岛津LC-20AT型高效液相色谱仪的图文操作手册.docx

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1、SPD-M20A 二极管阵列检测器SIL-2OA 自动进样器RF-IOAXL荧光检测器CTO-20A 柱温箱手动进样器岛津LC-20AT型高效液相色谱仪的图文操作手册岛津LC-20AT型高效液相色谱仪:CBM-20A 系统控制器操作步骤:贮液瓶、功笆型坦学:1、曲能：本仪器型田南压梯度通过副E输液故别独立精娜控制流量、HVarian380-LCDGU-2OA3而虹盘财城科高精度混合；即配备/可提供全网长三维信息的蒸发光检测器真空脱气机测器，全新的光航收计与有效的梯形狭监也设计保两高分辨率和高标kMLX备了灵敏度更高、/选择性更好的荧光尊嗨J器；还潞了具有高灵敏啾检测范围更广的蒸发光检测,。/2

2、、用途：本仪器可以高效地别离分析扃沸点、喊稳定的有机及生%样；二极管阵列检测器对大局部有机化合物有响应；荧龙检测器可以检测产生炎光的物质，对如lc-20at产/多环芳烧、维生素B、黄曲霉素、口卜咻脑合物、农药、药物、，氨基酸、的类化合液传输单元卜、物等有响应；蒸发光散射检测器对碳绯花合物、外表活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相的任彳璃品、不含发色团的化合物有响应。1、色谱柱的安装本仪器配备了SPD-M20A二极管阵列检测器、RF-IOAXL荧光检测器和Varian380-LC蒸发光散射检测器。样品分析前首先要确定用什么检测器，然后把色谱柱连接到所需的检测器上。a、首先翻开UP

3、S,然后依次翻开DGU-20A3真空脱气机、LC-20AT溶液传输单元（泵）、CBM-20A系统控制器、所选用的检测器、自动进样器SIL-20A,CTO-20A柱温箱电源翻开。（HPLC组件的电源开关大都在仪器的右下角）b、将两个泵上部中间的黑色旋钮逆时针旋转90180度，按PUrge键进行自动脱气，一般设置为3分钟；然后按自动进样器软键盘的PUrge键，对自动进样器上的样品进行脱气，一般为25分钟。c、双击LCSOkHiOn图标。输入用户名Admin,点击OK。单击系统配置的图标，出现系统配置的对话框。单击自动配置，仪器自动将能找到的仪器配置，也可以用图示中的蓝色和红色箭头分别添加和去掉配置

4、的仪器。需要注意的是，仪器优先选择自动进样器，如果需要手动进样，需将自动进样器去掉。单击仪器（通讯设置），选择正确的仪器类型，然后单击自动获取IP地址。单击系统控制器，出现系统控制器的对话框，继电器的四个选项需要设置为Start。d、单击仪器开关按钮，将软件与仪器连接e、仪器参数视图里面，简单设置里面，模式选择二元高压梯度，设置总流速，泵B浓度，时间，柱温箱温度，时间程序。然后选择下载，跑基线。单击绘图，可以看查看基线。3、方法编辑a、以下图中看到仪器参数视图，选择高级，然后依次改变其中的参数。如果仪器为PDA检测器时，那么按以下进行设置。数据采集：LC停止时间为0.01。采集时间打勾，结束时

5、间为分析样品的时间。LC时间程序：如果等度洗脱，那么设置如图中0.01COmronerStop。进行梯度洗脱时需要如下图进行设置。单击绘制曲线，可查看梯度曲线。泵：模式选择二元高压梯度，设置泵B的浓度。最大压力根据色谱柱的最大压力进行设置。PDA：一般同时选择D2和W等，然后输入开始和结束时的波长。柱温箱：设置柱温箱的温度。控制器：将四个时间全部打勾。自动进样器：不需要重新设置。自动排气：不需要重新设置。方法设置完后，选择文件，另存为方法文件。当仪器稳定，基线稳定后，可以下载方法，进行样品的分析。b、如果选择荧光检测器，首先需要色谱柱接荧光检测器，翻开荧光检测器的电源，系统配置自动配置荧光检测

6、器。仪器参数设置局部检测器需要输入激发光和发射光的波长。其他同PDA检测器。c、4、如果选择蒸发光检测器，将色谱柱连接蒸发光散射检测器。翻开Varian-380电源开关，翻开VarianELSDControl软件方法编辑器单击Method,出来一对话框，Usemyowninstrumentsett,那么可以改变参数，设置新的方法。也可以不打勾，直接选择已经设置好的方法。仪器开启时即处于STANDBY模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。Standby模式下用户可设定仪器参数（雾化气流速，雾化温度，蒸发温度），然后将模式切换至RUNoRun模式是正常工作模式，仪器处于完全设定控制

