最新版本-人民医院新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程.docx

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1、新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程1 .目的规范辖区内各医疗卫生机构和第三方检测机构新型冠状病毒核酸检测实验室对新冠核酸可疑或阳性结果复检及报告处置流程，确保检测结果的准确、及时。2 .适用范围适用于辖区内医疗卫生机构或第三方检测机构新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果的复测或复核处置。3 .职责3. 1检测人员：熟悉本实验室开展的新型冠状病毒检测项目的样本采集、保存、运输、检测、结果报告、上送等技术要求，并按操作规程做好样本的接收、登记、处理、检测、保存和运送工作。4. 2复核人员：负责检测结果的分析、核实，加强检测过程中的质量监督、监控。5. 3签发人员或实验室负责人：加强实验室检测

2、质量控制和生物安全管理，确保实验室检测人员按照规范进行工作，组织开展结果分析和样本复采、复检、上送，及时报告结果。4.操作程序4.1 处置流程启动条件当实验室检测人员在检测过程中发现有样本新冠病毒核酸orflab/N双靶标基因强阳性、弱阳性、灰区或单靶基因阳性，立即启动该处置流程。4.2 处置步骤4. 2.1首先应立即分析本次实验结果成立与否当以下条件均符合时，本次实验室结果成立：试剂盒本身的阴性对照和阳性对照扩增结果图与Ct值均应符合试剂盒说明书的要求；批次同步检测的弱阳性质控有典型S扩增并且Ct值在控，阴性质控对照无扩增；样本的人源内参靶标有正常扩增（如样本新冠双靶基因强阳性扩增，部分试剂

3、盒的人源内参可能存在弱扩增或无扩增的现象）。当以上对照或质控异常时，本次实验结果不可信。4. 2.2正确判读Ct值应根据扩增曲线与读数Ct值相结合进行判读，扩增曲线应为明显S型曲线，当扩增曲线起峰的位点的Ct值与仪器生成读数的Ct值基本一致时，可按照该Ct值读取结果；当扩增曲线起峰的位点的Ct值与仪器生成读数的CT值偏差较大时，需将该靶标基线位置整至至阴性对照之上或持平，在扩增曲线刚起峰的拐点位置读取Ct值。4. 2.3排查是否污染当发现样本的新冠病毒核酸检测结果阳性或疑似阳性时，首先要分析排查是否污染，考量样本人群来源、标本类型、扩增曲线、Ct值，加样和加模板过程中与阳性对照的相对位置，当批

4、次、当天或近期有没操作强阳性样本或强阳对照情况，扩增过程中及实验结束后有没发生PCR反应产物管裂开、爆管溢出等因素，经实验室经验丰富的检测人员或主管或负责人综合分析判断。无污染：当样本新冠Orflab/N双靶基因结果呈典型的S型扩增曲线，Ct值低于阳性对照（扩增曲线在阳性对照之前）时，如近期无操作过强阳性标本或对照、无PCR反应产物溢出等异常情况，且样本加样及加模板位置均离阳性对照较远，操作过程符合规范要求，交叉污染的可能性较低，同时如标本来源于高风险人群或密接者，标本为鼻咽拭子，此类阳性结果发生污染的几率很小，基本可排除污染的可能性。可能污染：当样本新冠orflab/N双靶基因结果呈弱阳性扩

5、增曲线或单靶基因阳性或处于灰区，Ct值等于或大于阳性对照（扩增曲线在阳性对照之后），且样本加样及加模板位置均离阳性对照较近，加上检测人员熟练程度不高，操作不够规范，存在交叉污染的可能，如近期实验室人员曾操作过强阳性标本或对照、PCR反应管产物溢出等异常情况，存在环节气溶胶污染的可能，而标本来源于低风险人群，此类样本的阳性结果发生污染的可能性较高。4. 2.4样本复采对于可疑阳性或阳性结果，均需高度重视，立即由经验丰富、技术熟练的采样人员重新采集符合要求的样本，旋紧管盖，三层包装好，用生物安全转运箱立即送回实验室：需同时采集鼻咽拭子、咽拭子、粪便或肛拭子等三类样本一式两份，使用植绒拭子采集、非灭

