报告出结果时间长，检验与临床缺乏沟通，对于基层兽医站或养殖场，药敏结果不能满意临床治疗要求，简洁延误治疗时机。但依据有关报道，也可进行简易的药敏试验，方法如下：无菌取病死畜禽的部分肝、脾等组织，按1：5加生理盐水研磨制成悬液，静置5分钟，用无菌吸管吸悬液，加两滴于养分琼脂板上，涂布匀称，5分钟后贴上药敏试纸，培育、观看抑菌圈大小。4、对于部分养分需求较高的细菌或微生物，如链球菌和支原体，临床上较难培育，限制了药敏试验的应用。5、部分养殖场或基层兽医站缺乏做细菌分别培育和药敏试验的意识。绝大多数养殖者或技术人员是在没有明确微生物学诊断的状况下使用抗菌药物，养殖场规模越小，细菌培育和药敏试验做的越少，有的养殖场轮翻使用多种抗菌药物而不做细菌培育和药敏试验，致使疗效不佳，治疗时机延误和药品的铺张。一些病例用药前不做药敏试验，而是在大量使用多种抗菌药物疗效不明显时才想起做细菌培育和药敏试验，而此时细菌已对多种抗菌药产生耐药性。