全国艾滋病检测技术规范》(版)解读.ppt

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1、全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范（2009年版）年版）解读与实验室规范化管理解读与实验室规范化管理内内 容容一、艾滋病病毒基本知识一、艾滋病病毒基本知识二、艾滋病检测技术规范二、艾滋病检测技术规范一、艾滋病病毒基本知识一、艾滋病病毒基本知识 名词解释名词解释 HIV病原学病原学 HIV生物学性质生物学性质艾滋病病毒与艾滋病英文名词艾滋病病毒与艾滋病英文名词 HIV:human immunodeficiency virus，人类免疫缺陷病毒，即艾滋病病毒。人类免疫缺陷病毒，即艾滋病病毒。AIDS:acquired immunodeficiency syndrome，获得性免疫缺陷综合

2、征，获得性免疫缺陷综合征，艾艾滋病是译音。滋病是译音。艾滋病艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（是由人类免疫缺陷病毒（HIVHIV）引起的）引起的一种慢性的病死率极高的严重传染病一种慢性的病死率极高的严重传染病,它的医学全它的医学全称为获得性免疫缺陷综合症。称为获得性免疫缺陷综合症。HIVHIV侵入人体后，侵入人体后，直接侵犯直接侵犯CDCD4 4+T T淋巴细胞，破坏人体的免疫系统，淋巴细胞，破坏人体的免疫系统，使感染者逐渐丧失对各种疾病的抵抗能力，最后使感染者逐渐丧失对各种疾病的抵抗能力，最后导致各种机会性感染和肿瘤。目前还没有疫苗可导致各种机会性感染和肿瘤。目前还没有疫苗可以预防，药物只能抑制病

3、毒。以预防，药物只能抑制病毒。注意注意:艾滋病不要误写为艾滋病不要误写为“爱滋病爱滋病”。HIV病原学病原学 HIV属逆转录病毒科慢病毒亚科，属于卫生部颁属逆转录病毒科慢病毒亚科，属于卫生部颁布的布的人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录中的危害程中的危害程度第二类病原微生物，为高致病性病原微生物。度第二类病原微生物，为高致病性病原微生物。HIV分为分为HIV-1和和HIV-2两型，全球两型，全球85%以上的艾以上的艾滋病是由滋病是由HIV-1型引起。型引起。HIV-2主要集中在南非等主要集中在南非等地，在我国远洋船员、归国人员中发现地，在我国远洋船员、归国人员中发现HIV-2。HI

4、V-1基因具有高度变异性，其在传播过程中，产基因具有高度变异性，其在传播过程中，产生很多亚型。目前流行的亚型有生很多亚型。目前流行的亚型有11个，为主要群体个，为主要群体（M群：群：A、B、C、D、E、F、G、H、I、J亚型）亚型）和次要群体（和次要群体（O群：群：O亚型）。亚型）。各亚型间的核苷酸各亚型间的核苷酸序列差异较大，序列差异较大，AH亚型间差异一般在亚型间差异一般在2235之间，而之间，而O亚型与亚型与AH亚型之间差异高达亚型之间差异高达50以上。以上。HIV-1亚型的鉴定和区分，主要是根据亚型的鉴定和区分，主要是根据HIV-1 env基因基因C2-V3区的不同序列来决定。区的不同

5、序列来决定。HIVHIV感染细胞过程感染细胞过程 HIV-1HIV-1囊膜糖蛋白囊膜糖蛋白gp120gp120与靶细胞上的受体与靶细胞上的受体CD4CD4结合结合 gp120gp120的构象发生改变的构象发生改变 继而与靶细胞上的辅受体继而与靶细胞上的辅受体CCR5CCR5结合结合导致导致gp41gp41的构象改变的构象改变暴露其融合肽并插入到宿主细胞膜暴露其融合肽并插入到宿主细胞膜 病毒侵入宿主细胞病毒侵入宿主细胞1.2:HIV包膜糖蛋白包膜糖蛋白(gp120)粘附到淋巴粘附到淋巴 细胞表细胞表面面CD4受体上，并趋化协同受体受体上，并趋化协同受体 靠近靠近gp1203.gp120粘附粘附C

