碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析及分子流行病学研究.docx

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1、碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析及分子流行病学研究何秀娟1,宋其华1,田家辰2,叶惠娟I,王红I,陈胜男11 .北京市昌平区医院检验科，北京，1022002 .内蒙古自治区锡林郭勒盟太卜寺旗旗医院检验科，锡林郭勒盟，027(XX)目的:探讨碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbanannii,A.baumanni)的耐药性及分子流行病学，为院内感染控制及临床合理用药提供理论依据。方法:.对我院临床分离的47株非重复性碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌，用VlTEK2Compact分析系统检测药物敏感性，应用多位点序列分型(MUItiIOCUSSeqUenCetyPing,MLST)技术

2、进行分子流行病学研究，应用eBURST软件对多位点序列分型结果进行分析。结果：47株鲍曼不动杆菌主要来源于痰标本(38,80.9%)：临床科室分布在内科重症监护病房(MICU)(31,66%)、呼吸科(5,10.6%)、重症监护病房(ICU)(4,8.5%)等；抗菌药物敏感率除阿米卡星81.4%、复方新诺明41.9%、替加环素40%之外，其他检测药物的敏感率均低于5%；经扩增得到4种ST分型，以ST208(25株，53.2%)、STl95(19株，40.4%)为主，经eBURST分析都属于克隆复合体92(。OnalComPIeX92,CC92)。结论：碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌对大多数抗菌药物的

3、耐药率很高，CC92克隆株在医院流行播散，临床要重视碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的预防和控制。关键词:鲍曼不动杆菌、耐药性、多位点序列分型AnalysisofantimicrobialresistanceandmolecularepidemiologyofCarbapenemresistantAcinetobacterbaumanniiHEXiu-juanl,SONGQi-hual,TIANJia-chen2,YEHui-juanl,WANGHong1,CHENSheng-nan11.ChangpingHospital,Beijing,1022002.XilinGolLeagueinInner

4、MongoliaAutonomousRegion,TaipusiBannerHospital,027000Objective:ToinvestigateantimicrobialresistanceandmolecularepidemiologyofCarbapenemresistantAcinetobacterbaumanniiandprovidetheevidenceofthecontrolofnosocomialinfectionandrationaluseofantibiotics.Methods:Thedrugsensitivityof47nonrepetitiveCarbapene

5、mresistantAcinetobacterbaumanniiwasdetectedbyVITEK2Compact.ThemolecularepidemiologywasstudiedbyMultilocussequencetyping(MLST)andeBURSTsoftware.Results:47strainsofAcinetobacterbaumanniiisolatedfromsputumspecimens(38,80.9%)；TheclinicaldepartmentsweredistributedinthemedicalintensivecareUnit(MICU)(31,66

6、%)respiratorydepartment(5,10.6%)andintensivecareunit(ICU)(48.5%),etc.47strainsofAcinetobacterbaumanniiweresensitivetoamikacin81.4%,41.9%totrimethoprimsulfamethoxazoleand40%totegacycline.Thesensitivityofotherdrugswasless(han5%,4typesofSTtypeswereamplifiedbyamplication.withST208(25.53.2%)andST195(19,4

7、0.4%).EBURSTanalysisfoundthattheSTtypesbelongedtotheclonecomplex92(ClonalComplex92,CC92).Conclusions:theresistanceofCarbapenemresistantAcinetobacterbaumanniitomostantibioticsisveryhigh,andCC92cloneiswidelydisseminatedinhospitals,AttentiontothepreventionandcontrolofCarbapenernresistantacinetobacterba

8、umanniiinfection.Keywords:Acinetohacterbaumannii,antimicrobialresistance,MLST鲍曼不动杆菌是我国院内感染的重要条件致病菌之一，随着抗菌药物的普遍使用，碳育霉烯耐药鲍曼不动杆菌(CarbapenemresistantAcinetobacterhaunannii,CRAB)的检出率和耐药性在逐年上升。中国细菌耐药监测研究2017至2018年革兰阴性菌监测报告显示，鲍曼不动杆菌对多数被测药物的耐药率大于70%,对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率约在70%,耐药率低于30%的抗菌药物不多，依次为多黏菌素E(3.3%)、替加环素(11

9、.0%)和米诺环素(27.3%)1,o本研究主要对碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌进行药物敏感性分析和同源性分析，为我院临床治疗和院感控制提供重要的理论依据。1材料与方法1.1 菌株来源收集本院2017-2019年住院和门诊患者分离鲍曼不动杆菌200株，其中碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌47株，2017年12株(34.1%)、2018年19株(40.4%)和2019年16椒25.5%),已剔除了同一患者的重复菌株。所有菌株经Vitek2Compact分析系统鉴定，确定为鲍曼不动杆菌。药物敏感性试验的质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853o1.2 方法1.2.1 药敏试验采用V

