包装充氧量对无水活运花鲈鳃组织结构及相关酶活性的影响.docx

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1、包装充氧量对无水活运花妒鲤组织结构及相关酶活性的影响花纳可以通过低温诱导休眠的方式进行无水保活（临界冰温4,无水保活时间8h）,常温恢复后鱼体可回到正常状态并存活一段时间。无水活运过程中使用高浓度02包装花妒，是为了提高鱼呼吸器官效率。过高浓度的02包装也会导致鱼体产生出过多的氧自由基，细胞内的自由基不能被及时清除则会攻击生物的蛋白质、脂肪和核酸等细胞成分，为抵御这些攻击，机体的抗氧化防御体系被激活，超氧化物歧化酶（SoD）可以阻断自由基对细胞的损害，保护机体免受损伤。在生理状态下细胞内同时存在以SOD介导的氧自由基反应和MDA介导的脂质过氧化反应，这两种反应对机体新陈代谢起着重要作用。溶菌酶

2、自身较稳定，但包装中潮湿的木屑易引起鱼体表皮溶菌醉分泌功能不正常，进而导致其浓度改变。对黑鳏、鲫鱼、黄颖鱼的无水保活研究发现，纯氧包装供氧相比空气包装能延长无水保活时间。研究不同充氧量（体积分数分别60%、80%、98%）包装对花妒血清MDA浓度、SoD活力、表皮黏液溶菌酶活力和鲤组织形态学变化的影响,缩小无水保活运输包装充氧量的范围。1包装充氧量对无水活运花妒血清SOD活力、MDA浓度的影响结果显示，包装充氧量对花妒血清中SOD、MDA水平影响较大。CK组SOD活力为（5.380.29）U/m1.,MDA浓度为（14.931.54）nmol/m1.,运输Oh（降温未包装运输），不同02包装组

3、SOD、MDA水平与CK组相比升高，表明降温过程刺激鱼体产生氧自由基，SOD活力升高以清除自由基，从而减轻运输应激对机体的损伤。包装运输Ih,花妒血清SOD活力下降。在运输28h,60%02包装组的MDA浓度最低，SOD活力最高；98%O2包装组MDA浓度下降，SOD活力则较稳定；而80%组MDA浓度较稳定。唤醒后各组花妒血清SOD活力与运输过程中相比降低并恢复至正常水平。2包装充氧量对无水活运花妒体表黏液溶菌酶活力的影响CK组花妒体表黏液溶菌酶活力为（9.582.84）Um1.o结果显示，运输Oh,溶菌酶活力降低，说明花妒黏液溶菌酶活性在经降温处理后受到低温抑制。运输Ih,花加体表黏液溶菌酶

4、活力未见回升，运输12h,60%、80%。2包装组花妒体表黏液溶菌酶活力升高，运输28h,60%、80%O2包装组溶菌酶活力依旧处于较高水平，甚至接近CK组，溶菌酶水平回升有利于保护鱼体免受病原侵害C98%O2包装组在整个运输过程中花妒体表黏液溶菌酶活力均处于最低水平。唤醒后花妒体表黏液溶菌酶活力接近运输Oh,暂养水可能降低溶菌酶活力。可见外部因素（温度、02体积分数、微生物数量等）可直接引起花妒体表溶菌酶活力变化。3包装充氧量对无水活运花妒融的显微、超微结构影响取正常鱼鲤（CK）.运输Oh、运输8h时花妒鳏丝进行组织切片观察，花炉鲤丝包括鲤小片、鲤丝血管和结缔组织等。图3为蛆丝横截面显微结构

5、，CK组花妒鳏丝形态对称、细长，血管饱满、内部充盈，具有发达的管囊系统（图3A）。经历降温处理后运输Oh的鳏丝明显肿胀、肥大、不对称、边缘模糊，可能是由于降温使鱼鲤消耗大量能量，导致变形（图3B）n60%。2包装组运输8h后与CK组相比，鳏丝肿胀、鲤小片融合，边缘加厚（图30。80%O2包装组运输8h后，其腮最接近CK组的正常形态，但由于运输原因，呈现不对称形态，表明鲍丝弯曲。98%O2包装组运输8h后，花妒融丝轻微肿胀，蛆小片融合，末端膨大。鲤丝结构极易受到外界环境影响，整个保活运输操作中降温处理对蛆丝的影响最大，包装运输过程中充氧量也对鲤丝形态有影响，在运输过程中保证鲤丝正常形态有利于运输