6、活型病毒保存管保存，用于核酸复查及备用于上送省进行病毒分离与测序溯源工作；使用不含抗凝剂的真空采血管采集3-5ml血液标本，析出血清后用于新冠抗体检测。必须首要采集鼻咽拭子，使用专用的、细软杆的植绒拭子,确保拭子到达鼻咽部位，旋转拭子并停留一定的时间，把拭子放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。采集咽拭子时，可分别用两根拭子擦拭咽后壁、两腭弓及扁桃体，来回涂抹次数及停留的时间可适当增加，把拭子放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。采集粪便时，用植绒拭子挑取黄豆大小粪便标本放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部

7、位避免污染，旋紧管盖。采集肛拭子时，拭子插入肛门3-5cm（婴幼儿童2-3cm）,旋转停留一定时间，再把拭子放入保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。如隔离人员或疑似阳性人员有痰液，可留取痰液标本，保存在非灭活型的病毒保存管中送检。对于重症住院患者，如必要则采集肺泡或支气管灌洗液标本，保存在非灭活型的病毒保存管中送检。4. 2.4样本复测和报告对于可疑或阳性结果的标本，实验室需安排技术和意识过硬的检测人员重新提取原样和新样本的核酸，用-2种质量可靠的核酸检测试剂进行复测，尽可能使用二步法、且灵敏度小于500拷贝/ml新冠荧光PCR检测试剂，通过人员比对、试剂比对、仪

8、器比对等形式加强质量控制。检测前处理时，检测人员需对严格核对复采样本信息，做好三级防护、在二级生物安全柜中充分振荡病毒保存管，然后300OrPm离心5min把管盖及管壁的液体离心下来，再双人在生物安全柜中开盖、取样、加样，规范和小心操作，尽最大可能避免样本交叉污染。提取时，使用提取回收率高的核酸提取试剂进行平行样测试，保证样本核酸提取纯化的质量。扩增检测时，至少使用双试剂、平行样测试。当重新采集的样本和原样复测结果依然新冠双靶标基因阳性、弱阳性、灰区、或单靶基因阳性，经实验室项目负责人或主管或实验室科主任分析审核无误后，向单位相关科室报告。并立即把原样本、重新采集的（鼻咽、口咽、肛拭子）标本上

9、送。4. 2.5样本上送市CDC各医疗卫生机构应立即通过院感或医务科与某某市CDC传染病防治科联系、报告个案情况，并立即把重新采集的（鼻咽、口咽、肛拭子）标本和原样本上送某某市CDC实验室，每份样本需用独立包装袋封装，按A类感染物质三层包装安全运输。出发前，送检单位需和市CDC微生物检验科取得联系，告知运送人员联系方式、运送样本的数量和类型、出发时间和估计到达的时间。血标本上送某某市第一人民医院检验科，开展新冠抗体检测，每份样本需用独立包装袋封装，按A类感染物质三层包装安全运输。出发前，送检单位需和市第一人民医院检验科取得联系。4. 2.6市CDC复核检测市CDC实验室在样本接收前尽可能向送样

10、单位了解样本信息，特别是标本的人群来源、样本类型、数量、CT值等,指导送检单位用非灭活病毒采样管，植绒拭子采集多部位样本（鼻咽拭子、咽拭子和肛拭子），使用不含有抗凝剂的真空采血管采集血液标本3-5mlo病毒实验室人员在做好相应生物安全防护要求的条件下，仔细检查样本的包装、类型、数量、状态及与送检单信息的一致性，如均符合检测技术要求，则在检测样品接收信息表中填写完整的样本交接记录，记录收样时间，送检人、收样人签名确认。收样时如发现样本有渗漏现象，立即拍照并通知送检单位该样本不及格，需退回与重新采样；如无渗漏现象，核酸提取前充分震荡样本。采取每一支样本作双份核酸提取，采用24套有效期内不同厂家的实