10、ilek2Compact分析系统测定所有菌株对抗菌药物(头抱替坦、头袍他咤、头抱曲松、头抱毗后、环丙沙星、左旋氧氨沙星、庆大霉素、妥布霉素、复方新诺明、氨节西林/舒巴坦、替加环素、阿米卡星)的最低抑菌浓度(minimalinhibitionconcentration,MIC)o根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)2019判断标准进行药物敏感性判断，其中替加环素结果参照美国食品药品管理局(FOodandDrugAdministration,FDA)判读标准，MIC2ug/ml为敏感，MIC28ugml为耐药。应用Whonet5.6软件进行耐药率的统计分析。1.2.2 提取DNA采用煮沸法提

11、取菌株DNAo先在无菌管内加入200ul无菌水，从血平板上刮取适量新鲜培养的菌落进行稀释，水浴IO(TClo分钟，然后以12000rmin的速度离心IOmin,取上清液于另一干净无菌的管中，即为所需DNA,放置20冰箱保存。1.2.3 多位点序列分型(Multilocussequencetyping,MLST)用PCR扩增鲍曼不动杆菌MLST的7个管家基因fltA.gyrB.gdhB、recA、CPn60、gpi和toD,310引物序见表1.表1鲍星不动杆菌MLST分型引物序列和产物大小Primer名称引物序列StO3，)产物大小(bp)gitA-?AATTTACAGTGGCACATrAGGT

12、CCC723gARGcagagataccagcagagatacacggyr-FGaatgctggtgtacgtatcg775XyrB-RAcgctcaacgttcaggatctrecA-FCctgaatcttctggtaaaac425wc-RGtttctgggctaccaaacataaccpn60-FActgtacttgctcaagc480cpn60RTtcagcgatgataagaagtggroDFCtaagcgttcgcctaactctrpoDRCtcaagtagcggctctgattgdhbFTggccagccatagttaccacgdhbRAtgctttgttatgggggccagpi

13、-FGaaatttccggagctcacaagpi-RTcaggagcaataccccactc1479713386所有PCR产物送擎科测序公司进行测序。将测序结果在鲍曼不动杆菌数据库，可获得各管家基因对应的等位基因编号。将各菌株管家基因的等位基因编号按顺序gltA-gyrB-gdhb-rec-cpn60-gpi-rpoD排列组合，每个组合获得个对应的序列型（SeqUenCetype,ST）,以此标识每株菌株的分型。应用eBURST软件对获得的ST型数据进行进化关系分析。2结果2.1 菌株基本特征：47株碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌来源于2017-2019年临床分离菌株，12株来源于2017年（34

14、.1%）、19株来源于2018年（40.4%）和16株来源于2019年（25.5%）。三年来碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）的发生率逐年上升，由18.2%增加到28.1%,不同年份碳育霉烯耐药鲍曼不动杆菌（CRAB）发生率及科室分布情况见表2。47株鲍曼不动杆菌的标本类型以痰液（38株，80.9%）为主，还包括全血（4株，8.5%）、肺泡灌洗液（3株，6.4%）.分泌物（1株，2.1%）和脑脊液（1株，2.1%）。分离的菌株主要来源于老年男性患者，男性27株，占57.4%；女性20株，占42.6%。按年龄，265岁有41株，占87.2%；38-64岁有6株，占12.8%。表247株碳青霉烯

15、耐药鲍曼不动杆菌发生率及临床科室株数分布年份AB株数CRABCRAB不同科室的株数（株）（株）发生率MICU呼吸ICU肿瘤综合内科心内二骨二中医科合计2017年6618.2%8I111122018年7724.7%1213111192019年5728.1%1131116合计20023.5%315422111472.2 药敏试验结果：47株碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌对头衔替坦、头狗他咤、头抱曲松、头孑包毗后、环丙沙星、氨苇西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素、左旋氧氟沙星、复方新诺明、替加环素、阿米卡星的耐药率分别为100%、100%、100%、Io0%、Io0%、97.4%、95.3%、93%、81.4%、58.1%、40乐18.6%。见表3。表347株碳吉霉烯耐药篦及不动杆菌药物敏感性抗生素名称R(%)1(%)S(%)头抱药坦10000头抱他喔10000头抱曲松10000头抱吐强10000环丙沙星10000氨苇西林/舒巴坦97.42.60庆大霉素95.32.32.3