唑来磷酸联合氟尿嘧啶对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响.docx

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1、嚏来磷酸联合氟尿喀咤对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响孙湘媛,施祖勇湖南省澧县人民医院药剂科I摘要目的探讨哇来瞬酸与氟尿喀咤联合便用是否具有协同抗乳腺癌生长的作用。方法以乳腺癌细胞系MCF-7为研究对象,采用不同浓度的哇来磷酸和氟尿嗓咤处理MCF-7细胞,并用最佳浓度的唾来磷酸与氟尿嗑陡联合处理,并设立无药物处理为对照组,到型CCK-8方法检测各组细胞增殖率,Calcein-AMZPI检测各组细胞凋亡率一结果CCK-8结果显示,与对照组相比,不同用药组对MCF-7细胞的生长均有一定的抑制作用,且均有统计学意义(P0.05),其中,氟尿喀咤贯序睫来磷酸组对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用最强;C

2、alcein-AMZPI双染色法检测结果显示单药组凋亡率显著升高,喋来磷酸组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率达13.7%,氟尿喀呢组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率辿23.9%,差异均县有统计学意义(P0.05)其中,氟尿喀咤贯序理来磷酸组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡影响最大,高达52.9%。结论喋来磷酸与氟尿喀咤联合便用时具有协同抗肿瘤作用。I关键词I乳腺癌;联合用药;氟尿喀陡;唾来磷酸ThegrowtheffectofdifferentcombinationwaysofzoledronicacidwithfluorouracilonMCF-7breastcancercells基金项目:国家自然

3、科学基金青年基金项目OSuNXiangSHIZuyongDepartmentofpharmacy,Lixianpeopleshospital,Changde415500,Hunan,CHINAAbstractObjectiveTostudytheantitumoreffectofcombinationwaysoffluorouracilwithzoledronicacidonMCF-7breastcancercells.MethodsThebreastcancercelllineMCF-7wasusedastheresearchobject.TheMCF-7cellsweretreatedwi

4、thdifferentconcentrationsofzoledronicacidandfluorouracil.Theoptimalconcentrationofzoledronicacidandfluorouracilwerecombinedtotreatthecellline,andthedrug-freegroupwascontrolgroup.ThecellproliferationratewasdetectedbyCCK-8method,andtheapoptosiswasdetectedbyCalcein-AM/PLResultsCCK-8resultsshowedthatcom

5、paredwiththecontrolgroup,differentdruggroupshadacertaininhibitoryeffectonthegrowthofMCF-7cells,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05).However,thefluorouracilsequentialzoledronicacidgrouphadthestrongestgrowthinhibitoryeffectonbreastcancerMCF-7cells;inadditiontheCalcein-AMZPIdoublestaining

6、methodshowedthattheapoptosisrateofthesingledruggroupwassignificantlyincreased,TheapoptosisrateofMCF-7cellstreatedwithzoledronicacidwas13.7%,andtreatedwithfluorouracilwas23.9%.Thedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05).Amongthem,thefluorouracilsequentialzoledronicacidgrouphadthegreatesteffectont

7、heapoptosisrateofbreastcancerMCF-7cellswas52.9%.ConclusionThecombinationofzoledronicacidandfluorouracilhassynergisticanti-tumoreffect.KeywordsBreastcancer;Combinationtherapy;Fluorouracil;Zoledronicacid多年来,无论是发病率还是死亡率,乳腺癌(breastcancer,BC)一直位居女性癌症的首位,已超过肺癌成为全球发病率的主要原因之一。最新统计数据发现,在2020年乳腺癌新发病例约230万,占所有

8、癌症病例的11.7%。转整性乳腺癌病人中将近有80%的患者会发生骨转移,导致破骨细胞活性增加、局部骨破坏和骨骼并发症,包括疼痛、高钙血症和骨骼相关事件。理来瞬酸(zoledronicacid,ZA)是一种第三代含氮双瞬酸盐类药物,是治疗与乳腺癌相关的骨病的主要药物。应主要通过抑制甲羟戊酸途径的关键酶法呢基焦磷酸(famesylpyrophosphate,FPP)合成酶,从而阻断破骨细胞介导的骨吸收HL在几项临床试验中分析了辅助喋来瞬酸治疗对乳腺癌患者总生存期的影响。这些试验表明,在ABCSG-12试验和ZO-FAST试验中,接受与哇来瞬酸联合辅助治疗的患者的无病生存期提高了1%然而,在AZUR

