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1、纯合型家族性高胆IfiIWifii症家系基因型与表型分析目的对1个纯合型家族性高胆固解血疵(HoFH)家系进行遗传学分析“方法前腌性研咒.选择市儿童.医院心内科10月确诊的1个HoFH家系先证拧及家系成员共20人为研究时象,收集临床资料，提取基因组DNA对先证者进行全外显子肥向捕获二代测序，并在家系内iS行Sanger测序验证。时家系成员杂令突变携带在和未携带者的施因型与表里进行分析。结果先证者为7岁10月龄男性患儿.生后足骨处皮肤可见圆形标豆大小黄色皮肤突起，34岁起双侧肘关节、膝关节及脚犍处皮肤逐渐出现在行051.5cm的黄色痛样结节,患儿身高、体重、智力发行与同龄儿相同。家族其他成员无类
2、似皮肤黄揣。患儿总胆固解(TC)18.1621.24mmo1.1.,低密度脂蛋白胆冏醉(1.D1.-C)14.O8-1S.51mmo1.1.,颈部超声梃示双侧颈动脓及椎动脉弥漫性硬化因块，心脏彩的提示主动脓阳增厚、钙化.亟因检测确定了先证者ID1.R除因携带c.418GA(p.E140K)纯合突变，分别遗传自患儿父母，.人为近亲结婚，均携带ID1.RE140K菇因杂合突变。家系中携带1.D1.RE140K基因杂合突变成员TC、UHC和载脂蛋白B分别为8.400.13),6.790.01),(1.950.05)mmo1.1.明显高于未携带者(4.590.28),(335039).060.10)m
3、mo87.269、4.595、6.311.P均是-种常染色体显性遗传病，孜病翦因主要包括编码低密度脂黄白受体(1.owdensity1.ipoproteinreceptor.1.DIR)、载脂蛋白B(apo1.ipoproteinB.APOBJ、前蛋白转化函枯草灌菌9(proproteinConvertaseSubtitisinkexin-9.PCSK9)和低密度的蛋白受体衔接蛋白1(1.owdensity1.ipoproteinreceptoradaptorprotein1,1.O1.RAP1)%因，其中1.D1.R塞因突变最为常见E2,3,根据联因型FH分为杂合型(heterozygous
4、fami1.ia1.hyper1.ipidemia.HeFH)和纯合蟹(homozygousfami1.ia1.hyper1.ipidemia.HoFH).HoFH患病率约为1/(167J-100万),未经治疗有少券期即可发生冠状动脓粥样硬化性心脏病，甚至界死【可，属于严期的罕见病，2018年被列入国家第一批罕见病目录.本研究对2018年10月于市儿及医院确诊的1例1.D1.R-E140K基因纯合突变的HoFH患儿及其家系进行遗传学及基因型与表型分析。对象和方法一、对象前雌性研究。选择市儿童医院心内科2018年10月确诊的HoFH先证者及其家系共20人为研究对象，本研究经市儿童医院伦理委员会批
5、准同意(),研究成员均签署了知情同意书.14岁以下由家长签署知情同意书.HoFH诊断标准依捌2014年欧洲动脉粥样现化协会(EUrOPeanAssociationofAtherosc1.erosis.EASHoFH管理指南，法因诊断标准；1.D1.R,APo8、PCSK9和1.D1.RAP1基因检测到明确的2个突变位点:临床诊断标准：治疗前低密度脂蛋白胆固静(Iowdensity1.ipoproteincho1.estero1.1.D1.-C)13mmo1./1.或治疗后1.D1.-C8mmo1.1.并且10岁之前出现皮肤或肌腱黄色的或父母ID1.X水平与HeFH一致.二、方法1 .临床资料：
6、收集病史、体格检查、心肌醉、肝肾功能、心电图、超声心动图，血脂测定包括总胆冏肿、密度脂蛋白胆固醉（highdensityIipteincho1.estero1.HD1.-C.1.D1.-C.甘油三:酯（trig1.yceride.TG）、我脂蛋白A1.（apo1.ipoproteinA1.ApoA1.,我脂蛋臼B（apo1.ipoproteinB，ApoB）.2 .基因组DNA提取和基因突变分析：聚集先证者及家系成员外周血各3m1.,用外周血基因组DNA提取试剂盆（北京天根提取基因组DNA.将先证者的基因组DNA送至北京信诺百世医学检验所进行全外显子组的杷向捕荻二代测序,采用生物估息分析软件S
7、ort1.nginto1.efantfromto1.erant及Mutation.Taster进行变异致病性预浏分析，依据美国医学遗传学与基因姐学学会（AmericanCo1.1.egeofMedica1.GeneticsandGenomics.ACMG）于201S年发布的序列变异解读标准和指南”评估变异的致病性6对二代测序所分析出的候选基囚突变位点在冢系内进行Sanger测序验证，300名汉族正常人为对照，对发现的变异进行家系成员范因型去型分析.三、统计学处理采用SPSS13.。统计学软件进行数据处H1,正态分布的计量资料采用s表示，m数据比较采用两独立样本t检验,以P为同胞兄弟.家系图见图