6、D4,构象变化构象变化使使gp120结合结合CD4分子附近分子附近的趋化因子协的趋化因子协同受体同受体CCR5.CXCR上上4.5:gp120进一步构象变化使进一步构象变化使gp41的疏水端插入细的疏水端插入细胞膜胞膜,病毒和细胞膜接触融合病毒和细胞膜接触融合,病毒内物质进入细胞病毒内物质进入细胞艾滋病病毒艾滋病病毒感染机理感染机理艾滋病的致病机理艾滋病的致病机理不断破坏不断破坏T4T4细胞细胞降低免疫力降低免疫力Mature forms of HIV in a tissue sample细胞崩解细胞崩解HIVHIV生活周期生活周期HIV基因组基因组 HIV基因组由两条单股正链基因组由两条单股

7、正链 RNA组成。组成。HIV RNA长约长约9.29.7kb，含，含3个结构基因个结构基因（env、gag、pol），），6个调节基因（个调节基因（tat、rev、nef、vif、vpu、vpr），），5端和端和3端各含端各含长末端序列。长末端序列。ENV：gp160、gp120、gp41 GAG:P66、P51、P31 POL：P55、P24、P17HIVHIV基因组模式图基因组模式图ENVelope 包膜抗体 gp160-gp41四聚体四聚体比比 gp41单体浓度高单体浓度高常常被首先检测到的指标之一常常被首先检测到的指标之一存在疾病的全部过程存在疾病的全部过程与与HIV-2 有交叉反应

8、有交叉反应 gp120 外膜蛋白外膜蛋白+Trimer of gp41 浓度比浓度比 gp160低低与与gp160检测到非常特异检测到非常特异 gp41 跨膜蛋白跨膜蛋白 ENV 印迹最不敏感印迹最不敏感存在疾病的全部过程存在疾病的全部过程和和 HIV-2没有交叉反应没有交叉反应,但常常和但常常和 HIV-1的的O亚型有交叉亚型有交叉GAG 抗体(group antigen specific)p24-Core associated protein 衣壳蛋白衣壳蛋白常常首先被检测到常常首先被检测到特异性非常低特异性非常低抗体水平随病程进展降低抗体水平随病程进展降低 p17-Matrix asso

9、ciated protein 内膜蛋白内膜蛋白诊断价值低诊断价值低特异性低特异性低 p55-Precursor p24+p17+LMW(9 kd+5 kd)POL 抗体 p66 and p51 逆转录酶逆转录酶p66比比 p51通常较多出现通常较多出现通常在发现通常在发现ENV和和GAG30-60天后能检测到天后能检测到p66p66 与与HIV-2很容易有交叉反应很容易有交叉反应p66抗体水平随病程进展降低抗体水平随病程进展降低p51 抗体诊断价值小抗体诊断价值小 p31 内切酶内切酶 常常与常常与p66同时检测到同时检测到p31抗体水平随病程进展降低抗体水平随病程进展降低容易和容易和GAG片

10、段片段p32混淆混淆 HIVHIV对外界环境中理、化因素抵抗力远低于对外界环境中理、化因素抵抗力远低于HBV,HBV,常常用消毒剂均可使其失活。用消毒剂均可使其失活。0.5%0.5%次氯酸钠或次氯酸钠或70%70%酒精酒精1min1min即可使即可使HIVHIV失活。失活。HIVHIV离体干燥环境下离体干燥环境下2 2至至7min7min即可失活。即可失活。HIVHIV对热敏感，对热敏感，WHOWHO推荐推荐100 20100 20分钟灭活分钟灭活HIVHIV。HIVHIV生物学性质生物学性质HIV感染自然史感染自然史 急性期急性期 无症状期无症状期 持续性淋巴结肿大期持续性淋巴结肿大期 临床

11、期（艾滋病期）临床期（艾滋病期）急性期症状急性期症状 50%以上的患者在感染后以上的患者在感染后2周到周到2个月出现。个月出现。传染性单核细胞增多症样表现：发热、皮疹、关传染性单核细胞增多症样表现：发热、皮疹、关节痛、头痛、咽痛、乏力、淋巴结肿大、出汗、节痛、头痛、咽痛、乏力、淋巴结肿大、出汗、恶心、呕吐、腹泻。发生率恶心、呕吐、腹泻。发生率10-15%。通常在通常在2-4周内自行缓解周内自行缓解。无症状期无症状期 无症状期一般无症状期一般2-10年年 最早最早6个月个月 性传播时，平均性传播时，平均8年年 HIV-2感染时较晚，最长可达感染时较晚，最长可达20年年 一旦发病，通常在一旦发病，