7、状态。在加热或降冷却程中，仪器会显示“NOTREADY”,说明仪器未达设定条件。当仪器平衡完毕，会显示“READY。方法使用翻开机器后，选择适宜的方法。将工作模式设定为RUN,使仪器加热平衡。翻开LCSokHiOn软件，自动配置选择AD2,即选择了蒸发光检测器。其它设置同PDA检测器。仪器平衡后检察基线。在洗脱液未接入时噪音应低于0.2mv,这说明雾化气洁净枯燥。基线毛刺一般是由雾化气中的粒子或水分造成的。引入洗脱液并待其平衡15mino再次检查基线，应不超过ImV,如是为纯水应不超过0.25mv,纯有机溶剂也应不超过Imv0缓冲体系和稳定剂可显著增加噪音。然后进行样品分析。4、运行a、单次运

8、行单击单次运行，出现对话框，选择已经编辑的方法，输入文件名，输入样品瓶，样品架和样品的体积，单击确定可以进行样品的分析。点击辅助栏停止或者停止的快捷键，可以将分析停止。b、批处理运行单击批处理，翻开二级菜单，单击向导，可以新建，也可以附加一个批处理文件。选择方法文件，输入开始样品瓶，样品架，进样体积。下一步。输入样品组数，选择标准品和未知。下一步。输入标准品名字，ID,校准级别，数据文件名。下一步。输入未知品名字，ID,数据文件名。下一步。下一步，完成。出现批处理文件。另存批处理文件。单击批处理开始，开始分析样品。5、关机样品分析完毕，按照色谱柱的冲洗要求进行冲洗。冲洗完后，仪器参数视图，将总

9、流速设为0,下载。然后单击仪器开关，关闭软件，最后将电源关掉，关闭UPS。6、积分单击再解析，翻开已经完成的数据，会看到数据、方法、报告格式、批处理、全部文件形式。点击分析图标，选择多色谱，提取所要波长下的峰。在积分页面，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项。识别页面，利用时间窗或时间带限制峰。也可以选择积分页面的程序，进行手动积分。如果不了解方法，可以单击帮助。点击确定，分析完成。结果在视图，峰表内查看。7、标准曲线a、外标法定量单击向导，翻开化合物表向导窗口，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项，下一步。选择要标定的峰，下一步。选择外标法。计算面积。输入校准

10、级别，曲线拟合类型，一般选择线性。零点，一个校准级别，选择强制通过，其它选择未强制。加权方法无。输入浓度，下一步。识别，选择时间窗或者时间带。一般来说保存时间小的用时间窗。下一步。定义峰的名字和标样的浓度。完成。保存方法。单击校准，双击已经建立的方法。然后将标样图谱拖动到左下角数据文件的级别中，有几个级别，那么相应的拖到相应的级别中。那么自动生成标准曲线。另存为方法。b、内标法定量定量方法为内标法，确定内表物的峰。8、利用标准曲线计算样品的浓度翻开需要计算的谱图，文件选择需要加载的方法参数，查看峰表可以看结果。9、报告编辑单击报告模板，拖动到报告模板中即可，然后另存为报告格式文件。显示报告，将

11、数据拖动到报告模板中即显示报告。四、考前须知：1、高压恒流泵的维护：泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取以下措施以延长使用寿命：绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。要用HPLC级试剂。输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。压力下限应设置在0.5lMPa,以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨。2、流动相的使

12、用：必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并m薄膜过滤。过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体02等，如不脱气易产生气泡、基线噪声增加、灵敏度下降，甚至无法分析。如果管路中使用Peek树脂部件，不可使用浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢吠喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚飒等试剂。特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲溶液流动相的清洗方法：a、先用100%的纯水冲洗，翻开排放阀，用35mlmin的流量，洗20min左右后停泵，主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗。b、再用95/5的甲醛/水清洗整个系统,关闭排放阀,用lmlmin的流量,洗3060mi

13、n后停泵，主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。c、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用ImVmin的流量，洗2min左右，然后关机。如果流动相中不含盐，那么只使用上述第三步清洗即可。3、更换流动相：在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。如果前一种使用的流动相和所更换的流动相不能够相溶，要采用一种与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相进行过滤、清洗。较为常用的过滤流动相为异丙醇，但实际操作中要看具体情况而定，原那么就是采用与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相。一般清洗时间为30-40分钟，直至系统完全稳

14、定。更换流动相时，要用100ml的烧杯，放入需要更换的流动相，将虑头放入烧杯中，上下反复冲洗，然后将排液阀逆时针180度，purge。然后将排液阀顺时针180度。储液器的考前须知：m过滤器除区去其中的微量物质。4、色谱柱的使用：a使用前色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否那么缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。b、样品样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理；假设样品

15、不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。c、色谱柱的保存如色谱柱要长时间保存，必须存于适宜的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙懵中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯粹己烷中，离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中，并将购置新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。d、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。、反相柱的再生：依次采用2030倍的色谱柱体积的甲醇/水二10/90(V/V)、乙旗、异丙醵作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。（2）、正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。5、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决方法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：a、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；b、色谱柱头的