革兰染色标准操作规程.docx

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1、革兰染色标准操作规程1 .目的规范革兰染色标准操作规程。2 .细菌样本理紫色草酸盐结晶复合物染色，之后用Lugol-PVP媒染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。经乙醇丙酮的脱色作用，革兰阴性菌中的结晶紫会被洗脱。番红精则是作为复染剂：革兰阴性菌呈现粉红色，而革兰阳性菌呈现紫色。3 .试剂3.1. 结晶紫草酸盐溶液：结晶紫2%、乙醇20%、草酸0.8%3.2. 稳定LugoI-PVP复合物:碘1.3%、碘化钾2%、PVP（聚乙烯咯烷酮）10%3.3. 脱色剂：95%乙醇50%、丙酮50%e3.4. 番红精溶液：番红精0.25%、95%乙醇10%o4 .操作步骤4.1. 初染：第一液初染剂（结晶

2、紫）染色IOsx水洗42媒染：第二液媒染剂（碘液）染色10s,水洗。43.脱色：第三液脱色剂（95%乙醇）脱到无紫色脱落为止,1020s水洗。4.4. 复染：第四液复染剂（石炭酸复红或沙黄）染色IOs,水洗。自然干燥后镜检。5 .质量控制5.1. 采用大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株，每周1次有室内质控记录。5.2. 采用金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株每周1次有室内质控记录。6 .结果判断革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。革兰氏阳性菌(G+)显紫色(图片源于优瑞生物)革兰氏阴性菌(G-)显红色(图片源于优瑞生物)X7 .SSWI页7.1. 染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。7.2. 在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌做阳性及阴性对照。73.染色关键在于涂片和脱色,涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。7.4.菌龄以1824h为佳。8.用途8.1. 鉴别细菌：可将细菌分为阳性和阴性两大类,因而可以初步识别细菌,缩小范围,有利于进/鉴定。8.2. 选择药物：革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。