6、结束后花妒的恢复。由图4可知，鲤小片上皮细胞表面着生有环形微崎（CM）、星点棒状（SPRS）和微绒毛（MIC）,CM形成类似迷宫的纹路，具有较深的沟。CM轮廓直径范围为5.119.38pm、SPRS轮廓直径范围为6.2510.57Hm、MIC轮廓直径范围为6.899.57n鲤小片上皮细胞表面凹陷，形成了类似丘陵的小山，增加了蛆小片的表面积，也可参与气体交换。CK组鲤小片平整，CM沟壑清晰，SPRS分布均匀（图4A）；运输Oh后，鲤小片上皮细胞CM沟壑加深，SPRS.MlC分布密集，且与CM连成一片，可能是上皮细胞因为降温发生了皱缩（图4B）；60%、80%、98%O2包装组运输8h后，CM、S

7、PRS数量减少，MlC几乎不可见。相比之下，80%O2包装组花妒蛆小片微观形态更接近CK组。由图5可知，花妒鲤丝边缘有SPRS,内部微细囊管系统极为发达、分布密集，细胞内部线粒体数量多、体积大。CK组花妒鲤丝边缘SPRS突出明显，黏液细胞发达，并与外界直接相连（图5A）；运输Oh组与CK组相比，线粒体数量增多，体积增大，表明鱼体正需要大量能量；60%、80%、98%O2包装组运输8h后，游离线粒体增多且趋于表皮，边缘微喳变粗且数量减少，这与图4中扫描电子显微镜观察的结果一致。对比发现，80%O2包装组运输8h后，鱼鲤组织形态更接近CK组。讨论无水活运过程中使用高体积分数02充注包装，目的是为了

8、提高体表花妒辅助呼吸器官效率，但这也增加了氧自由基的生成，造成鱼体细胞受损。己有关于无水活运研究多数采用纯氧包装，少数采用空气包装，关于无水运输包装中充氧体积分数使用范围过于宽泛，不利于实际应用中精确控制，且造成资源浪费。在相同运输时间下,60%O2包装组花妒血清中MDA浓度最低,80%O2组花触血清中SOD活力未随运输时间延长升高，充氧包装会增加花妒无水活运过程中的氧化应激反应。80%02组溶菌酶活力维持在较高水平，98%O2包装组花妒体表黏液溶菌酶活力在运输操作中较低，溶菌酶活力受环境刺激的影响，具体包括降温操作、充氧浓度、微生物数量等；鱼鲤组织形态因无水活运操作受到影响，不同02体积分数

9、包装运输8h后，花妒鱼鲤均出现不同了程度的鲤丝肿胀、鲤小片融合，边缘加厚，末端膨大现象，其中80%O2包装组运输8h后最接近CK组正常形态，但由于运输原因，呈现不对称形态，表明鲤丝弯曲。超微结构显示鲤小片因无水操作造成皱起不平，表面上皮细胞CM、SPRS数量减少，MIC几乎不可见，鲤丝内部游离线粒体增多且趋于表皮，黏液细胞减少，表皮边缘微峭变粗或脱落。充氧包装提高鱼呼吸器官效率，而与02直接接触会导致蛆组织上皮细胞轻微变化；因而，接近纯氧的体积分数98%O2的包装运输花鲍并未显现优势。综上，降低包装中02体积分数至60%80%对运输中的花妒保活更有益处。附参考资料：保护液结合暂养工艺对花鲍无水

10、活运效果的影响花妒(1.ateolabraxmaculatus)属鱼纲(Pisces)、妒形目(Perciforms)能科(Serranidae)常鲍亚科(OIigorinae).花第属(1.ateoIabrax),因其具有生长快、抗病强、营养丰富、味道鲜美特点，成为我国主要的养殖海水鱼品种之一。花妒捕捞后可以通过低温诱导休眠的方式进行无水保活，花炉生态冰温零点温度(临界温度)为4,经低温无水保活运输后，恢更常温的鱼体可回到正常状态并存活一段时间。VC既是一种具广泛生理功能的营养素，又是一种具免疫作用的免疫调节因子，有明显的抗感染作用，但许多硬骨鱼类自身缺少合成VC的酶，必须通过饲料或食物获得

11、1-2。研究表明，花妒幼鱼、大黄鱼血清溶菌酶活力随着VC添加量的增加而升高2-3。姜(ZingiberofficinaIe)性味辛、微温，药用其根茎，具有调节机体免疫功能的作用4。李晓璐等将生姜液运用在脆肉貌的活体运输实验中，有效地提高了其24h运输的存活率。溶菌酶是一种低分子质量、不耐热的碱性蛋白，作为机体非特异免疫因子之一，其参与了机体的多种免疫反应，在机体正常防御功能和非特异免疫中具有保持机体生理平衡的重要作用6刀。研究表明溶菌酶的应用能极大延长海产品或水产品的保鲜期，可为贮藏、运输等带来诸多方便8。山梨糖醇分子可提高鱼体表保水性，低温下蛋白酶变性程度低，起到抗冻效果9。本实验尝试在花妒

