GB_T43778-2024细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定气相色谱-质谱（GC-MS）法.docx

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1、ICS07.080CCSA40中华人民共和.三H三国家标准GB/T437782024细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定气相色谱-质谱(GC-MS)法Determinationofstyreneand2-chloroethanolincellculturemedium一Gaschromatography-massSpectronietry(GC-MS)2024-0375发布2024-03-15实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GBT1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利

2、的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。本文件起草单位：中国计量大学、烟台开发区嘉量标准技术咨询与研究中心、广州洁特生物过滤股份有限公司、浙江经贸职业技术学院、中国测试技术研究院生物所、中国计量科学研究院、E海市质量监督检验技术研究院、H肃省食品检验研究院、杭州荣泽生物科技集团有限公司、安徽中盛溯源生物科技有限公司。本文件主要起草人：陈春、胡华军、叶素丹、叶子弘、冯文希、凌云、辛少平、周佳、言思敏、周李华、武利庆、陈相波、张颖。细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定气相色谱-质谱(GC-MS)法1范围本文件描述了气相色谱-质谱(GC-MS)法测定细胞培养液中

3、游离的苯乙烯、2-氯乙醇的方法。本文件适用于细胞培养液中游离的苯乙烯、2-氯乙醇的检测.2规范性引用文件下列文件中的两容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文件，仅该日期对应的版暴适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T62析实验室用水规格的方3术语和定义本文件没有需要界定的术进利实义。4原理在细胞培养液电加入内标物的同时加大无租恶，定即挥发性物质从被测细胞培养液挥发后进入气相.通过自动颜空选样器采集后进行CCMS法联用夯析和确证苯乙烯和2氯乙尊，用内标工作曲线法定量。5试剂和材料除非另有说明，本文件所用随剂均为色谱纯。水

4、为符合GB/TGG82规定的一级水。5. 1氯化钠(Nac1)。5.2 甲醇(CH3OH)。5.3 标准品：苯乙烯、D一苯乙烯、2-氯乙符、2氟乙醇，纯度299.5%,基本信息见附录A。或经国家认证并授予标准物质/标准样品证书的一定浓度的标准溶液。5.4 标准储备液：配制好后于2C8C下密封保存，有效期为6个月。5.5 .1苯乙烯(Imgm1.):准确称量50.Omg苯乙烯标准品，用甲醇溶解后，定容于50m1.容量瓶中，配制成终浓度为1mg/m1.的对照储备液。取2.5m1.于50m1.容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成50ugm1.溶液作为中间储备液。5.4.2D.苯乙烯(ImgZm1

5、.):准确称量50.OmgD2苯乙烯内标标准品，用甲醇溶解后，定容于50ml.容量瓶中，配制成终浓度为1mg/m1.的对照储备液。取0.5m1.于50m1.容量瓶中，用甲醇定容至刻度,混匀，配制成10gm1.溶液作为中间储备液。1.1.3 2氯乙醇(IOmgZm1.):准确称量100.0mg2氯乙醇标准品，用甲醇溶解后，定容于IOm1.容量瓶中，配制成终浓度为10mg/m1.的对照储备液。1.1.4 2-氨乙醇(IOmgm1.):准确称量100.0mg2-氨乙醇内标标准品，用甲醇溶解后，定容于10m1.容量瓶中，配制成终浓度为10mg/m1.的对照储备液。1.5 混合标准储备液：分别用移液器准

6、确吸取5.0m1.苯乙烯(50gm1.)5.0m1.2-氯乙醇(10mgm1.)于同一50m1.容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成浓度为苯乙烯5口g/m1.、2-氯乙醇1mg/m1.的混合标准储备液。配制好后于2C8下密封保存，有效期为6个月。1.6 内标工作溶液：用移液器准确吸取1.Om1.D4苯乙烯(10gm1.)、0.5m1.2-氟乙醇(10mg/m1.)于100m1.容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，配制成浓度为D4-苯乙烯100ng/m1.、2-叙乙醇50ug/m1.的混合内标工作溶液。1.7 标准工作溶液：用移液器将混合标准储备液(5.5)准确用水稀释50倍，制备成工作母液(

7、苯乙烯100.0Ug/1.、2-氯乙醇20.0mg1.),再依次分别稀释制备成苯乙烯25.0Ug/1.、10.0g1.5.0g1.1.8 xg1.1.0g1.0.5xg1.,2氯乙醇5.0mg/1.、2.0mg/1.、1.0mg/1.、0.5mg/1.、0.2mg/1.、0.1mg/1.的各浓度混合标准工作溶液，各配制50111.,现配现用。6仪器设备6. 1气相色谱-质谱(GCMS)仪：配电子轰击源(El源)。6.1 自动顶空进样器。6.2 电子天平：分度值为0.001g和0.1mg。6.3 移液器：睇为20H1.2001.2001.-1000U100050001.06.4 容量瓶：10m1