9、E试验中发现,与单独辅助治疗相比,接受辅助治疗联合噪来瞬酸的患者总体存活率增加。且有研究表明,喋来瞬酸的抗肿瘤和抗转移特性可能直接抑制血管生成、肿瘤细胞增殖和在骨中的粘附,并诱导肿瘤细胞凋亡阳瞑本文主要研究哇来瞬酸与氟尿喀咤联合便用是否具有协同抗乳腺癌生氐的作用,为临床上联合用药提供一定的理论依据。1 .材料与方法1.1 材料乳腺癌MCF-7细胞系购自中国cellcook公司,高糖DMEM培养基_(美国Gibco),胎牛血清工美国HyCkme2_,青霉素-链霉素购自上海麦克林生化科技有限公司,嗖来磷酸注射液购自美国诺华公司,CCK-8试剂盒(日本同注)。1.2方法1.2.1 细胞生长的曲线绘制

10、乳腺癌MCF-7细胞培养基为DMEM培养基(含10%胎牛血清),培养于37,5%的二氧化碳细胞培养箱中。待细胞长至快速生长期时,用胰酶消化细胞,均匀种于24孔板中,细胞密度丸2000个/孔,每组3个重复孔;按照第1、2、3、4、5、6、7天每天进行计数,并计算均值绘制生长曲线。1.2.2 细胞增殖检测按照试剂盒说明书要求,先确定最佳细胞密度,将处于对数生长期的MCF-7以IXlO4个/孔接种至j96孔板中,每仝孔加入100L的细胞悬液,每个检测点设置3个重复孔。96孔板四周孔中加同等体积的PBS,以防板中细胞培养液蒸发过快。将培养板在5%CO2培养箱中预培养24h。按照试剂盒说明书进行检测,用

11、酶标仪在45Onm处测定吸光度。As:实验组(含有细胞的培养基、CCK-8、药物),Ac:对照组,Ab:空白孔,计算公式:细胞存活率=KAS-Ab)/(AC-Ab)100%o1.2.3 细胞凋亡检测利用Calcein-AMZPI法检测细胞凋亡二将MCF-7细胞培养后培均匀的铺于6孔板中培养过夜,设阴性对照组(不加药物处理)和实验组(加药物处理),MCF-7细胞在加入不同浓度的药物24h后;按照CalCein-AM/PI检测方法处理细胞并收集细胞经流式细胞仪检测上机检测,每组3个重复孔。1.3统计学处理应用Gr叩hPadPrism8.0对数据进行统计学分析,数据以Ws表示,组间比较采用e,P(4

12、7.602.54)%和(35.903.69)%,用药组与对照组相比,差异均有统计学意义(*P0.05).其中,d组对MCF-7细胞的生长抑制作用最强,但其与c、e两组联合用药方案比较,对细胞的抑制率有显著的差异(*P0.01).与单一用药组比较,联用药物对MCF-7细胞的抑制率均明显强于单一用药组(*Pv0.05),表明联合用药组对乳腺癌细胞生长增殖抑制效里优于单一用药组(图2)。50*图2喋来磷酸和氟尿喀咤不同用药顺序对MCF-7细胞增殖的影响2.3 哇来瞬酸联合氟尿喀咤的用药顺序对MCF-7细胞凋亡的影响为了进一步研究噪来磷酸和氟尿嗓咤联合用药对MCF-7细胞的影响,设定不同的给药方式:a

13、组:单药哇来磷酸、b组:单药氟尿嗑陡、C组:联合用药组、d组:氟尿喀陡贯序喋来磷酸组、e组:喋来磷酸贯序氟尿喀混组。利用Calcein-AMZPI双染色法检测给药后对MCF-7细胞的影响发现,与对照组相比,单药组凋亡率显著升高,a组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率达13.7%,b组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率为23.9%,差异均有统计学意义(*P0.05)其中,d组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡影响作用最大,高达52.9%(见表1)。表1喋来磷酸和氟尿喀咤不同用药顺序对MCF-7细胞凋亡的影响组别活细胞()凋亡率(%)对照组95.90.260.00哇来磷酸组74.4+1.7613.72.67*氟

14、尿喘噬组71.32.3123.91.30*同时用药组64.9+3.1629.5+2.15*嚏来磷酸贯序氟尿喀咤组52.7+2.3542.12.36*氟尿嚅咤贯序唾来磷酸组39.2+1.4652.9+3.3与对照组相比:*PV0.053 .讨论乳腺癌是影响女性的最常见恶性癌症之一,其是一种很复杂的肿瘤,很大程度上表现为肿瘤内和肿瘤外的异质性,乳腺癌大多数为腺癌,通常根据浸润性(即原位或浸润性)、形态学、免疫组织化学标记的表达进行分类,反过来,这些特征与治疗的不同反应性和预后有关,而远处转移是增加乳腺癌死亡率的主要原因之一UL乳腺癌也是全球女性中最常见的癌症死亡病例,占癌症死亡病例的15%,2018年估计有62.67万人死于乳腺癌双瞬酸盐可抑制破骨细胞介导的骨吸收,可有效预

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