12、暂养、运输过程中加入保护液，然后进行模拟无水活运，考察采用保护液的保活新工艺对花妒血液生化指标、鲤组织Na+K+-ATPase活性、血清溶菌酶活性、免疫球蛋白M(immunoglobulinM,IgM)水平等鱼体非特异性免疫能力指标的影响，将保护液包装新工艺与传统湿木屑包装工艺运输后鱼体情况做对比，为升级无水活运包装工艺提供参考。1材料与方法1.1 材料与试剂花鲍鱼购自水产品市场。挑选体质健康、无外伤、鳞片完整、大小基本一致(长40Cm)的活花鲍鱼作为实验材料。实验用水：由经颗粒活性炭过滤后曝气的自来水和海盐配制而成，实验开始前的Id配制，连续曝气24h后用于实验。所制得水的性质：水温2223

13、、盐度1617%。、溶解氧46mg/1.、pH7.58.510溶菌酶、纯度98%山梨糖醇(14.7kDa)生物工程有限公司。12仪器与设备1.X-100VTr模拟运输振动台仪器设备厂；SH-100O1.ab-全波长酶标仪科技有限公司；5810R高速冷冻离心机电子科技有限公司；BS-200全自动生化分析仪生物医疗电子股份有限公司；乳酸测定试剂盒、ATP酶试剂盒、溶菌酶测试盒、IgM测试盒生物工程研究所。1.3 方法1.3.1 花g卢鱼的暂养采用周期饥饿驯化花加11,喂食Id饥饿3d,两周期；喂食早晚各一次，投喂鱼体质量10%饲料；暂养水中加入VC（25、30mg1.）12,CK组暂养水中不加VC

14、,暂养密度1尾/501.；禁食暂养时间12h；先暂养后冷驯化，冷水机按照3Ch降温速率将暂养箱中水温从2223降至临界生态温度4；此时，鱼体呼吸频率（243）次min,呼吸不规律，鱼体失去平衡、鱼腹朝上，裂蛆，刺激反应迟钝。1.3.2 配制保护液G保护液G包括：溶菌酶0.08%0.10%（质量分数，下同）、山梨糖醇0.2%0.4%、生姜液0.6%1%,盐度为16%。17%。，pH7.58.5,剩余为水。姜液制备5：取栽种4个月嫩姜洗净、沥干，此时的姜纤维细、味道微辣，不含较多姜辣素，姜辣素对花豌的刺激小；带皮用榨汁机榨汁（每千克原料加入约15Om1.蒸储水进行混合榨汁），并用200目纱布过滤，

15、收集姜汁，隔水加热至沸腾，装入带盖容器，放至常温，盖上盖子冷却至4,备用。1.3.3 鱼的处理与运输将暂养箱中触摸应激反应十分微弱的鱼捞出，将鱼分为6个实验组和CK组，具体见表1,每组样品30条，实验总数为210条。CK组不添加保护液暂养12h,降温休眠后捞出，直接装入带有湿木屑（木屑事先放入4、盐度16%。17%。、pH7.58.5的水中浸湿）的泡沫箱中。实验组放入保护液G中浸渍23s后，按1条/箱放于泡沫箱内，注意用保护液涂抹鱼身各部位（包括鱼蛆）。然后将两组鱼装入塑料袋内（1箱/袋），充入氧气（氧浓度监测仪）80%、扎紧袋口13,放入振动台上的大保温箱内，保持4运输温度。组别条件CK暂养

16、（WC）,不经保护液处理ClGl25mg1.VC（哲养水）、溶菌蒯.08%+山梨翻0.2%+生姜液0.6%（保护液）C1G225mg1.VC（暂养水）、溶菌蒯09%+山梨糖爵0.3%+生姜液0.8%（保护液）C1G325mg1.VC（哲养水）、溶菌梅0%+山梨糖醉04%+生姜液1%（保护液）C2GI30mg1.VC（暂养水）、溶菌蒯.08%+山梨螭02%+生姜液0.6%（保护液）C2G230mg1.VC（暂养水）、溶酶009%+山梨螭03%+生姜液0.8%（保护液）C2G330mg1.VC（哲养水）、溶菌梅0.1%+山梨螭04%+生姜制%（保护液）表1暂养结合不同浓度保护液实验组Tableicombi