11、时荧光RT-PCR核酸检测试剂检测，每孔提取液再作双份平行核酸检测。如市CDC复核阳性，则联系医疗卫生机构重新采集非灭活型的鼻咽、口咽、肛拭子标本以及非抗凝血标本，在规定时间内和原样一起上送省疾控中心。在未上送前，将复检阳性样本和重采标本放置于-70。C以下专柜单独保存，双人双锁。如复核结果无法判定阳性，则联系加强监测频次，定期采集样本复测。4. 2.7上送省CDC复核或溯源分析市CDC对于复核阳性或无法确定的标本，应及时将重新采集的样本和原样上送省CDC,进行复核或开展病毒分离和基因测序溯源分析工作。6. 2.8本地感染个案的应急处置紧急应对对于本地发现的疑似阳性或阳性感染者，各医疗卫生机构

12、应快速排除污染可能，复采、复测和上送复核做到三同时,尽最大的可能缩短市县区之间的时间差，尽快明确检测结果，为疫情处置争分夺秒。新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程图见附件15.新型冠状病毒实验室检测结果的判断依据5.1 根据新型冠状病毒肺炎防控方案(第八版)之附件10实验室检测技术指南，本指南中的核酸检测方法主要针对新冠病毒基因组中开放读码框lab(openreadingframelab,ORFlab)和核壳蛋白(nucleocapsidprotein,N)。靶标一(ORFlab)：正向引物(F)：Ccctgtgggttttacacttaa反向引物(R)：Acgattgtgcatcagc

13、tga荧光探针(P)：5-Fam-Ccgtctgcggtatgtggaaaggttatgg-Bhqi-3靶标二(N)：正向引物(F)：Ggggaacttctcctgctagaat反向引物(R)：Cagacattttgctctcaagctg荧光探针(P)：5l-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-35. 2结果判断。阴性：无Ct值、无S形扩增曲线。阳性：Ct值小于等于检出限，且有S形扩增曲线，可报告为阳性。灰区：Ct值位于灰区，建议重复实验，若重做Ct值仍处于灰区，但出现明显的S形扩增曲线，该样本判断为阳性，否则为阴性。注：如使用商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。

14、7. 3病例确认。实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：条件一：同一份标本中新冠病毒2个靶标(ORFlab.N)实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新采样，重新检测。条件二：两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本2次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性。环境与生物材料核酸检测阳性要排除疫苗接种物残留污染的影响。核酸检测结果假阴性的可能原因包括：样本质量差;样本采集时间过早或过晚；样本保存、运输和处理不当；其他原因如病毒变异、PCR抑制等。5.4质控。由上级疾控部门对下级疾控实验室进行核酸检测质控考核，中国

15、疾控中心每年至少开展一次对省级疾控机构实验室的质控考核，并同时提供全国新冠病毒实验室检测质控方案，省级针对地市级实验室的质控考核每年不少于2次。各检测机构应当加强核酸检测质量控制，选用扩增检测试剂盒指定的核酸提取试剂和扩增仪。性能验证。临床标本检测前，实验室应对核酸提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成的检测系统进行必要的性能验证，性能指标包括但不限于精密度（至少要有重复性）和最低检测限。建议选用高灵敏的试剂（检测限W500拷贝/ml）o室内质控。实验室可按照国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知（国卫办医函（2020）53号）要求规范开展室内质控。每批检测至

16、少有1份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的1.5-3倍）、3份阴性质控品（生理盐水）。质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程。大规模人群筛查时，一旦出现阳性结果，应对阳性标本采用另外一到两种更为灵敏的核酸检测试剂对原始标本进行复核检测，复核阳性方可报出。物品和环境样本的采集检测，还需在采样前及采样过程中至少设一个现场空白样本及一个运输空白样本，以进行过程中的质量控制。室间质评。实验室应常态化参加国家级或省级疾控机构组织的室间质评。对检测量大以及承担重点人群筛查等任务的实验室，可适当增加室间质评频率。不按要求参加室间质评的，或室间质评结果不合格的，应通报批评并上报国家卫健委，待室间质评通过后方可开展核酸检测。5 .5.