12、通常在18个月内死亡个月内死亡 潜伏期的长短与机体免疫状态和感染病毒的量有关潜伏期的长短与机体免疫状态和感染病毒的量有关艾滋病的临床表现艾滋病的临床表现 机会性感染机会性感染 肿瘤肿瘤 艾滋病痴呆综合征艾滋病痴呆综合征 消耗综合症消耗综合症机会感染 所谓机会感染就是说当人体的免疫功能下降时，所谓机会感染就是说当人体的免疫功能下降时，原本已经寄生在人体中一些非致病菌可以造成原本已经寄生在人体中一些非致病菌可以造成的疾病，或者是对致病菌的易感性增加所造成的疾病，或者是对致病菌的易感性增加所造成的机会感染，而这种感染，对于一个具有正常的机会感染，而这种感染，对于一个具有正常免疫功能的人来说，不会造成

13、疾病状态。免疫功能的人来说，不会造成疾病状态。主要病原：病毒感染，卡氏肺孢子虫肺炎，分主要病原：病毒感染，卡氏肺孢子虫肺炎，分支杆菌感染，霉菌感染，细菌感染，弓形体病，支杆菌感染，霉菌感染，细菌感染，弓形体病，隐孢子虫病。隐孢子虫病。艾滋病检测实验室管理艾滋病检测实验室管理实验室（Laboratory）实验室：也称试验室，是进行科学实验或试验实验室：也称试验室，是进行科学实验或试验的场所。根据学科领域的不同，实验室可分为生的场所。根据学科领域的不同，实验室可分为生物实验室、化学实验室和物理学实验室。物实验室、化学实验室和物理学实验室。病原微生物实验室：指从事传染性物质操作活病原微生物实验室：指

14、从事传染性物质操作活动的实验室，主要有研究用实验室、临床检验实动的实验室，主要有研究用实验室、临床检验实验室、公共卫生实验室、传染病监测实验室等。验室、公共卫生实验室、传染病监测实验室等。艾滋病检测实验室艾滋病检测实验室 是指对人体血液、其他体液、组织器官、血液是指对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测的所有实验室的统称。关免疫指标检测的所有实验室的统称。艾滋病检测包括监测、检验检疫、自愿咨询检艾滋病检测包括监测、检验检疫、自愿咨询检测、临床诊断、血液及血液制品筛查测、临床诊断、血液及血液制品筛查艾

15、滋病检测实验室要素艾滋病检测实验室要素人员要求人员要求试剂要求试剂要求 样本要求样本要求 技术要求技术要求 环境要求环境要求设备要求设备要求实验室管理原则实验室管理原则 在不同等级的实验室，建立统一的实验室操作规在不同等级的实验室，建立统一的实验室操作规程和生物安全要求标准程和生物安全要求标准 根据不同的生物安全级别，实验室装备必要的实根据不同的生物安全级别，实验室装备必要的实验与防护设备验与防护设备 实验室实行严格的科学化管理实验室实行严格的科学化管理目的：目的：按照实验技术、科学规律，利用物理、化学按照实验技术、科学规律，利用物理、化学、生物生物、辐射等各种方法，得到一个接近真值的一辐射等

16、各种方法，得到一个接近真值的一个近似值。个近似值。实验室规范化管理依据实验室规范化管理依据1、国家实验室认可和计量认证国家实验室认可和计量认证要求要求2、实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求 GB19489-2004）3、微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 (WS233-2002),2002.4、生物安全实验室建设技术规范生物安全实验室建设技术规范 （GB50346-2004）实验室规范化管理依据实验室规范化管理依据5、医学实验室医学实验室 质量和能力的专用要求质量和能力的专用要求6、检测和校准实验室能力的通用要求检测和校准实验室能力的通用要求7、全国艾滋病检测工作管理办法全国艾滋病检测工作管理办法（2006)8、全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范（2009)艾滋病检测工作管理历程艾滋病检测工作管理历程1990.全国全国HIV检测管理规范（试行）检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范全国艾滋病检测工作规范2003.5.全国艾滋病检测技术规范（试行）全国艾滋病检测技术规范（试行）“规范规范”2004.8 全国艾