8、.、50m1.100m1.o7试验步骤6.5 样品制备取测定样品7ml,经700OXg离心IOmin,用移液器准确吸取5.0m1.上：清液，置于20m1.顶空瓶中，再用移液器准确加入100P1.混合内标工作溶液(5.6),同时加入2g氯化钠，密封并标识，现配现用。同时以超纯水为空白样，加入相同混合内标工作溶液和氯化钠用于空白值的测定。6.6 内标工作曲线制作用移液器准确吸取5.0ml各稀释度混合标准工作溶液(5.7),置于20m1.顶空瓶中，再分别用移液器准确加入100.0l.混合内标工作溶液(5.6),同时加入2g氯化钠，密封并标识，现配现用。6.7 as三供试品瓶置于自动顶空进样器中90加

9、热孵育30min。取2m1.气体顶空进样，注人GC-MS系统中。6.8 仪器参考条件7. 4.1气相色谱参考条件如下：a)色谱柱：聚乙二醇(PEG)极性色谱柱(60m250m0.25m或相当者；b)柱温：70,保持4min;I(TCmin升温至200,保持3min;c)进样口温度：200;d)载气流速(He):1.2m1./min;e）分流比：10:1。7.4.2质谱参考条件如下：a）离子源：电子轰击源（El源），温度230C,四极杆温度150;b）检测方式：选择性离子监测（SIM）;c）选择监测离子及质谱参数，见附录B;d）电离能量：70eVo7.5气相色谱-质谱测定7. 5.1定性测定根据

10、样品中被测物与标准工作溶液中被测物的保留时间进行定作国于定性的离子色谱图见附录C）o在相同的实验条件下，若被测物的色谱峰保留时间和标准工作溶液的一致（变化范围在2.5%以内），所选择的离子均出现，而山所选择离子的相对丰度和对照品离子的相对丰度偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性离子的相对丰度最大允许偏差相对丰度。10最大允许偏差/%507.5.2定量测定在仪器最住置作条件下，整合池测物溶液制作内称工作业线的溶液.2）依景进相分析。以被测物和内标物晶定甯离子对场面积比安纵坐标、被测物的浓度为质率标经细标准置作师线，用标准工作曲线对稀品进行定量。虚使托品溶液中客被进物

11、的响应面不仪器测定的线性范用内如果含量超过标准工作血载范围，应用水稀释到合适依度后而进屏分析7.6平行试验按照7.3对同一样品近石样品处理后，进行平行测定。8结果分析被测物的含量用质量浓度表示。按公式（1）计算被测物的质量浓度（p）：f-V.-小“P-1._j一a式中：。二二被测物的质量浓度，苯乙烯单位为微克每升（ug1.）,2氯乙醇单位为亳克每升（mg1.）;A样品中被测成分峰面积；A、内标物峰面积；a内标工作曲线斜率；b内标工作曲线截距；n一一样品稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位小数。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值

12、不应超过算术平均值的10机10其他细胞培养液中苯乙烯检出限为02g1.,2-氯乙醇检出限为50g1.附录A（资料性）标准品基本信息A.1被测物标准品的信息见表A.1。A.1被测物标准品的信息序号中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量1苯乙烯Styrcne100-42-5CxHe104.1522-皴乙醇2-chIorocthanol107-07-3C2H3Cl080.52A.2内标物标准品的信息见表A.2。表A.2内标物标准品的信息序号中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量1Dg-苯乙烯1,2,3,4.5-penladcutcrio-6-(1.2,2-1ridcuteriocthenyl

13、)benzene19361-62-7CD104.1522-氟乙醇2-fluorocthanol371-62-0C:H3F(064.06附录B（资料性）被测物及内标物的选择监涌离子及质谱参数8.1 被测物的选择监测离子及质谱参数见表B.1,表B.1被溜物的选择监测离子及质谱弁数序号中文名称保留时间m定量高定性离子1定性离子2驻留时间msI苯乙烯8.9104.051.05022-氯乙醋40.849.043.080.0508.2 内标物的准择监测离子及质谱参数见表B.2o*B.2内标物的选择监测离子及质谱）数序号中文名称离子驻留时间ms1Da-苯乙烯.15022-氟乙醇64.031.502-氟乙醉紫

14、乙烯D.-不乙烯SIM(78.OoOOO)附录C(资料性)被涌物标准品及内标物的反应监测(SIM)色谱图被测物标准品及内标物的反应监测(SlM)色谱图见图Cl图C.5。2-氯乙醉7.07.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.513.013.5采集时间mir图Cl总离子色谱图8.96.57.58.08.59.09.5采集时间min10.010.511.011.512.012.513.013.5图C.2笨乙烯特征离子色谱图6.57.07.58.08.59.09.510.010.5I1.O11.512.012.513.013.S采集时WJ/min图C.3D3笨乙烯特征离子色谱图107550250075502500755025。x2N221.h1.1.0.0.0.SIM(49.0000010.86.57.07.58.08.510.511.011.512.02.513.013.5三C42-氯乙i子色道