8、2.家族其他成员无类似皮肤黄痛.图1家族性高胆囿醉血症患儿临床特征和超出学检测结果A：大体图示双侧膝关节多发黄色瓶；B:颈总动脉超声示动脉内膜增厚和粥样硬化型块（箭头：C;超声心动图示主动脓赧关闭不全舒张期血液反流（箭头：D：超声心动图示主动脓濯煽以及回声增强钙化龙（前头）(94tH91a11;J;-3w“R.JRV耳?11iftI/先证者患儿口正常男性。正常女性0已去世男性0已去世女性杂合携带/E）无信息抱养图2家族性高胆固解血症寥系图体格检查：体Sf1.36.5C,呼吸20次min,脓搏98次min,血压9酩2mmHg（1mmHg=0.133kPa.体重28kg.发育正常,苕养中等,双眼板
9、球活动自如,结服、巩膜正常.角股透明.胸部对称无畸形.双肺呼吸音稍刈1.未闻及干湿啰音.心前区无隆起，心尖搏动正常，心前区无耗僚，无心包楝擦感，叩诊心界正常.，心律齐，心音A纯合突变（图3A），导致1.D1.R第140位谷氨酸被梭氨酸得代（p.E140K）,命名为1.D1.RE140K,纯合突变分别来自患儿父母.二人携带相同的1.D1.R基因c,418GA杂合突变（图3B、图3C.1.D1.R-E140K为人类基15突变数据库（humangenemutationdatabase.HGMD收录的高胆固醉11。流患者中检出的己知灾变。该突变未在人数据底中收录，人类外显子组整合数据际（ExomeAg
10、gregationConsortium.ExAO记录其频率为0.00002.生物信息分析软件SIFT.PoIyPhenZ及Mutation-Taster均预测该变异行害,依据ACMGF2015年发布的“序列变异解读标准和指南MGgctcagaccaggcctcc注：NCB1.为美国国立生物技术信息中心：箭头所示为突变位点图3家族性高胆固解血症先证者全外显子高通吊测序及父母验证结果A：先证者1.D1.R基因存在c.418GA（p.E140K）统合突变：B：先证者之父A（p.E140K）杂合突变：C：先证者之母（IV-14）Sanger验证结果示1.D1.R基因存在C418GA杂合突变三、基因型与
11、去型分析家系荔因型和血脂检测总结见表1根据2014年EAS的HoFH诊断标准，先证者携带1.D1.R-E1.40K基因纯合突变.iHjij1.D1.-O13mmo1.1.,并且10岁之前出现皮肤及跟腱黄色痂.故基因和临床均符合HoFH诊断,由于2个等位基因为相同变异，故为私HoFH患儿父母及家系中患儿外祖父In-15、也儿男父IV-17、N19携带1.O1.R-E1.40K菸因杂合突变,且均1.D1.Cv1.3mmo1.1.,故基因和临床诊断为HeFH先证者HoFH临床表型重，确诊时己经出现心血管损伤.颈动脉、升主动脓内腰增厚及粥样魄化.主动脉爆增厚及眄化,并出现主动脓关闭不全友现.治疗上给予
12、低脱饮食、体育锻爆生活指导，考虑患儿已羟出现f期心血管病变，给予双田渔过胆固静血浆附换联合口服普伐他汀钠的物治疗，血浆置换术缈23周1次，已治疗10个月，患儿病情平稳。患儿父亲出现角膜环，双偏颈动脉硬化并掰块形成，家系中其他HeFH患拧尚未发现动脓粥样硬化以及冠状动脉第样硬化性心脏病表型.HeFH与未携帚突变家系成员血曲参数比较，HeFH患者总胆固醉、ID1.-C和APoB明显高于未携带灾变成员（野生型）（P均0.05,表2）。讨论1.D1.R基因突变是FH最为常见的致病基因目前已经确定1OOO彩个突变位点，包括格义突变、移码突变、洪失突变等（7,8,9.本研究家系的先证者父母为近亲结婚.且均
13、携带相同杂合1.D1.R-E140K基因突变，临床及基因诊断均符合HeFH,先证者携带纯合UXR-EMOK垢因突变，多次被告UHC13mmo1.,且出生时即有皮肤黄痛病，34岁大关节区开始出现黄色痛，临床及基因诊断符合HoFH.H.基因鞭为其HoF1.家系中除广先证者为HoFH外.发现S个成员为HeFH.所右HeFH家系成员1.D1.C均升高,强儿父亲出现角膜环和主动脓内媵增厚，其他HeFH尚未发现心血管病变.未携带1.D1.R-E140K然因突变的家系成员，总胆固醇、ID1.、ApoB均正常，法因型表型分析确定1.D1.R-E140K基因突变在本家系中存在共分离现象，为致病性变异。1.D1.R-E140K基因突变在HGMD数据库和C1.inVar均
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